一种基因编辑家蝇抗菌肽Sarcotoxin-1B核苷酸序列及制备该抗菌肽的方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种基因编辑家蝇抗菌肽Sarcotoxin

【技术实现步骤摘要】
一种基因编辑家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B核苷酸序列及制备该抗菌肽的方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种基因编辑家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B核苷酸序列及制备该抗菌肽的方法。

技术介绍

[0002]在医药卫生领域中抗生素的广泛长期使用，导致耐药菌的产生，因此寻找一种/多种抗生素替代品成为势在必行的发展趋势。抗菌肽，又叫宿主防御肽，是机体先天免疫系统的重要组成部分，能够协同机体天然免疫的其他蛋白共同保护宿主，其具有广谱的抑制或消灭细菌、真菌、病毒、寄生虫等多种生物学功能。许多文献指出，抗生素的添加普遍导致了畜禽中耐药菌的产生。因此，抗菌肽的抗菌功能成为替代抗生素的可选手段之一。在寻找高活性抗菌肽的研究中，我们了解到家蝇由于其生活在细菌滋生的环境中，体内的抗菌肽理论上来说抗菌效果应该更强。因此，本专利技术选取家蝇Sarcotoxin
‑
1B进行研究（NCBI，氨基酸序列编号：XP_005179717.1），发现其成熟肽序列：GWLKKIGKKIERIGQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制备家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B的核苷酸序列，其特征在于：所述核苷酸序列如SEQ S1Bl所示。2.一种家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、对家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B的氨基酸序列对应的核苷酸序列进行人工编辑，设计并合成出如SEQ S1Bl所示的核苷酸序列；步骤二、将启动子序列、限制性内切酶EcoR I、6*his标签序列、限制性内切酶Not I和终止子序列合成，然后克隆到载体中构建得到重组载体；步骤三、将重组载体测序验证后转入酵母菌株中，经过筛选、诱导表达、纯化后得到家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B。3.根据权利要求2所述的家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B的制备方法，其特征在于：步骤二是在起始密码子前插入限制性内切酶EcoR I，在终止密码子前插入6*his标签序列，在终止密码子后插入限制性内切酶Not I合成序列，把酵母分泌表达信号肽与SEQ S1Bl序列构建一个蛋白翻译的阅读框，然后克隆到pPIC9K载体中构建得到重组载体pPIC9K
‑
Sarcotoxin
‑
1B。4.根据权利要求2所述的家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B的制备方法，其特征在于：步骤三具体包括以下步骤：S1、将构建得到的重组表达载体pPIC9K
‑
Sarcotoxin
‑
1B转化至毕赤酵母 GS115的感受态细胞中；S2、通过含不同浓度G418的YPD平板筛选出高拷贝转化子，再通过MD和MM平板筛选甲醇快速利用型转化子Mut+型菌株；S3、挑取筛选到的高拷贝转化子接种于YPD培养基上进行培养，收集并清洗菌体沉淀，然后用1%甲醇进行诱导表达；S4、诱导表达后进行分离纯化得到Sarcotoxin
‑
1B抗菌肽。5.根据权利要求3所述的家蝇抗菌肽Sarcotoxin
‑
1B的制备方法，其特征在于：步骤S1具体为：用 Sac I对重组表达载体pPIC9K
‑
Sarcotoxin
‑
1B进行线性化；然后将线性化后的重组表达载体pPIC9K
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：徐国防，白杰，李文嘉，卢敏，王改利，席燕燕，盛卫东，柴磊，魏凤仙，李绍钰，
申请(专利权)人：郑州人民医院郑州人民医院医疗管理中心，
类型：发明
国别省市：