检测鲍疱疹病毒的引物组及其在构建病毒检测方法和试剂盒中的应用技术

本发明专利技术公开了检测鲍疱疹病毒的引物组及其在构建病毒检测方法和试剂盒中的应用，属于生物检测技术领域。本发明专利技术所述检测鲍疱疹病毒的引物组是根据SEQ ID No:1所示的核酸序列设计的，在此基础上，可将本发明专利技术所述的引物组应用在原位LAMP检测方法中以实现鲍疱疹病毒的快速检测，同时，利用上述原位LAMP检测方法还可以快速完成石蜡组织切片中HaHV

【技术实现步骤摘要】
检测鲍疱疹病毒的引物组及其在构建病毒检测方法和试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及检测鲍疱疹病毒的引物组及其在构建病毒检测方法和试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]鲍疱疹病毒1（Haliotid herpesvirus 1，HaHV
‑
1）是疱疹病毒目（Herpesvirales），软体动物疱疹病毒科（Malacoherpesviridae），鲍疱疹病毒属（Aurivirus）下的唯一种，与感染双壳贝类的另一种软体动物疱疹病毒——牡蛎疱疹病毒（Ostreid herpesvirus 1，OsHV
‑
1）的亲缘关系最近。感染HaHV
‑
1病毒的病鲍主要表现为摄食量减少、活力下降、粘液分泌增多和脱板等非典型症状，出现症状3~7d后即发生大规模死亡。病鲍表现的主要病理特征是腹足神经节、中枢神经与外周神经组织炎症和细胞浸润。渗出的细胞中有大量被病毒感染的血淋巴细胞；感染后期的外套膜、肝胰腺等器官的结缔组织也被病毒侵染。
[0003]HaHV
‑
1感染的临床症状和病理特征仅能作为HaHV
‑
1感染诊断的辅助手段，其确诊需要使用分子生物学技术。例如，Corbeil等基于TaqMan
®ꢀ
qPCR技术，针对病毒开放阅读框（ORF）48设计特异性引物，建立了HaHV
‑
1特异性的实时定量PCR检测方法（Diseases of Aquatic Organisms, 2010, 92(1): 1
‑
10.）。Mohammad等基于地高辛(DIG)标记技术，针对ORF66设计探针，建立了HaHV
‑
1的原位杂交检测技术（Proceedings of the First FRDC Australasian Scientific Conference on Aquatic Animal Health, Carins, Australia, 2011.）。Gao等基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术，针对ORF38设计引物和探针，建立了HaHV
‑
1的qRPA快速定量检测技术（J Virol Methods, 2018, 251:92
‑
98.）。Corbeil等的研究结果显示，绿唇鲍和黑唇鲍杂交种人工感染HaHV
‑
1后36小时，使用实时定量PCR可以从病鲍神经组织检测到病毒DNA，而使用原位杂交方法在攻毒感染48小时后，可以在鲍腹足神经节检测到HaHV
‑
1信号的存在（Virus Research, 2012, 165(2): 207
‑
213.）。上述检测方法存在灵敏度低，检测时间长，以及假阴性多发等问题。为此，寻求一种灵敏度高、特异性好、检测时间短的方法，具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]为实现鲍疱疹病毒的快速有效检测，本专利技术根据SEQ ID No:1的核酸序列设计了三套引物组，引物组序列如下所示：第一套：F3：5'
‑
GACGAAGAGCTCGCGAAAT
‑
3'；B3：5'
‑
CTTTGGCATGTCGCCCTT
‑
3'；FIP：5'
‑
CCTTCCATGGGTTCCGGGTTTTTCTACGACGGGGAAGCTAAC
‑
3'；BIP：5'
‑
GATGTGTACGACCCCGACACGGTCCCAGCGCTCTCTGAA
‑
3'；
F2：5'
‑
TCTACGACGGGGAAGCTAAC
‑
3'；F1c：5'
‑
CCTTCCATGGGTTCCGGGTTTT
‑
3'；B2：5'
‑
GTCCCAGCGCTCTCTGAA
‑
3'；B1c：5'
‑
GATGTGTACGACCCCGACACG
‑
3'。
[0005]第二套：F3：5'
‑
GTCCGGAAACTCCATCTACG
‑
3'；B3：5'
‑
GGAAACTCTGGGAGGAGGTA
‑
3'；FIP：5'
‑
TGGTCGCCCTTTCTATGTCCGTGAGCGGAAGAATCGGAGGAT
‑
3'；BIP：5'
‑
ACCTCTGGACCGTCTTCCATGTCGACAAGGTCTGAGGTTCAA
‑
3'；F2：5'
‑
GAGCGGAAGAATCGGAGGAT
‑
3'；F1c：5'
‑
TGGTCGCCCTTTCTATGTCCGT
‑
3'；B2：5'
‑
CGACAAGGTCTGAGGTTCAA
‑
3'；B1c：5'
‑
ACCTCTGGACCGTCTTCCATGT
‑
3'。
[0006]第三套：F3：5'
‑
CACGGATTCCACGTCGTC
‑
3'；B3：5'
‑
AGCGCTCTCTGAACAGCT
‑
3'；FIP：5'
‑
TCCCCGTCGTAGAATTTCGCGAGCGCTTGAACCTCAGACC
‑
3'；BIP：5'
‑
TTGCGGATGGGGCCTTACAAATAGGACCGTGCGTGTCG
‑
3'；F2：5'
‑
GCGCTTGAACCTCAGACC
‑
3'；F1c：5'
‑
TCCCCGTCGTAGAATTTCGCGA
‑
3'；B2：5'
‑
ATAGGACCGTGCGTGTCG
‑
3'；B1c：5'
‑
TTGCGGATGGGGCCTTACAA
‑
3'。
[0007]上述引物组可被制备成试剂或者试剂盒，以用于鲍疱疹病毒的检测。对鲍疱疹病毒的检测可以是诊疗目的，也可以是非诊疗目的。
[0008]本专利技术提供了一种用于检测鲍疱疹病毒的试剂盒，包括上述引物组中的一种或几种。优选地，试剂盒还包括反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、dNTPs、硫酸镁、甜菜碱。
[0009]本专利技术提供了一种鲍疱疹病毒的LAMP检测方法：以上述任意一套引物组为LAMP引物，对待测样品进行LAMP扩增，根据显色结果判断样品中是否含有鲍疱疹病毒。
[0010]上述检测方法中，LAMP扩增温度为59~65℃。优选地，LAMP扩增温本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测鲍疱疹病毒的引物组，其特征在于，所述引物组的序列为：F3：5'
‑
GACGAAGAGCTCGCGAAAT
‑
3'；B3：5'
‑
CTTTGGCATGTCGCCCTT
‑
3'；FIP：5'
‑
CCTTCCATGGGTTCCGGGTTTTTCTACGACGGGGAAGCTAAC
‑
3'；BIP：5'
‑
GATGTGTACGACCCCGACACGGTCCCAGCGCTCTCTGAA
‑
3'；F2：5'
‑
TCTACGACGGGGAAGCTAAC
‑
3'；F1c：5'
‑
CCTTCCATGGGTTCCGGGTTTT
‑
3'；B2：5'
‑
GTCCCAGCGCTCTCTGAA
‑
3'；B1c：5'
‑
GATGTGTACGACCCCGACACG
‑
3'；或F3：5'
‑
GTCCGGAAACTCCATCTACG
‑
3'；B3：5'
‑
GGAAACTCTGGGAGGAGGTA
‑
3'；FIP：5'
‑
TGGTCGCCCTTTCTATGTCCGTGAGCGGAAGAATCGGAGGAT
‑
3'；BIP：5'
‑
ACCTCTGGACCGTCTTCCATGTCGACAAGGTCTGAGGTTCAA
‑
3'；F2：5'
‑
GAGCGGAAGAATCGGAGGAT
‑
3'；F1c：5'
‑
TGGTCGCCCTTTCTATGTCCGT
‑
3'；B2：5'
‑
CGACAAGGTCTGAGGTTCAA
‑
3'；B1c：5'
‑
ACCTCTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：白昌明，谷莉，辛鲁生，王崇明，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：