一种中长链烷烃诱导型生物传感器及其应用制造技术

一种中长链烷烃诱导型生物传感器及其应用，涉及基因工程生物传感器技术领域，生物传感器具体为含有pUC19

【技术实现步骤摘要】
一种中长链烷烃诱导型生物传感器及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程生物传感器
，具体是涉及一种中长链烷烃诱导型生物传感器及其应用。

技术介绍

[0002]随着人类对石油及其产品需求量的日益增加，油田附近的湿地面临着石油污染加剧的严重威胁，其污染物主要是在原油开采、运输、石化燃料的生产使用及事故性泄露中所产生的石油污染物(Chih
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Wen Liua,Mao
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Shih Lianga,Yun
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Chi Chena,et al.Biodegradation of n
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alkanes at high concentration and correlation to theaccumulation of H
+
ions in Rhodococcuserythropolis NTU
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1.Biochemical Engineering Journal,2012,63:124
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128)。被石油污染的湿地的水体质量下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中长链烷烃诱导型生物传感器，具体为含有pUC19
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ep3alks
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EGFP载体的Top10工程菌，其中ep3alks具有如SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列。2.一种制备如权利要求1所述中长链烷烃诱导型生物传感器的方法，其特征在于，步骤如下：1)、野生型烷烃诱导型操纵子基因的获得：以质粒pCOM8
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Alks为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所述的引物做PCR扩增，获得含有烷烃结合位点ABS，启动子Palks和调节蛋白alkS基因的野生型烷烃诱导型操纵子alks；2)、野生型烷烃诱导型重组载体的构建利用EcoRI和XhoI双酶切pUC19载体和步骤1)扩增获得的野生型烷烃诱导型操纵子，T4连接酶连接，使野生型烷烃诱导型操纵子替代pUC19载体中原本的lac启动子，获得pUC19
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Alks载体；再在pUC19
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Alks载体的调节蛋白alkS基因的下游引入绿色荧光蛋白EGFP基因，获得野生型烷烃诱导型重组载体pUC19
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Alks
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EGFP，所述EGFP基因是以SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4为引物，以质粒pPRars
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GFP为模板克隆获得的；利用EcoRI和XhoI双酶切pUC19载体同步构建pUC19
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AID
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EGFP空白对照质粒，用无功能序列AID(activation
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induced cytidine deaminase)替换pUC19
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Alks
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EGFP质粒中的烷烃诱导型操纵子，所述AID序列是以SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6为引物，以pCI
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mAID为模板克隆获得的；3)、定向进化获得烷烃诱导型生物传感器以pUC19
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Alks
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EGFPP质粒为模板，对烷烃诱导型操纵子的烷烃结合位点ABS，启动子Palks和调节蛋白alkS基因进行易错PCR，获得随机突变体文库，对随机突变体文库进行流式高通量筛选；利用EcoRI和Xh...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈少鹏，陈东东，吴李君，李顺兰，陶诗频，徐升敏，肖翔，
申请(专利权)人：皖南医学院，
类型：发明
国别省市：