一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体制造技术

本发明专利技术属于医药科技技术领域，具体为一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体，能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移和促进胃癌细胞的凋亡。发明专利技术了一种pCMV6

【技术实现步骤摘要】
一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体


[0001]本专利技术涉及医药科技
，具体为一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体。

技术介绍

[0002]胃癌是胃粘膜上皮细胞最为常见的恶性肿瘤之一，在发展中国家尤其是在中国，胃癌的发病率和死亡率均居世界前列，尤其是山西更是重中之重。尽管外科手术仍被认为是胃癌治疗的最主要手段，但胃癌患者5年生存率仍不足20％。因此，除了传统的治疗方法，探索胃癌发生发展的潜在分子机制并寻找有效的靶向药物已成为胃癌治疗的关键问题。越来越多的研究发现，长链非编码RNA(LncRNAs)的异常表达有可能引起细胞生物学行为发生变化，导致肿瘤的发生。目前这一类小分子基因的功能以及与此相关的基因调控已成为肿瘤研究的重点。因此，通过对胃癌一种LncRNAs(RNU12)的深入研究，为胃癌的早诊早治及预后恢复提供重要的理论意义。

技术实现思路

[0003]本部分的目的在于概述本专利技术的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
[0004]鉴于现有技术中存在的问题，提出了本专利技术。
[0005]本文发现了RNU12在胃癌中表达下调，具有抑制胃癌细胞增殖、迁移和促进凋亡的作用，并且发现了一种pCMV6
‑
R，可化学合成，具有过表达RNU12，对胃癌具有潜在的治疗作用。/>[0006]为解决上述技术问题，根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了如下技术方案：
[0007]一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体；
[0008]命名为pCMV6
‑
R：
[0009]正义:5
’‑
CACGCCTAAAAAGTAGACTGAC
‑3’
[0010]反义:5
’‑
TAACGGAGAAAACAACGAAAAAA
‑3’
。
[0011]作为本专利技术所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体的一种优选方案，其中：RNU12抑制胃癌细胞的增殖
[0012]体外实验：在两个胃癌细胞系HGC
‑
27和MGC
‑
803中，构建了一个包含RNU12
‑
ORF的脂质载体(pCMV6
‑
R)，分别转染到两个细胞中，通过CCK8(CellCountingKit
‑
8)实验，在0、12、24、48、72和96h后，与空载脂质体(pCMV6
‑
NC)进行比较，发现过表达RNU12能显著抑制HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞增殖；
[0013]体内实验：用携带RNU12
‑
ORF的慢病毒感染HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞，在免疫缺陷裸鼠后侧皮下注射(3
×
106细胞/只)，在7周后发现注射过表达RNU12(pCMV6
‑
R)的裸鼠肿瘤体
积明显小于对照组(pCMV6
‑
NC)的裸鼠。
[0014]作为本专利技术所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体的一种优选方案，其中：RNU12抑制胃癌细胞的侵袭
[0015]体外实验：在两个胃癌细胞系HGC
‑
27和MGC
‑
803中，构建了一个包含RNU12
‑
ORF的过表达脂质载体(pCMV6)，分别转染到两个细胞中进行侵袭实验，在Transwell滤膜上加入40μLmatrigel(0.5g/L)；收集转染空载体pCMV6
‑
NC以及pCMV6
‑
R的HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞，离心重悬细胞，计数调整为2
×
105cell/mL，在Transwell小室中加入400μL细胞悬液，下室沿侧壁加入600μL含10％胎牛血清的DMEM培养基，37℃、5％CO2恒温箱中培养24h，取出小室，吸干上室固定液，甲醇固定后移到预先加入800μL的结晶紫染液的孔中染色；显微镜下拍照并计数侵袭细胞数，发现过表达RNU12能显著抑制HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞侵袭；
[0016]体内实验：用携带RNU12
‑
ORF的慢病毒感染HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞，通过免疫缺陷裸鼠尾静脉注射到体内，5周后处死裸鼠发现，注射过表达RNU12(pCMV6
‑
R)的裸鼠肝脏肿瘤细胞转移数量明显低于注射对照组(pCMV6
‑
NC)的裸鼠。
[0017]作为本专利技术所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体的一种优选方案，其中：RNU12促进胃癌细胞的凋亡
[0018]在HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞中，通过流式细胞术分析表明，与空载脂质体(pCMV6
‑
NC)相比，过表达RNU12(pCMV6
‑
R)能显著促进HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞早期和晚期凋亡；而RNU12在MAPK通路中能介导许多分子mRNA稳定性与肿瘤的发生发展相关。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移和促进胃癌细胞的凋亡，具有促进RNU12表达，对胃癌具有潜在的治疗作用。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施方式的技术方案，下面将结合附图和详细实施方式对本专利技术进行详细说明，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
[0021]图1为本专利技术图1为RNU12基因在大多数胃癌组织中表达下调。通过芯片数据发现，RNU12在胃癌患者表达中存在明显下调(图1A)。在100例胃癌组织和癌旁正常组织中验证了RNU12的表达变化，以及转移和非转移胃癌、不同进展期胃癌的表达变化，发现，与癌旁正常组织相比，RNU12在胃癌组织中表达明显下调(图1B)；在转移性胃癌中RNU12表达低于非转移性胃癌(图1C)；随着胃癌恶性程度的发展，RNU12表达逐渐下降(图1D)。此外，RNU12低表达患者有明显的恶化和较低的生存率趋向。说明RNU12可能参与了胃癌的发生发展。
[0022]图2为本专利技术RNU12对于胃癌的功能具有调控作用。在胃癌细胞中过表达RNU12，发现升高RNU12表达能明显抑制胃癌细胞的迁移(图2A)、侵袭(图2B)和增殖(图2C)，促进胃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体，其特征在于：命名为pCMV6
‑
R：正义:5
’‑
CACGCCTAAAAAGTAGACTGAC
‑3’
反义:5
’‑
TAACGGAGAAAACAACGAAAAAA
‑3’
。2.根据权利要求1所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体，其特征在于：RNU12抑制胃癌细胞的增殖体外实验：在两个胃癌细胞系HGC
‑
27和MGC
‑
803中，构建了一个包含RNU12
‑
ORF的脂质载体(pCMV6
‑
R)，分别转染到两个细胞中，通过CCK8(CellCountingKit
‑
8)实验，在0、12、24、48、72和96h后，与空载脂质体(pCMV6
‑
NC)进行比较，发现过表达RNU12能显著抑制HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞增殖；体内实验：用携带RNU12
‑
ORF的慢病毒感染HGC
‑
27和MGC
‑
803细胞，在免疫缺陷裸鼠后侧皮下注射(3
×
106细胞/只)，在7周后发现注射过表达RNU12(pCMV6
‑
R)的裸鼠肿瘤体积明显小于对照组(pCMV6
‑
NC)的裸鼠。3.根据权利要求1所述的一种对胃癌具有治疗作用的过表达RNU12载体，其特征在于：RNU12抑制胃癌细胞的侵袭体外实验：在两个胃癌细胞系HGC
‑
27和MGC
‑
803中，构建了一个包含RNU12
‑
ORF的过表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：李峰，陈允清，张铭，吕永强，赵晋炜，张勇，
申请(专利权)人：山西省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：