一种检测2019-nCoV的试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测2019

【技术实现步骤摘要】
一种检测2019
‑
nCoV的试剂盒及检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体而言，涉及一种检测2019
‑
nCoV的试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]2019年12月以来，陆续发现了多例不明原因肺炎病例，现已证实为一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。此次疫情传染性强，临床上以发热、乏力、干咳为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状，部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现，病情危重者可导致死亡。2020年1月12日，世界卫生组织将引起本次病毒性肺炎病例的病原体命名为2019
‑
nCoV，即2019
‑
nCoV。
[0003]目前，核酸检测试剂盒仍然存在假阴性的情况，从而给疫情防控带来较大的隐患。为了提高检测引物或探针的特异性，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种检测2019
‑
nCoV的试剂盒及检测方法以解决上述问题。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]一种检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其包括第一核酸组合物和第二核酸组合物，第一核酸组合物包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的第一引物对，以及SEQ ID NO.3所示的第一探针；
[0007]第二核酸组合物包括：SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的第二引物对，以及SEQ ID NO.6所示的第二探针。
[0008]第一探针和第二探针的5
’
端均标记有荧光报告基因，3
’
端均标记有荧光淬灭基团。
[0009]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、JOE、CY3、VIC、TET、TAXAS RED、NED、ALEXA、TAMRA和CY5中的任意一种。
[0010]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团选自HEX、FAM、TET、ROX或CY3。
[0011]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL中的任意一种。
[0012]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光淬灭基团为MGB或BHQ1。
[0013]本专利技术提供了一种检测2019
‑
nCoV的试剂盒，其包括上述的核酸组合物。
[0014]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述试剂盒还包括反应混合液，反应混合液为荧光定量预混液或PCR预混液；反应混合液为qPCR探针法荧光定量预混液；PCR预混液包括PCR buffer和酶混合液。
[0015]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述试剂盒中检测引物对的浓度为0.2
‑
50μM，
检测探针的浓度为0.2
‑
50μM。
[0016]本专利技术提供了一种检测2019
‑
nCoV的方法，其采用上述的核酸组合物，或者采用上述的试剂盒进行检测；
[0017]检测方法包括：将核酸组合物与待测核酸样本的混合液进行PCR扩增检测；
[0018]其中，PCR扩增的程序如下：25
‑
30℃、30
‑
150s；95
‑
96℃、10
‑
30s；95
‑
96℃、5
‑
10s，58
‑
60℃、20
‑
30s，循环35
‑
50次。
[0019]本专利技术具有以下有益效果：
[0020]本专利技术提供的检测试剂盒，特异性好，灵敏度高，检测限低，操作简单，可以实现快速检测的目的，缩短检测时间。同时可以增加有效样本量，提高检测灵敏度。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0022]图1为实施例1采用本专利技术提供的核酸组合物对S基因阳性质粒模板进行扩增后的曲线图；
[0023]图2为实施例1采用本专利技术提供的核酸组合物对N基因阳性质粒模板进行扩增后的曲线图；
[0024]图3为荧光定量标准曲线图；
[0025]图4为在不同模板浓度下使用本专利技术提供的核酸组合物进行扩增后的曲线图。
具体实施方式
[0026]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0027]一种检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其包括：第一核酸组合物和第二核酸组合物，所述第一核酸组合物包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的第一引物对，以及SEQ ID NO.3所示的第一探针；
[0028]所述第二核酸组合物包括：SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的第二引物对，以及SEQ ID NO.6所示的第二探针。
[0029]本专利技术提供的第一核酸组合物和第二核酸组合物根据2019年新型冠状病毒(SARS
‑
Cov
‑
2)保守且特异于其它已发现冠状病毒的两个基因片段(S基因片段和N基因片段)进行特异性设计而成。其中，第一核酸组合物可以特异性的检测S基因片段，而第二核酸组合物可以特异性的检测N基因片段。
[0030]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述检测探针的5
’
端标记有荧光报告基因，3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0031]可选的，第一探针和第二探针的5
’
端标记的荧光报告基因不同，3
’
端标记的荧光
淬灭基团不同。
[0032]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、JOE、CY3、VIC、TET、TAXAS RED、NED、ALEXA、TAMRA和CY5中的任意一种。
[0033]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光报告基团选自HEX、FAM、TET、ROX或CY3。
[0034]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL中的任意一种。
[0035]在本专利技术应用较佳的实施方式中，上述荧光淬灭基团为MGB或BHQ1。
[0036]荧光报告基团HEX的最大荧光吸收本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其特征在于，其包括第一核酸组合物和第二核酸组合物，所述第一核酸组合物包括：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的第一引物对，以及SEQ ID NO.3所示的第一探针；所述第二核酸组合物包括：SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的第二引物对，以及SEQ ID NO.6所示的第二探针。2.根据权利要求1所述的检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其特征在于，所述第一探针和第二探针的5
’
端均标记有荧光报告基因，3
’
端均标记有荧光淬灭基团。3.根据权利要求2所述的检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、JOE、CY3、VIC、TET、TAXAS RED、NED、ALEXA、TAMRA和CY5中的任意一种。4.根据权利要求3所述的检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其特征在于，所述荧光报告基团选自HEX、FAM、TET、ROX或CY3。5.根据权利要求2所述的检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其特征在于，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL中的任意一种。6.根据权利要求5所述的检测2019
‑
nCoV的核酸组合物，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冬冬，訾红彦，
申请(专利权)人：南京英瀚斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：