一种二酮吗啉生物碱化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种二酮吗啉生物碱化合物及其制备方法和应用，属于海洋真菌活性成分分析技术领域。本发明专利技术从保藏号为CCTCC M 20211214的曲霉属真菌Aspergillus cf.terreus CXX

【技术实现步骤摘要】
一种二酮吗啉生物碱化合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及海洋真菌活性成分分析
，具体涉及一种结构新型的二酮吗啉生物碱化合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]海洋微生物由于其生存环境的艰难苛刻，如高盐、高压、低氧低光照等，在长期的进化过程中能够代谢产生一些结构独特的次生代谢产物。海洋微生物这种独特的代谢途径和遗传背景，使其成为开发新型药物的丰富资源。随着海洋微生物资源获取技术的进步，给海洋微生物源天然药源化合物的研究带来了前所未有的机遇。
[0003]海洋微生物中的海洋真菌是活性次级代谢产物的丰富的来源，海洋真菌的次级代谢产物70
‑
80％具有生物活性，包括小分子内脂化合物；真菌毒素；对中枢神经系统有抑制活性的新物质；1
‑
十二醇、不饱和烃、酸、酯；可抑制植物和人的真菌病毒作用于真菌细胞壁合成新靶位的脂肽类抗生素。以海洋真菌为原料发现具有特定结构类型的天然产物对于海洋药物的研发具有重要意义。
[0004]曲霉属真菌土曲霉(Aspergilluscf.terreus)属于半知菌纲，壳霉目，杯霉科。土曲霉是被广泛应用在化学和制药工业上的已知菌种，近年来从其代谢产物中分离并报道的化合物类型多样且具有较好的药理活性，如抗炎、抗菌以及抗肿瘤等。目前国内外报道中针对土曲霉的研究，主要成果集中于聚酮类、萜类和油脂类等。
[0005]陈修文等从深海来源土曲霉16
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02
‑
1的代谢产物中分离到新曲霉酸、ferrineoaspergillin、(2
’
S)
‑4‑
甲氧基
‑3‑
(2
’‑
甲基
‑3’
羟基)丙羟基
‑
苯甲酸甲酯、黄曲霉素等化合物，对人慢性粒细胞白血病K562细胞、人早幼粒白血病HL
‑
60细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人胃腺癌BGC
‑
823细胞有一定抑制作用[深海来源曲霉16
‑
02
‑
1的代谢产物及其抗肿瘤抗真菌活性初步测评，中国海洋药物，2013年6月，第32卷第3期]。
[0006]专利文献CN111499649A公开从海洋微生物曲霉属真菌AspergillusterreusCC
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S06
‑
18的发酵产物中分离得到一种具有抗肿瘤活性的苯并二呋喃酮类化合物，该化合物具有STAT3抑制活性，对胃癌细胞系有细胞毒性作用，并能诱导细胞周期停滞和凋亡。
[0007]迄今还未查到有文献报道从土曲霉代谢产物中分离得到具有抗肿瘤活性的二酮吗啉生物碱化合物。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于从海洋土曲霉菌的代谢产物中提取获得具有药用价值的天然活性物质。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0010]本专利技术从中国台湾海洋沉积物中分离得到曲霉属真菌土曲霉(Aspergilluscf.terreus)CXX
‑
158
‑
20，对其在大米固体培养基中培养产生的次级代谢产物的化学成分及其生物活性进行了深入的研究，通过正向柱、反向柱、分子筛、高效液相色谱等手段从该
菌代谢产物的乙酸乙酯提取物中分离纯化得到了3个单体二酮吗啉生物碱化合物。所述化合物的结构式选自式 (Ⅰ)
‑
(Ⅲ)，
[0011][0012]上述3个化合物为具有二酮吗啉和多取代苯环的二酮吗啉生物碱化合物。结构式如式(Ⅰ)所示的土曲霉吗啉A(化合物I)的分子式为C
26
H
28
N2O6，结构式如式(Ⅱ)所示的开环土曲霉吗啉A(化合物II)的分子式为 C
27
H
32
N2O6，结构式如式(Ⅲ)所示的开环土曲霉吗啉B(化合物III)的分子式为C
27
H
32
N2O7。
[0013]本专利技术还提供了所述二酮吗啉生物碱化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)将保藏号为CCTCC NO：M 20211214的曲霉属真菌(Aspergillus cf. terreus)CXX
‑
158
‑
20活化后接种于大米固体培养基中，20
‑
30℃静态培养 10
‑
40天；
[0015](2)发酵培养结束后，分离得到菌丝体和发酵液；
[0016](3)将菌丝体加入甲醇中浸提，分离得到浸提液，浸提液浓缩后用蒸馏水混悬，得到水混悬液，然后用乙酸乙酯对水混悬液进行萃取，萃取液分离纯化后，制得二酮吗啉生物碱化合物；
[0017]利用乙酸乙酯对发酵液进行萃取，分离纯化制得二酮吗啉生物碱化合物；
[0018]所述分离纯化包括：a、将萃取液进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:3、1:9的正己烷/ 乙酸乙酯的混合液或者石油醚/乙酸乙酯混合液进行梯度洗脱，收集体积比 6:1和5:1的馏分；b、5:1的馏分用氯仿重结晶得到粗结晶a，再利用高效液相色谱分离，流动相为65％甲醇/水，流速为3mL/min，收集保留时间 23.3min的馏分，得到结构式如式(Ⅰ)的化合物I，收集保留时间28.0min 的馏分，得到结构式如式(Ⅱ)的化合物II；6:1的馏分用体积比为1:5的甲醇/氯仿重结晶得到粗结晶b，再利用高效液相色谱分离，流动相为68％甲醇/水，流速为3mL/min，收集保留时间34.2min的馏分，得到结构式如式(Ⅲ)的化合物III；
[0019]或者，步骤b中，合并6:1和5:1的馏分，进行反相硅胶柱层析，依次以体积比1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的甲醇/水混合液进行梯度洗脱，收集7:3馏分，再利用凝胶LH
‑
20尺寸排阻色谱分离获得目标馏分，继而用高效液相色谱分离，流动相为体积比40％
‑
90％的甲醇/ 水梯度洗脱，流速为10mL/min，保留时间45分钟的峰为化合物I，保留时间47分钟的峰为化合物II，保留时间50分钟的峰为化合物III。
[0020]步骤(1)中，对真菌土曲霉Aspergillus cf.terreus CXX
‑
158
‑
20进行发酵培养。
[0021]作为优选，菌种活化采用PDA培养基，以体积1L计，包括以下原料：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、余量为H2O，pH自然。
[0022]发酵培养采用大米固体培养基，具体的，包括以下原料：每60g大米中添加海盐2g，水90mL，pH为自然。
[0023]优选的，发酵培养的温度为22
‑
26℃。更优选为25℃培养20天。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二酮吗啉生物碱化合物，其特征在于，所述化合物的结构式选自式(Ⅰ)
‑
(Ⅲ)，2.如权利要求1所述的二酮吗啉生物碱化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将保藏号为CCTCC NO：M 20211214的曲霉属真菌(Aspergillus cf.terreus)CXX
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20活化后接种于大米固体培养基中，20
‑
30℃静态培养10
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40天；(2)发酵培养结束后，分离得到菌丝体和发酵液；(3)将菌丝体加入甲醇中浸提，分离得到浸提液，浸提液浓缩后用蒸馏水混悬，得到水混悬液，然后用乙酸乙酯对水混悬液进行萃取，萃取液分离纯化后，制得二酮吗啉生物碱化合物；利用乙酸乙酯对发酵液进行萃取，分离纯化制得二酮吗啉生物碱化合物；所述分离纯化包括：a、将萃取液进行正相硅胶柱层析分离，依次以体积比9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:3、1:9的正己烷/乙酸乙酯的混合液或者石油醚/乙酸乙酯混合液进行梯度洗脱，收集体积比6:1和5:1的馏分；b、5:1的馏分用氯仿重结晶得到粗结晶a，再利用高效液相色谱分离，流动相为65％甲醇/水，流速为3mL/min，收集保留时间23.3min的馏分，得到结构式如式(Ⅰ)的化合物I，收集保留时间28.0min的馏分，得到结构式如式(Ⅱ)的化合物II；6:1的馏分用体积比为1:5的甲醇/氯仿重结晶得到粗结晶b，再...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴斌，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：