一种纯化17F型肺炎球菌多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种简化的、安全的、有效的纯化17F型肺炎球菌多糖的工艺。本发明专利技术的方法，菌液粗裂解液经超滤置换成含0.85％NaCl的0.01mol/L磷酸盐缓冲液PBS，然后添加CTAB反应后直接收集上清液，不再需要进行氯化钠解聚离心步骤，具有工艺流程简化、易于操作、生产的多糖杂质含量更低、产量更高的特点，减少了工艺步骤，节省了工艺用时和生产成本、生产的多糖更加安全有效，值得在荚膜多糖疫苗生产中推广、使用。使用。使用。

【技术实现步骤摘要】
一种纯化17F型肺炎球菌多糖的方法


[0001]本专利技术属于生物制药领域，涉及一种纯化17F型肺炎球菌多糖的方法。

技术介绍

[0002]肺炎球菌多糖疫苗生产因为涉及多个复杂的生产过程而成本高昂，如细菌培养，荚膜多糖纯化等。因此，改进以上步骤的任一步骤都有助于提高疫苗生产成本的效益比。
[0003]20世纪50年代，Scott首先发现十六烷基三甲基铵(CTAB)对酸性多糖有较强的沉淀作用，能与多糖形成季胺络合物而沉淀多糖。十六烷基三甲基铵(CTAB)是一种阳离子表面活性剂，具有从低离子强度溶液中沉淀酸性物质的特性，已经被广泛用于从多种细菌培养上清液中沉淀荚膜多糖。在高离子强度的溶液中，CTAB与蛋白质和多糖形成复合物。该反应基于CTAB的正电荷与CPS负电荷之间的相互作用。
[0004]现有使用CTAB沉淀17F型肺炎球菌多糖的工艺中，如美国专利需要将肺炎球菌粗裂解物进行浓缩透析，透析液使用pH值中性的磷酸盐溶液，然后向浓缩液中加入CTAB以分离多糖与蛋白质、核酸等杂质，反应完成后收集沉淀，向沉淀中加入氯化钠进行解聚，然后进行本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纯化肺炎球菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将17F型肺炎链球菌经发酵、灭活、离心、澄清后得到菌液上清；(2)将菌液上清使用截留分子量为100Kd的超滤膜包进行浓缩和透析，使用中性pH值的磷酸盐缓冲溶液完成透析，透析结束后收集超滤浓缩液；(3)向超滤浓缩液中加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)至终浓度为1％，分离多糖与蛋白质、核酸等杂质，离心收集上清得到CTAB上清液；(4)向CTAB上清液中加入碘化钠(NaI)至终浓度为0.5％以沉淀CTAB，离心收集上清得到NaI上清液；(5)将NaI上清液经超滤浓缩后使用阳离子交换柱进行纯化、经超滤、冻干后收获多糖。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该纯化工艺适用于肺炎链球菌血清型17F型。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中超滤透析液为含0.85％NaCl的0.01mol/L磷酸盐缓冲液PBS，pH值为中性。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中CTAB反应完成后，收集上清液，无需进行氯化钠解聚即可进行后续的碘化...

【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞峰，林彦彬，苏晓叶，杜琳，刘刚，朱卫华，
申请(专利权)人：重庆智飞生物制品股份有限公司安徽智飞龙科马生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：