一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒。所述试剂盒包括：裂解液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液、洗脱液及磁珠；所述裂解液含有2

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒


[0001]本专利技术提供一种基于磁珠法快速提取血浆游离核酸的试剂盒，属于生物医药领域。

技术介绍

[0002]血浆游离核酸，是指存在于人体血浆中游离在细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。游离核酸检测广泛应用于无创产前筛查、肿瘤诊断及各类疾病检验中。
[0003]目前市场上对于从血浆中提取游离核酸的方法有很多，根据核酸提取原理分为沉淀法、柱膜离心法、磁珠法等，根据提取通量高低分为手工法和仪器法。
[0004]沉淀法：采用酚氯仿等有机试剂提取核酸。
[0005]柱膜离心法：DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时DNA从硅胶膜上洗脱下来。
[0006]磁珠法：以超顺磁性的纳米磁性粒子为基质，这种磁性粒子在高浓度离液剂的条件下可通过氢键和静电特异的吸附核酸，而蛋白质或其它非特异吸附的少量杂质经洗涤被去除，最后用低盐缓冲液或 RNase Free ddH2O 洗脱核酸。
[0007]手工法：操作步骤均由手动操作。
[0008]仪器法：基于磁棒法原理的自动核酸提取仪。
[0009]传统的游离核酸提取试剂盒，通常采用沉淀法和柱膜离心法, 沉淀法需采用酚氯仿抽提，操作复杂，试剂毒性大，不宜使用。采用柱膜法需要配合离心机使用，操作复杂，核酸得率较低，且不能实现高通量核酸提取。

技术实现思路

[0010]本专利技术基于磁珠法进行核酸提取，提取试剂无酚氯仿等有机试剂，含有独特的裂解液组分，能够有效提高核酸质量。采用本专利技术独特核酸提取试剂，能够手工提取0.1ml
‑
10ml的血浆，并且搭配32通道核酸提取仪可提取0.1ml
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0.6ml的血浆游离核酸，搭配24通道核酸提取仪可提取1ml
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8ml的血浆游离核酸，能够满足不同客户的需求。
[0011]本专利技术的目的是提供一种基于磁珠法提取血浆游离核酸的试剂盒。
[0012]本专利技术所提供的试剂盒包括：裂解液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液、洗脱液及磁珠；所述裂解液含有2
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6M离液剂、0.05
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10%（100ml的裂解液中含有0.05
‑
10g的十二烷基硫酸钠）十二烷基硫酸钠、50
‑
200mM的乙二胺四乙酸、10
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200mM的三羟甲基氨基甲烷、50
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500mM 氯化钠、0.1%
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5%十二烷基苯磺酸钠、1%
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5%月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%
‑
15%非离子表面活性剂。
[0013]具体地，所述裂解液含有2
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6M离液剂、1
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5%（m/v）十二烷基硫酸钠、50
‑
150mM乙二胺四乙酸、80
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120mM三羟甲基氨基甲烷、80
‑
120mM 氯化钠、1%
‑
3%（m/v）的十二烷基苯磺酸钠、2%
‑
4%（m/v）月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%
‑
15%非离子表面活性剂；所述离液剂可为盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素中的一种或几种的混合物，具体可为异
硫氰酸胍；所述非离子表面活性剂可选自：TritonX
‑
100、Tween
‑
20、Tween
‑
80、NP40中的至少一种，具体可为TritonX
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100；更优选地，所述裂解液由以下物质组成：3mol/L异硫氰酸胍，2%十二烷基硫酸钠，100mmol/L乙二胺四乙酸，100mmol/L三羟甲基氨基甲烷，100mmol/L 氯化钠，2%十二烷基苯磺酸钠，2.5%月桂醇聚醚硫酸酯钠，8% TritonX
‑
100；所述去蛋白漂洗液含有1
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3M胍盐、0.1
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1M氯化钠和80%乙醇（V/V）；所述胍盐具体可为异硫氰酸胍、盐酸胍的一种或者两种的混合物；优选地，所述去蛋白漂洗液由以下物质组成：2mol/L异硫氰酸胍、500mmol/L氯化钠、80%乙醇（V/V）。
[0014]所述去盐漂洗液为70%
‑
80%乙醇（V/V）；优选地，所述去盐漂洗液为80%乙醇（V/V）；所述洗脱液为5
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20mM三羟甲基氨基甲烷，pH8.0；优选地，所述洗脱液为10mmol/L三羟甲基氨基甲烷，pH8.0。
[0015]所述磁珠为一种结合核酸特异性高的硅羟基磁珠，具体可为磁珠K，货号M11，苏州星谱生物科技有限公司的产品。
[0016]本专利技术的试剂盒含有独特组成的裂解液和磁珠，对血浆游离核酸能够高效裂解结合，能够提高核酸质量。
[0017]本专利技术还提供一种使用上述试剂盒提取血浆游离核酸的方法。
[0018]本专利技术所提供的提取血浆游离核酸的方法，为手工法提取血浆游离核酸的方法或采用自动化核酸提取仪提取血浆游离核酸的方法。
[0019]所述手工法提取血浆游离核酸的方法，包括如下步骤：1）在血浆中加入磁珠和裂解液，混匀，放置，磁力架吸附弃上清；2）向步骤1）磁珠中加入去蛋白漂洗液，混匀，磁力架吸附弃上清；3）向步骤2）磁珠中加入去盐漂洗液，混匀，磁力架吸附弃上清；4）向步骤3）磁珠中加入洗脱液，加热，洗脱核酸，得到血浆游离核酸；上述方法步骤1）中，血浆与磁珠、裂解液的配比可为0.1
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1ml：30ul：0.4
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1ml，具体可为300ul：30ul：400ul，其中磁珠浓度为100mg/ml；所述混匀具体可为涡旋混匀，时间可为30s；放置的时间可为5
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20min，具体可为10min；步骤2）中加入的去蛋白漂洗液与步骤1）中的血浆的配比可为0.5
‑
1ml：0.1
‑
1ml，具体可为500ul：300ul；所述混匀具体可为涡旋混匀，时间可为30s；步骤3）中加入的去盐漂洗液与步骤1）中的血浆的配比可为0.5
‑
1ml：0.1
‑
1ml，具体可为600ul：300ul；所述混匀具体可为涡旋混匀，时间可为30s；步骤4）中加入的洗脱液与步骤1）中的血浆的配比可为0.06
‑
0.1ml：0.1
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1ml，具体可为60ul：300ul；所述加热为采用56度水浴加热10min。
[0020]采用自动化核酸提取仪提取血浆游离核酸的方法，包括如下步骤：1）将试剂加入到预分板中，1、7列加入磁珠悬浮液（磁珠悬浮液除了含有磁珠还有磷酸盐缓冲液，300ul血浆样本需要30ul磁珠，磁珠浓度为100mg/ml），2、8列加入400ul裂解液，3、9列加入500ul去蛋白漂洗液，4、10列加入600ul去盐漂洗液，6、12列加入60ul洗脱液；2）将300ul血浆样本直本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于磁珠法提取血浆游离核酸的试剂盒，包括：裂解液、去蛋白漂洗液、去盐漂洗液、洗脱液及磁珠：所述裂解液含有2
‑
6M离液剂、0.05
‑
10%十二烷基硫酸钠、50
‑
200mM的乙二胺四乙酸、10
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200mM的三羟甲基氨基甲烷、50
‑
500mM 氯化钠、0.1%
‑
5%十二烷基苯磺酸钠、1%
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5%月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%
‑
15%非离子表面活性剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述离液剂为盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素中的一种或几种的混合物；所述非离子表面活性剂选自：TritonX
‑
100、Tween
‑
20、Tween
‑
80、NP40中的至少一种。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述裂解液含有2
‑
6M离液剂、1
‑
5%十二烷基硫酸钠、50
‑
150mM乙二胺四乙酸、80
‑
120mM三羟甲基氨基甲烷、80
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120mM 氯化钠、1%
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3%十二烷基苯磺酸钠、2%
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4%月桂醇聚醚硫酸酯钠和5%
‑
15%...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡美丽，韩典霖，俞萍，
申请(专利权)人：济凡生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：