一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签及其应用制造技术

一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签及其应用，属于生物技术领域。为解决大规模生产中纳米抗体表达量低的问题，本发明专利技术提供了一种通过添加丝素蛋白序列标签来促进蛋白表达的方法，所述丝素蛋白序列标签为天然丝素蛋白中的高频肽段GAGAGS，或为对高频肽段GAGAGS重复1～50次获得的肽段。将本发明专利技术所述的丝素蛋白标签与纳米抗体在大肠杆菌中进行融合表达，提取蛋白溶液后，进行镍柱纯化，可获得具有高表达量特点的纳米抗体，并且不影响纳米抗体的活性。本发明专利技术提供的促表达方法步骤简单，促表达效果明显，成本低，适用范围广，符合常规工业大批量生产要求。业大批量生产要求。业大批量生产要求。

【技术实现步骤摘要】
一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，抗体届的“新贵”纳米抗体发展迅速，受到了广泛关注。纳米抗体是羊驼或骆驼血液中的具有特殊结构的重链抗体的可变区，称做VHH抗体，因其晶体直径只有2.5nm，长4nm，所以被称为纳米抗体，纳米抗体是自然界可与抗原结合的最小片段。纳米抗体性质非常稳定，具有耐高温、耐强酸强碱的特点，另外纳米抗体的分子量相较于传统抗体非常小，具有优异的组织渗透性以及血脑屏障穿透能力，因此，近年来纳米抗体技术被评为最值得关注的十大新一代生物技术平台之首，其在诊断、医学成像、检测、蛋白质结晶、肿瘤靶向诊断及治疗等领域受到越来越多的关注。
[0003]纳米抗体的结构简单，可以利用大肠杆菌微生物体系进行大规模生产，然而在使用摇瓶表达纳米抗体时，通常伴随着表达量低的问题。可以通过添加融合标签来促进目的蛋白表达，如GST标签，但因其分子量大(26kDa)，纯化后需与纳米抗体酶切分离，这使下游处理步骤繁本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可提高蛋白表达量的丝素蛋白序列标签，其特征在于，所述丝素蛋白序列标签为天然丝素蛋白中的高频肽段，或为对所述高频肽段重复1～50次，所述高频肽段的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的丝素蛋白序列标签，其特征在于，所述丝素蛋白序列标签的位置可以添加在目的蛋白的N端或者C端。3.权利要求1所述丝素蛋白序列标签在提高蛋白表达量中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用为提高纳米抗体的表达量。5.一种利用权利要求1所述丝素蛋白序列标签提高纳米抗体表达量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将纳米抗体序列与所述丝素蛋白标签序列通过全基因合成，经酶切、连接，以构建融合丝素蛋白标签的纳米抗体表达载体；2)将步骤1)获得的融合丝素蛋白标签的纳米抗体表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞中以获得纳米抗体表达菌株；3)对步骤2)获得的纳米抗体表达菌株进行诱导，离心收集菌体；4)对步骤3)获得的菌体进行蛋白提取，以获得粗蛋白样品；5)将步骤4)获得的粗蛋白样品进行纯化，获得纳米抗体。6.根据权利要求5所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭杨，刘文帅，年锐，于建立，樊喜英，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：