一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法及其应用，包括以下步骤：将待提取的水稻叶片与钢珠混合置于取样板中，加入灭菌双蒸水并盖盖；将取样板置于研磨仪上研磨；将取样板置于高速冷冻离心机上，4℃，6000rpm离心5min，取上清；将上清转移到PCR板上，4℃，3000rpm离心30s，取最多上层2/3清液，即得水稻基因组DNA。该提取方法不涉及任何化学试剂，现场10min完成提取过程，与现有DNA提取方法相比，具有简便、快速高效、成本低、安全无污染、适用性广，可实现高通量操作，另外，本发明专利技术的水稻基因组DNA的快速低成本提取在水稻分子标记辅助育种、作物品种鉴定等过程中具有极高的适用性和实用性。性和实用性。性和实用性。

【技术实现步骤摘要】
一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法及其应用。

技术介绍

[0002]水稻不仅是主要的粮食作物，而且是重要的模式生物。随着水稻基因组研究的发展，分子生物学技术在水稻研究中得到广泛地的应用。而在水稻分子生物学研究中，提取和制备其DNA是许多研究工作的基础和前提；
[0003]DNA是遗传信息的载体，植物基因组DNA的提取是分子生物学实验的基础，分子标记辅助育种、作物品种鉴定及植物基因型鉴定等都需要进行大样本量基因组DNA的分子生物学实验，往往耗费大量时间和精力进行DNA提取，DNA的快速提取是实现DNA快速检测的前提和关键；
[0004]传统DNA的提取方法如十二烷基硫酸钠法(SDS)和十六烷基三甲基溴化铵法(CTAB)等提取步骤繁琐，提取时间较长，一般整个提取过程需要3小时左右，存在废液多且部分试剂有毒等问题；目前常用的试剂盒法虽然减少了有机溶剂的使用，简化了操作过程，但是提取成本较高且整个提取过程仍在1个小时左右，现已报道了多种优化的基因组快速提取方法，也仅是更换个别试剂或简化特定步骤，对大规模实验来说，这些简化方法仍然比较繁琐、耗时较长，不能满足现场快速检测和鉴定的需求。因此，非常有必要开发快速、高效、低成本且操作方便的DNA提取方法，从而满足实时快速提取DNA的需要；
[0005]为此，我们提出了一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法及其应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的就在于为了解决上述问题而提供了一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法及其应用。
[0007]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：
[0008]一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法，包括以下步骤：
[0009](1)将待提取的水稻叶片与钢珠混合置于取样板中，加入灭菌双蒸水并盖盖；
[0010](2)将取样板置于研磨仪上研磨；
[0011](3)将取样板置于高速冷冻离心机上，4℃，6000rpm离心5min，取上清；
[0012](4)将上清转移到PCR板上，4℃，3000rpm离心30s，取最多上层2/3清液，即得水稻基因组DNA。
[0013]作为本专利技术的进一步优化方案，所述待提取水稻叶片为剪碎的叶片。
[0014]作为本专利技术的进一步优化方案，每2
‑
3cm水稻叶片中，加入400μL灭菌双蒸水。
[0015]作为本专利技术的进一步优化方案，所述取样板为EP管或96孔深孔板。
[0016]作为本专利技术的进一步优化方案，所述研磨仪的研磨频率为2000rpm，研磨时间为1min以上。
[0017]一种水稻基因快速低成本检测方法，利用如上述任一方法提取水稻基因组DNA，再以提取的水稻基因组DNA为模板，利用待检测目的基因的特异性扩增引物进行PCR扩增，获得待检测目的基因。
[0018]本专利技术的有益效果在于：
[0019]1、快速高效：传统SDS法和CTAB法提取水稻基因组DNA约2
‑
3小时，本专利技术方法省去了液氮研磨、沉淀及风干等步骤，仅10min之内即可完成大批量待测水稻基因组DNA的提取，尤其适合田间大量叶片样品的实时提取，大大提高了工作效率；
[0020]2、安全无污染：本专利技术方法提取水稻基因组DNA，不涉及任何有毒化学试剂，安全无毒，且不产生废液，对环境没有任何污染；
[0021]3、节约成本：本专利技术方法提取水稻基因组DNA，仅用灭菌双蒸水研磨释放DNA即可，没有药品试剂成本；
[0022]4、实用简单：本专利技术操作简单，适用于大批量水稻基因组DNA的提取。
附图说明
[0023]图1为实施例一按照本专利技术方法提取的水稻基因组DNA浓度和纯度数值图；
[0024]图2为实施例二中利用中华人民共和国农业行业标准NYT1433
‑
2014中水稻品种鉴定技术规程推荐的48对SSR引物检测本专利技术方法提取的水稻基因组DNA的特征条带的结果示意图，其中1
‑
48分别代表引物名称为：1、RM583；2、RM71；3、RM85；4、RM471；5、RM274；6、RM190；7、RM336；8、RM72；9、RM219；10、RM311；11、RM209；12、RM19；13、RM1195；14、RM208；15、RM232；16、RM119；17、RM267；18、RM253；19、RM481；20、RM339；21、RM278；22、RM258；23、RM224；24、RM17；25、RM493；26、RM561；27、RM8277；28、RM551；29、RM598；30、RM176；31、RM432；32、RM331；33、OSR28；34、RM590；35、RM21；36、RM3331；37、RM443；38、RM490；39、RM424；40、RM423；41、RM571；42、RM231；43、RM567；44、RM289；45、RM542；46、RM316；47、RM332；48、RM7102；
[0025]图3为实施例三中用本专利技术方法提取的水稻基因组DNA用于水稻抗稻瘟病基因Pi9的鉴定筛选结果示意图，其中AA为阳性，aa为阴性，Aa为杂合，M为DNA Marker。
具体实施方式
[0026]下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
[0027]下面各实施例使用的水稻样品“五山丝苗”种子无特殊说明的情况下均由安徽荃银高科种业股份有限公司提供，另外，下面各实施例所使用到的药品和试剂无特殊说明的情况下均为市购。
[0028]一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法，包括以下步骤：
[0029](1)用剪刀剪取长度2
‑
3cm长的水稻叶片置于加入1
‑
2粒钢珠的EP离心管或96孔深孔板中；
[0030](2)在EP离心管或96孔深孔板中加入400ul灭菌双蒸水并盖盖，于组织研磨机上研磨1min，组织研磨机的研磨频率为2000rpm/min；
2010高通量组织研磨机上以2000rpm/min的频次研磨1min；取出置于高速冷冻离心机上，4℃，6000rpm离心5min；抽提100ul上清转移至PCR板上，3000rmp离心30s，即得水稻基因组DNA，4℃下保存备用；
[0045](2)PCR扩增：反应体系由步骤(1)中样品基因组DNA(10
‑
30ng/ul)、含Mg2+的buffer、dNTPs、引物、Taq酶和ddH2O构成。反应体系共10ul，其各组分依次体积分别为2ul、0.8ul、0.6ul、1ul、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待提取的水稻叶片与钢珠混合置于取样板中，加入灭菌双蒸水并盖盖；(2)将取样板置于研磨仪上研磨；(3)将取样板置于高速冷冻离心机上，4℃，6000rpm离心5min，取上清；(4)将上清转移到PCR板上，4℃，3000rpm离心30s，取最多上层2/3清液，即得水稻基因组DNA。2.根据权利要求1所述的一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法，其特征在于，所述待提取水稻叶片为剪碎的叶片。3.根据权利要求1所述的一种水稻基因组DNA的快速低成本提取方法，其特征在于，每2
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，张从合，黄艳玲，方玉，杨力，管昌红，严志，吴浩然，陈思，王林，周桂香，申广勒，张雯，
申请(专利权)人：安徽荃银高科种业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：