一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、试剂盒和检测方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、试剂盒和检测方法及应用，涉及分子标记辅助育种技术领域。本发明专利技术所述分子标记引物对，基于枇杷八氢番茄红素合成酶基因EjPSY2A在黄肉和白肉枇杷品种间的序列差异设计得到，利用所述分子标记引物对进行PCR扩增，当PCR扩增产物为小片段纯合带型材料的果实为白肉，而大片段纯合带型以及大片段与小片段杂合带型材料的果实为黄肉，可以有效地把黄肉和白肉枇杷种质资源和杂交后代区分开来，准确率100％，可用于枇杷果肉颜色的分子标记辅助育种。种。种。

【技术实现步骤摘要】
一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、试剂盒和检测方法及应用


[0001]本专利技术属于分子标记辅助育种
，具体涉及一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、试剂盒和检测方法及应用。

技术介绍

[0002]枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)是原产于我国四川大渡河流域的特色水果，其果实甜酸适口、柔软多汁，受到世界各国消费者的喜爱。枇杷品种丰富多样，生产上常依据果肉颜色将枇杷品种划分为黄肉枇杷和白肉枇杷两种类型。黄肉枇杷果肉较紧密，果皮较厚，较耐贮运，抗逆性强，平均单果重较大，而白肉枇杷肉质细嫩、汁多味甜，因其风味好、口感佳而更受消费者的青睐。
[0003]果肉颜色是枇杷果实的重要的农艺性状，选育不同果肉颜色的枇杷新品种/系成为果树育种家共同追求的目标。但枇杷杂交实生苗童期较长，基于果肉颜色性状的枇杷育种材料筛选需耗费育种者大量的时间和精力。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、试剂盒和检测方法及应用，利用所述分子标记可准确的将黄肉和白肉枇杷种质资源区分。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对，所述分子标记引物对包括PSY2A
‑
1F和PSY2A
‑
1R的组合，或PSY2A
‑
2F和PSY2A
‑
2R的组合；
[0007]所述PSY2A
‑
1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述PSY2A
‑
1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0008]所述PSY2A
‑
2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述PSY2A
‑
2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0009]优选的，所述果肉颜色包括黄色和白色。
[0010]本专利技术还提供了一种鉴定枇杷果肉颜色的试剂盒，所述试剂盒中包括上述分子标记引物对和PCR扩增试剂。
[0011]优选的，所述PCR扩增试剂包括PCR Mix。
[0012]本专利技术还提供了一种鉴定枇杷种质的果肉颜色的方法，包括以下步骤：以枇杷种质的基因组DNA为模板，与上述分子标记引物对或上述试剂盒中的分子标记引物对配制PCR反应体系，进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行基因分型；
[0013]当PCR扩增产物显示为300～400bp长度的一条带时，为白色果肉；当 PCR扩增产物显示为＞500bp长度的一条带时，为黄色果肉；当PCR扩增产物显示为300～400bp和＞500bp两条带时，为黄色果肉。
[0014]优选的，所述基因组DNA来源于枇杷种质的嫩叶或茎尖。
[0015]优选的，所述PCR反应体系以25μL计，包括：1.0μL模板，12.5μL2
×
PCR Mix，1.0μL 10μM的F引物，1.0μL 10μM的R引物和余量的ddH2O。
[0016]优选的，所述PCR扩增的程序包括：4℃预变性4min；95℃变性1min， 55℃退火45s，72℃延伸1min，循环35次；72℃延伸10min。
[0017]优选的，使用1％的琼脂糖凝胶电泳和/或8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳对所述PCR扩增产物进行基因分型。
[0018]本专利技术还提供了上述分子标记引物对或上述试剂盒在分子标记辅助培育目标颜色果肉枇杷种质中的应用。
[0019]有益效果：本专利技术提供了一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对，基于枇杷八氢番茄红素合成酶基因EjPSY2A在黄肉和白肉枇杷品种间的序列差异设计得到，利用所述分子标记引物对进行PCR扩增，当PCR扩增产物为小片段纯合带型材料的果实为白肉，而大片段纯合带型以及大片段与小片段杂合带型材料的果实为黄肉，可以有效地把黄肉和白肉枇杷种质资源及杂交后代区分开来，可用于枇杷果肉颜色的分子标记辅助育种。本专利技术实施例中利用世界各地85份枇杷种质资源及杂交后代进行验证，其中43份白肉枇杷材料带型为纯合的小片段，9份黄肉枇杷带型为纯合大片段，另有33份黄肉枇杷材料的带型为杂合带型，所有黄肉枇杷至少有一条大片段，准确率100％，因此根据带型可以将黄肉和白肉枇杷准确的区分开来。进一步TA克隆结果显示，白肉枇杷的小片段是由于EjPSY2A基因在3
’
端有一段694bp的碱基缺失，为EjPSY2A
d
等位基因；而黄肉枇杷中至少有一个正常的EjPSY2A基因，因此本专利技术可以用于不同果肉颜色枇杷品种选育，对指导枇杷杂交后代早龄选择育种具有重要意义。
附图说明
[0020]图1为完熟期枇杷果皮及果肉颜色(白肉材料：阳光白和贵妃；黄肉材料：大五星和黄丰)；
[0021]图2为使用新设计的Indel引物对10份黄肉和10份白肉枇杷材料PCR 扩增结果；
[0022]图3为Indel分子标记对43份白肉枇杷材料的分型结果；
[0023]图4为Indel分子标记对42份黄肉枇杷材料的分型结果；
[0024]图5为使用TA克隆法检测部分枇杷材料扩增片段的序列(白肉材料： TBW、新白8号和贵妃；黄肉材料：艳红、大五星和TBY)。
具体实施方式
[0025]本专利技术提供了一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对，所述分子标记引物对包括PSY2A
‑
1F和PSY2A
‑
1R的组合，或PSY2A
‑
2F和PSY2A
‑
2R的组合；
[0026]所述PSY2A
‑
1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述PSY2A
‑
1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0027]所述PSY2A
‑
2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述PSY2A
‑
2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0028]本专利技术所述分子标记引物对(表1)可用于鉴定果肉颜色，所述果肉颜色优选包括黄色和白色。
[0029]表1分子标记引物对信息
[0030][0031]本专利技术所述分子标记引物对，优选为基于枇杷八氢番茄红素合成酶基因 EjPSY2A在黄肉和白肉枇杷品种间的序列差异设计得到的Indel分子标记，在枇杷的白肉品种中，EjPSY2A基因在3
’
端发生大片段的缺失导致八氢番茄红素合成酶失活从而致使类胡萝卜素无法正常合成和积累；而在黄肉品种中，EjPSY2A基因序列正常。
[0032]本专利技术还提供了一种鉴定枇杷果肉颜色的试剂盒，所述试剂盒中包括上述分子标记引物对和PCR扩增试剂。
[0033]本专利技术所述试剂盒中除包括上述分子标记引物对外，还包括了PCR扩增试剂，所述PCR扩增试剂优选包括PCR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对，所述分子标记引物对包括PSY2A
‑
1F和PSY2A
‑
1R的组合，或PSY2A
‑
2F和PSY2A
‑
2R的组合；所述PSY2A
‑
1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述PSY2A
‑
1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述PSY2A
‑
2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述PSY2A
‑
2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述分子标记引物对，其特征在于，所述果肉颜色包括黄色和白色。3.一种鉴定枇杷果肉颜色的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1或2所述分子标记引物对和PCR扩增试剂。4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增试剂包括PCRMix。5.一种鉴定枇杷种质的果肉颜色的方法，其特征在于，包括以下步骤：以枇杷种质的基因组DNA为模板，与权利要求1或2所述分子标记引物对或权利要求3或4所述试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋海岩，孙淑霞，江国良，陈栋，涂美艳，李靖，谢红江，
申请(专利权)人：四川省农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：