长效多特异性分子和相关方法技术

本发明专利技术涉及多特异性分子，如长效多特异性抗体。还公开了相关的方法。抗体。还公开了相关的方法。

【技术实现步骤摘要】
长效多特异性分子和相关方法
[0001]本申请是基于申请日为2017年10月11日，优先权日为2016年10月17日，申请号为201780063877.7，专利技术名称为：“长效多特异性分子和相关方法”的专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2016年10月17日提交的美国临时申请62/408,865的优先权。该申请的内容以其整体在此引入作为参考。


[0004]本专利技术主要涉及多特异性分子，特别是，涉及长效多特异性抗体和制备并使用长效多特异性结合分子的方法。

技术介绍

[0005]多特异性分子，例如双特异性单克隆抗体(BsAb)，是由两个或更多个不同分子(例如单克隆抗体或其抗原结合部分)组成的人工蛋白质或缀合物。双特异性抗体结合两种不同类型的靶标(例如抗原)并可用于治疗特定疾病。双特异性抗体的临床开发始于90年代早期(Canevari,S.等人1995，J.Hematother 4，423
‑
427；Valone，F.H.等人1995，J.Clin.Oncol.13，2281
‑
2292)。直到十年后，第一种双特异性抗体“卡妥索单抗”(商品名Removab)才于2009年被欧洲药品管理局(EMA)批准在欧洲商业使用。第二种双特异性抗体“博纳吐单抗”(商品名Blincyto)在2014年获得美国FDA批准。双特异性抗体已通过以下制备：通过基于两种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合的四源杂交瘤(quadroma)技术(Milstein，C.等人1983，Nature，305(5934)：p.537
‑
40)或化学缀合两种不同的单克隆抗体或抗体片段(Brennan，M.，等人，1985Science，229(4708)：p.81
‑
3；Glennie，M.J.，等人，1987J Immunol，139(7)：p.2367
‑
75)或最近的重组和融合技术。然而，制备重组双特异性抗体的挑战是将这种有希望的治疗剂带给患者的巨大障碍(Klein C.等人，2012，MAbs.4(6)：653
‑
663)。此外，这些分子中的一些的较短半衰期也严重限制了它们进一步进入临床。此外，在一些疾病应用中，例如实体肿瘤应用，这些分子中的一些要么太大而不能深入渗透到肿瘤组织中，要么在肿瘤组织中的保留时间有限(Thurber，G.M.等人，2007，J.Nuclear Medicine.48(6)：995
‑
999；Minchinton，A.I.等人2006，Nature Reviews Cancer.6：583
‑
592)，其导致较差的治疗结果。因此，需要新的长效双特异性分子和相关的制备方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术通过提供多特异性分子和相关方法解决了上述未满足的需求。
[0007]在一方面，本专利技术提供式的多特异性分子、缀合物或化合物，其中P为非免疫原性聚合物；T为三官能小分子接头部分且具有一个、两个或更多个能与两种不同的蛋白质进行位点特异性缀合的官能团；且A1和A2为任意两种不同或相同的蛋白质。
[0008]特别地，本专利技术一方面提供式Ib的缀合物:
[0009][0010]其中:
[0011]P为非免疫原性聚合物；
[0012]B为H、封端基团或不存在，所述封端基团选自C1‑
50
烷基和芳基，其中所述烷基的一个或多个碳可被杂原子替代；
[0013]T为具有一个、两个或更多个官能团的多官能接头，其中T和(L1)
a
之间的连接以及T和(L2)
b
之间的连接可相同或不同；
[0014]L1和L2各自独立地为双官能接头；
[0015]a和b各自为选自0
‑
10的整数；
[0016]A1和A2可为任何两个不同或相同的蛋白质。例如，A1和A2彼此不同且A1和A2各自独立包括抗体片段、单链抗体或任何其它抗原结合部分或其组合；或A1和A2相同且都为多特异性抗原结合蛋白；且
[0017]y为选自1
‑
10的整数。
[0018]至少一种蛋白质包括识别结合部分。例如，A1包括第一识别结合部分且A2包括第二识别结合部分。两种不同的蛋白质可为两种不同的抗体或其抗原结合部分。在一个实例中，所述两种抗体分别为结合至细胞毒性细胞上的受体的抗CD3抗体和结合至癌细胞受体的抗CD19抗体。该两种抗体可为单链抗体(SCA或scFv)。
[0019]非免疫原性聚合物可选自聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、基于碳水化合物的聚合物、聚环氧烷、聚乙烯醇、羟丙基
‑
甲基丙烯酰胺(HPMA)及其共聚物。优选地，非免疫原性聚合物为PEG，如支链PEG或直链PEG或多臂PEG。在那种情况下，直链PEG或支链PEG的至少一个末端用H、甲基或低分子量烷基封端。PEG的总分子量可以是3,000至100,000，例如5,000至80,000、10,000至60,000和20,000至40,000。PEG可以通过永久键或可裂解键与多官能部分连接。
[0020]在(L1)
a
或(L2)
b
内或(L1)
a
和蛋白质A1之间或(L2)
b
和蛋白质A2之间形成连接的官能团(例如，两个位点特异性缀合官能团)可选自巯基、马来酰亚胺、2
‑
吡啶基二硫基(2
‑
pyridyldithio)变体、芳族砜或乙烯基砜、丙烯酸酯、溴代或碘代乙酰胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛炔(DBCO)、羰基、2
‑
氨基
‑
苯甲醛或2
‑
氨基
‑
苯乙酮基团、酰肼、肟、酰基三氟硼酸钾、O
‑
氨基甲酰基羟胺、反式
‑
环辛烯、四嗪、三芳基膦等。
[0021]在一些实施方案中，(L1)
a
和(L2)
b
之一可包含由叠氮化物和炔烃形成的连接。(L1)
a
和(L2)
b
中另一个可包含由马来酰亚胺和巯基形成的连接。在一些实例中，炔烃可为二苯并环辛炔(DBCO)。在其他实例中，T为赖氨酸，P为PEG，且y为1，而炔烃为二苯并环辛炔(DBCO)。在一些实施方案中，A1和A2之一可衍生自叠氮化物标记的抗体、抗体链、抗体片段或单链抗体，其中所述叠氮化物在各自的(L1)
a
或(L2)
b
中缀合至炔烃；A1和A2中另一个可衍生自巯基标记的抗体、抗体链、抗体片段或单链抗体，其中所述巯基在各自的(L1)
a
或(L2)
b
中缀合至马来酰亚胺。
[0022]上述多特异性分子或化合物可以根据包括以下的方法制备：(i)制备具有末本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.式Ib的化合物:其中:P为非免疫原性聚合物；B为H、封端基团或不存在，所述封端基团选自C1‑
50
烷基和芳基，其中所述烷基的一个或多个碳可被杂原子替代；T为多官能接头；L1和L2各自独立地为双官能接头；a和b各自为选自1
‑
10的整数；A1和A2为两个不同或相同的蛋白质；其中所述蛋白质中的一个或两个包含单个识别结合部分或多个识别结合部分；且y为选自1
‑
10的整数。2.权利要求1所述的化合物，其中A1包含第一识别结合部分且A2包含第二识别结合部分。3.权利要求1或2所述的化合物，其中所述两种不同的蛋白质为两种不同的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分包含单个识别结合部分或多个识别结合部分。4.权利要求3所述的化合物，其中所述两种抗体分别为结合至细胞毒性细胞上的受体的抗CD3抗体和结合至癌细胞受体的抗CD19抗体。5.权利要求3或4所述的化合物，其中所述两种抗体为单链抗体。6.权利要求1
‑
5任一项所述的化合物，其中所述非免疫原性聚合物为聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、基于碳水化合物的聚合物、聚环氧烷、聚乙烯醇、羟丙基
‑
甲基丙烯酰胺(HPMA)或其共聚物。7.权利要求1所述的化合物，其中所述聚合物为直链PEG。8.权利要求1所述的化合物，其中所述聚合物为支链PEG。9.权利要求6
‑
8任一项所述的化合物，其中所述PEG的至少一个末端或分支被甲基或低分子量烷基封端。10.权利要求6
‑
9任一项所述的化合物，其中所述PEG的总分子量为10,000至100,000。11.权利要求6
‑
10任一项所述的化合物，其中所述PEG通过永久键或可裂解键连接至三官能部分。12.权利要求1
‑
11任一项所述的化合物，其中所述双官能接头具有用于与所述抗体或其抗原结合部分进行位点特异性缀合的官能团，其中所述官能团衍生自选自下组的基团：巯基、马来酰亚胺、2
‑
吡啶基二硫基变体、芳族或乙烯基砜、丙烯酸酯、溴代或碘代乙酰胺、叠氮化物、炔烃、二苯并环辛炔(DBCO)、羰基、2
‑
氨基
‑
苯甲醛或2
‑
氨基
‑
苯乙酮基、酰肼、肟、酰基三氟硼酸钾、O
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：SM刘，D乌，
申请(专利权)人：深圳康源久远生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：