一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针。所述的引物包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述的上游引物的序列为5

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物试剂盒
，尤其涉及一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针及试剂盒。

技术介绍

[0002]在生物制品的生产过程中，需要使用特定方法去除或灭活部分病毒活性，从而保证该生物制备在临床使用中的安全性。为了检测病毒去除或灭活效果，需要使用一些检测方法对生物制品进行检测。痘病毒作为生物制品病毒安全性评价的一个重要指标，其标志病毒牛痘病毒的快速检测成为安全性评价中的重要环节。常规的生物制品安全评价方法中，多使用传统检测方法，例如细胞实验、动物抗体产生实验，存在操作复杂、耗时长、误差大以及成本高等问题，严重限制生物制品的生产推广。荧光定量PCR技术能够缩短实验周期，减少污染物，并且具有高灵敏度以及高特异性等优势从而渐渐推广开来，但是针对具体病毒，荧光定量PCR的实时准确的检测效果是建立在所选取的引物和探针的基础上的，因此，用于检测牛痘病毒的引物和探针成为研究的重点。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种能够简单、快速地检测牛痘病毒的引物、探针及试剂盒。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0005]一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，所述的引物包括上游引物和下游引物，所述的上游引物的序列为5
’‑
ACGCCAACAACGGACCACAT
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列，优选具有至少85％的同源性，进一步优选具有至少90％的同源性，更优选具有至少95％的同源性；
[0006]所述的下游引物的序列为5
’‑
TAGTCGCGATGCTGCTGACG
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列，优选具有至少85％的同源性，进一步优选具有至少90％的同源性，更优选具有至少95％的同源性；
[0007]所述的探针的序列为5
’‑
GCGTTTGGATCTGCGCCGTG
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列，优选具有至少85％的同源性，进一步优选具有至少90％的同源性，更优选具有至少95％的同源性。
[0008]优选地，所述的引物扩增片段大小为180～185bp。
[0009]优选地，所述的上游引物的长度、所述的下游引物的长度和所述的探针的长度独立地为18～22bp，进一步优选为19～21bp。
[0010]优选地，所述的上游引物的GC含量为50～60％，进一步优选为52～58％，更进一步优选为54～56％。
[0011]优选地，所述的下游引物的GC含量为55～65％，进一步优选为58～64％，更进一步优选为59～61％。
[0012]优选地，所述的探针的GC含量为60～70％，进一步优选为62～68％，更进一步优选
为64～66％。
[0013]优选地，所述的探针的5
’
端连接有荧光报告基团，所述的探针的3
’
连接有荧光淬灭基团。
[0014]优选地，所述的荧光报告基团为FAM；所述的荧光淬灭基团为TAMRA或BHQ。
[0015]一种快速鉴别牛痘病毒的试剂盒，所述的试剂盒包括所述的引物、探针。
[0016]优选地，所述的试剂盒还包括DNA标准品，所述的DNA标准品的序列为ACGCCAAC AACGGACCACATCCTTCTTCATCAACCGAGTTGTTAATCTTGGCTCCATACTGTACCAA TAAATTTATTCTCTCTATGACTTCATCATCTGTTCCCGAGAGATAATATAGAGGTGTTTT ATTATGTTTATCACACGCGTTTGGATCTGCGCCGTGCGTCAGCAGCATCGCGACTA。
[0017]优选地，所述试剂盒还包括扩增试剂BeyoFast Probe qPCR Mix(2
×
)。
[0018]一种如所述的引物、探针和/或如所述的试剂盒在检测生物制品中牛痘病毒中的应用。
[0019]一种快速鉴别牛痘病毒的方法，所述的方法为以待检测生物制品中的DNA为模板，采用引物、探针进行荧光定量PCR反应，采集荧光信号以确定所述的待检测生物制品中的牛痘病毒的含量，所述的引物、探针为所述的引物、探针。
[0020]根据实施例，荧光定量PCR的扩增试剂为BeyoFast Probe qPCR Mix(2
×
)，反应条件为95℃预变性2min，95℃变性15sec，60℃退火/延伸30sec，循环数40。在60℃退火延伸时检测荧光信号。
[0021]本专利技术与现有技术相比具有如下优势：
[0022]采用本专利技术的引物探针进行荧光定量PCR检测，具有简单快速，检测灵敏度高，重复性、准确性好，特异性强，回收率高等优点。
附图说明
[0023]图1为以实施例2的样品DNA为模版得到的扩增曲线示意图；
[0024]图2为实施例1得到的扩增曲线示意图(模板浓度从左至右依次为107copies/μL、105copies/μL、103copies/μL)；
[0025]图3为实施例1得到的扩增曲线示意图(模板浓度从左至右依次为107copies/μL、106copies/μL、105copies/μL、104copies/μL、103copies/μL)；
[0026]图4为实施例1得到的扩增曲线示意图(模板浓度从左至右依次为101copies/μL、100copies/μL)；
[0027]图5为对比例1得到的扩增曲线示意图(模板浓度为107copies/μL，无明显扩增曲线)；
[0028]图6为对比例2得到的扩增曲线示意图(模板浓度为107copies/μL，无明显扩增曲线)；
[0029]图7为对实施例3得到的扩增曲线示意图(模板浓度为107copies/μL，结果稳定性较差)。
具体实施方式
[0030]下面结合实施例对本专利技术作进一步描述。但本专利技术并不限于以下实施例。实施例
中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本专利技术各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
[0031]本专利技术针对牛痘病毒DNA设计并筛选了用于荧光PCR定量检测的引物探针，并经大量实验进行验证。
[0032]根据本专利技术，一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，所述的引物包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述的上游引物的序列为5
’‑
ACGCCAACAACGGACCACAT
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列；
[0033]所述的下游引物的序列为5
’‑
TAGTCGCGATGCTGCTGACG
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，所述的引物包括上游引物和下游引物，其特征在于：所述的上游引物的序列为5
’‑
ACGCCAACAACGGACCACAT
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的下游引物的序列为5
’‑
TAGTCGCGATGCTGCTGACG
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列；所述的探针的序列为5
’‑
GCGTTTGGATCTGCGCCGTG
‑3’
，或与其具有至少80％同源性的序列。2.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的引物扩增片段大小为180～185bp。3.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的上游引物的长度、所述的下游引物的长度和所述的探针的长度独立地为18～22bp。4.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的上游引物的GC含量为50～60％；所述的下游引物的GC含量为55～65％；所述的探针的GC含量为60～70％。5.根据权利要求1所述的快速鉴别牛痘病毒的引物、探针，其特征在于，所述的探针的5
’
端连接有荧光报告基团，...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪涛，范培培，
申请(专利权)人：苏州良辰生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：