新型多肽制造技术

本发明专利技术涉及新型多肽。具体地，本发明专利技术提供了双特异性多肽，如双特异性抗体，所述双特异性多肽包含能够特异性结合第一T细胞靶标的第一结合域和能够特异性结合第二T细胞靶标的第二结合域，其中所述第一T细胞靶标和所述第二T细胞靶标是不同的靶标。本发明专利技术还提供了所述双特异性多肽的组合物以及其方法和用途。所述第一T细胞靶标和/或所述第二T细胞靶标可以选自由以下各项组成的组：OX40、CTLA

【技术实现步骤摘要】
新型多肽
[0001]本申请是申请号为201680028916.5，申请日为2016年5月20日，专利技术名称为“新型多肽”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及特异性结合两种不同的T细胞靶标的双特异性多肽。示例性T细胞靶标包括OX40、CTLA
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4以及CD137，特别是人类OX40、人类CTLA
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4以及人类CD137。

技术介绍

[0003]癌症是发达国家的过早死亡的主要原因。癌症的免疫治疗旨在发动对抗肿瘤细胞的有效免疫应答。这可以通过例如破坏对肿瘤抗原的耐受性、增强抗肿瘤免疫应答、以及刺激肿瘤部位处的局部细胞因子应答来实现。持久的抗肿瘤免疫应答的关键效应细胞是激活的肿瘤特异性效应T细胞。激活的效应T细胞的有效扩增可以使免疫应答朝向肿瘤重定向。在这种背景下，调节性T细胞(Treg)在抑制抗肿瘤免疫中起作用。消耗Treg、抑制Treg、逆转Treg或使Treg失活因此可以提供抗肿瘤作用并且逆转在肿瘤微环境中的免疫抑制。此外，例如树突状细胞对效应T细胞的不完全激活可以引起T细胞无能，这导致低效的抗肿瘤应答，而树突状细胞的充分诱导可以产生激活的效应T细胞的有效扩增，从而使免疫应答朝向肿瘤重定向。此外，自然杀伤(NK)细胞通过攻击具有下调的人类白细胞抗原(HLA)表达的肿瘤细胞以及通过诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)而在肿瘤免疫学中起重要作用。刺激NK细胞因此也可以减少肿瘤生长。
[0004]OX40(另外被称为CD134或TNFRSF4)是主要在激活的T细胞(主要是CD4+效应T细胞，而且还有CD8+效应T细胞和调节性T细胞(Treg))上表达的TNFR家族的成员。在小鼠中，所述表达在Treg上是组成型的，但是在人类中不是这样。OX40表达通常在激活(T细胞受体接合)的24小时内发生并且在48小时
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72小时后达到峰值。OX40刺激对于激活的T细胞的存活和增殖来说是重要的。OX40的唯一已知的配体是OX40L，它主要在抗原提呈细胞，如树突状细胞和B细胞上表达，通常是在它们激活后表达。OX40介导的T细胞激活的最终结果是诱导TH1效应T细胞激活谱和例如经由ADCC或ADCP降低Treg细胞的活性和/或数目。总体而言，这些作用可以促进抗肿瘤免疫。OX40在许多实体肿瘤，如黑色素瘤、肺癌以及肾癌中在调节性T细胞上过表达。
[0005]小鼠肿瘤模型的OX40激动剂处理已经被证实会产生抗肿瘤作用并且治愈几种不同的癌症形式，包括黑色素瘤、神经胶质瘤、肉瘤、前列腺癌、结肠癌以及肾癌。所述数据与肿瘤特异性T细胞应答相一致，所述应答涉及CD4+T细胞和CD8+T细胞这两者，类似于在CD40激动剂处理的情况下所看到的作用。添加IL
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12和其它细胞因子以及与其它免疫调节剂和化学治疗/放射治疗的组合已经被证实提高了OX40激动剂治疗的治疗作用。来自临床前模型的证据表明抗OX40抗体的作用依赖于激活FcγR。在所有其它治疗均无效的晚期患者中测试小鼠抗人类OX40克隆9B12的I期临床研究已经在普罗维登斯癌症中心(Providence Cancer Centre)进行。所述抗体是被良好耐受的。观测到肿瘤缩小以及CD4+T细胞和CD8+T
细胞增殖的增加。低毒性可能是由短半衰期和抗药物抗体(所述抗体是小鼠抗体)引起的，而且也可能由非激活的T细胞上OX40的相对低的表达水平所引起。这种抗体的抗肿瘤作用是不太大的。
[0006]CD137(4
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1BB、TNFRSF9)也是TNFR家族的成员。CD137的激活依赖于受体低聚化。CD137在激活的CD4+T细胞和CD8+T细胞、Treg、DC、单核白细胞、肥大细胞以及嗜酸性粒细胞上表达。CD137激活在CD8+T细胞激活和存活中起重要作用。它维持和增强而不是引发效应功能并且优先地支持TH1细胞因子产生。在CD4+T细胞中，CD137刺激最初引起激活并且随后引起激活诱导的细胞死亡，这可能解释了为何CD137激动性抗体已经在肿瘤免疫中以及在自身免疫中显示出治疗作用。CD137还抑制Treg功能。在由细胞因子或CD16激活的NK细胞上CD137上调。NK细胞上CD137的激活已经被证实提高了NK细胞在鼠类细胞和人类细胞这两者中的ADCC活性。此外，CD137在诸如树突状细胞和巨噬细胞的抗原提呈细胞上表达，并且这些细胞类型上的CD137的刺激可以诱导免疫激活，所述免疫激活可以引起肿瘤定向免疫。CD137激动性抗体还已经被证实在肿瘤环境中激活内皮细胞，从而引起ICAM
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1和VCAM
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1的上调和提高的T细胞募集。几项研究已经证实通过用激动性CD137抗体治疗来诱导肿瘤免疫。
[0007]两种CD137抗体处在临床开发中。优卢单抗(urelumab)(BMS
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66513)是由百时美施贵宝公司(Bristol
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Myers Squibb)开发的一种完全人类IgG4抗体。各种适应症的几项I期和II期研究目前正在进行。使用优卢单抗作为转移性黑色素瘤的第二线治疗的II期研究由于致命性肝毒性而在2009年终止。处在临床开发中的另一种CD137 mAb是PF
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05082566，它是由辉瑞公司(Pfizer)开发的一种完全人类IgG2抗体。它目前处在淋巴瘤和各种实体癌症的I期开发中，并且初步数据表明它是被良好耐受的，但是仅具有不太大的抗肿瘤作用。
[0008]靶向CD137或OX40的现有抗体一般依赖于经由例如其它细胞上的Fcγ受体的交联以诱导向表达对应受体的细胞中的强信号转导。因此，当没有提供这样的交联时，它们不会有效地进行信号转导。此外，经由TNF受体家族成员的长期和连续的激活可能导致免疫耗竭。
[0009]T细胞受体CTLA
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4用作T细胞激活的负调节因子，并且在初始激活后在T细胞表面上被上调。CTLA
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4受体的配体是B7蛋白，它们由抗原提呈细胞表达。引起T细胞激活上调的相应配体受体对是CD28
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B7。经由CD28的信号转导构成了共刺激通路，并且跟随经由识别由MHC复合物所提呈的抗原肽的T细胞受体的T细胞激活。通过阻断CTLA
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4与B7
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1配体和/或B7
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2配体的相互作用，免疫应答的正常检查点之一可以被去除。最终结果是可以促进抗肿瘤免疫的效应T细胞的活性增强。如同OX40一样，这可能是因为效应T细胞的直接激活，但也可能是因为Treg细胞的活性和/或数目降低，例如经由ADCC或ADCP。临床研究已经证实，阻断CTLA
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4产生抗肿瘤作用，但是施用抗CTLA
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4抗体已经与毒副作用相关。CTLA
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4在许多实体肿瘤，如黑色素瘤、肺癌以及肾癌中在调节性T细胞上过表达。
[0010]需要仅靶向一种T细胞靶标，如OX40或CD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CD137特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:185的互补决定区(CDR)，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:187的CDR。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区的CDR包含SEQ ID NO:209、214和219，并且其中所述轻链可变区的CDR包含SEQ ID NO:80、81和224。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO：185，并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO：187。4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自：Fv片段、单链Fv片段、二硫键键合的Fv片段、Fab样片段、Fab片段、Fab'片段、F(ab)2片段和域抗体。5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含人Fc区。6.根据权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人Fc区是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区。7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其以小于10
×
10
‑9M的K
D
结合人CD137。8.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其诱导CD8+T细胞活性的增加。9.根据权利要求8所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述CD8+T细胞活性的增加是CD8+T细胞的增殖、IFN
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γ产生和/或IL
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2产生的增加。10.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其与另外的治疗部分缀合。11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述另外的治疗剂是细胞毒性部分或药物。12.一种组合物，其包含如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段和至少一种药学上可接受的稀释剂或载体。13.一种双特异性抗体，其包含第一表位特异性的第一抗体或其抗原结合片段和第二表位特异性的第二抗体或其抗原结合片段，其中所述第一抗体或其抗原结合片段是权利要求1的抗体或其抗原结合片段。14.根据权利要求13所述的双特异性抗体，其中所述第一抗体或其抗原结合片段和所述第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：鳄鱼生物科学公司，
类型：发明
国别省市：