【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞制备组合物和方法
交叉引用
[0001]本申请要求2019年5月8日提交的第62/845,251号美国临时申请的权益，该美国临时申请通过引用整体并入本文。
技术介绍
[0002]肿瘤疫苗通常由肿瘤抗原和免疫刺激分子(例如佐剂、细胞因子或TLR配体)组成，它们共同作用以诱导识别并裂解肿瘤细胞的抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)。这类疫苗含有共有的组织限制性肿瘤抗原或完整肿瘤细胞制品形式的共有抗原和患者特异性抗原的混合物。共有的组织限制性肿瘤抗原是在许多个体的肿瘤中具有选择性表达的理想的免疫原性蛋白质，并且通常作为合成肽或重组蛋白递送给患者。相比之下，完整肿瘤细胞制品作为自体辐照的细胞、细胞裂解物、细胞融合物、热休克蛋白制品或总mRNA递送给患者。由于完整肿瘤细胞是从自体患者中分离的，因此该细胞可以包括患者特异性肿瘤抗原以及共有的肿瘤抗原。最后，还有第三类肿瘤抗原——很少在疫苗中使用的新抗原，其由具有导致氨基酸序列改变的肿瘤特异性突变(可以是患者特异性的或共有的)的蛋白质组成。这类突变蛋白质是：(a)作为突变对肿瘤细胞是独特的，并且其相应的蛋白质仅存在于肿瘤中；(b)避免中枢耐受，因此更有可能具有免疫原性；(c)提供出色靶标以供免疫识别，包括被体液免疫和细胞免疫识别。
[0003]过继免疫疗法或过继细胞疗法(ACT)是将淋巴细胞转移至受试者以进行疾病的治疗。过继免疫疗法尚未实现其治疗众多疾病的潜力，包括癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、炎性疾病和免疫缺陷。然而，大多数(如果不是全部)过继免疫疗法都需要T细胞活化和扩充...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括：(a)从包含抗原呈递细胞(APC)和T细胞的免疫细胞群体中消耗CD14+细胞和/或CD25+细胞，从而形成包含APC和T细胞第一群体的CD14和/或CD25耗尽的免疫细胞群体，其中所述免疫细胞群体来自人类受试者的生物样品；(b)在以下物质的存在下，将来自步骤(a)的APC和T细胞第一群体孵育第一时间段：(i)FMS样酪氨酸激酶3受体配体(FLT3L)，和(ii)(A)包含至少一个由患有癌症的人类受试者的癌细胞表达的肿瘤抗原表位序列的多肽，或(B)编码该多肽的多核苷酸；从而形成包含经刺激的T细胞的细胞群体；(c)扩充来自步骤(b)的经刺激的T细胞，从而形成包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体，其中所述肿瘤抗原特异性T细胞包含对包含以下成分的复合物具有特异性的T细胞：(i)来自步骤(b)(ii)的所述至少一个肿瘤抗原表位序列，和(ii)由(b)(ii)的人类受试者的癌细胞或APC表达的MHC蛋白；以及(d)将来自(c)的经扩充的细胞群体施用于所述人类受试者，其中来自步骤(c)的经扩充的细胞群体包含1x108至1x10
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个总细胞。2.一种用于制备肿瘤抗原特异性T细胞的改进的离体方法，该方法包括权利要求1的步骤(a)至(c)；以及(d)向所述人类受试者施用包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体，其中所述人类受试者：(i)患有不可切除的黑素瘤，(ii)先前曾接受过PD
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1抑制剂或PD
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L1抑制剂和包含CTLA
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4抑制剂的方案并且有疾病进展，或者(iii)曾接受过或目前正在接受PD
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1抑制剂或PD
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L1抑制剂至少3个月，并且病情稳定或疾病有无症状进展。3.一种用于制备肿瘤抗原特异性T细胞的改进的离体方法，该方法包括权利要求1的步骤(a)；以及(b)在以下物质的存在下，将所述包含APC和T细胞第一群体的CD14和/或CD25耗尽的免疫细胞群体孵育第一时间段：(i)FMS样酪氨酸激酶3受体配体(FLT3L)，和(ii)编码包含至少两个由患有癌症的人类受试者的癌细胞表达的不同肿瘤抗原表位序列的多肽的mRNA；从而形成包含经刺激的T细胞的细胞群体；以及根据权利要求1的步骤(c)进行扩充。4.一种用于制备肿瘤抗原特异性T细胞的改进的离体方法，该方法包括：(a)直接从来自人类受试者的经洗涤和/或冷冻保存的外周血单核细胞(PBMC)样品中消耗CD14+细胞和/或CD25+细胞；从而形成包含APC和T细胞第一群体的CD14和/或CD25耗尽的PBMC群体；(b)根据权利要求1的步骤(b)进行孵育；从而形成包含经刺激的T细胞的细胞群体；以及(c)根据权利要求1的步骤(c)进行扩充。
5.根据权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中(b)包括将编码所述多肽的多核苷酸或mRNA引入来自步骤(a)的APC和T细胞第一群体的APC中。6.根据权利要求5所述的方法，其中引入包括电穿孔或核转染。7.根据权利要求6所述的方法，其中在不将来自步骤(a)的APC和T细胞第一群体的T细胞与APC分离的情况下进行所述电穿孔或核转染。8.根据权利要求1和3
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7中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括向所述人类受试者施用包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体。9.根据权利要求1、2和4
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8中任一项所述的方法，其中孵育包括在以下物质的存在下，将所述包含APC和T细胞第一群体的CD14和/或CD25耗尽的免疫细胞群体孵育第一时间段：(i)FMS样酪氨酸激酶3受体配体(FLT3L)，和(ii)编码包含至少两个由患有癌症的人类受试者的癌细胞表达的不同肿瘤抗原表位序列的多肽的mRNA。10.根据权利要求3或9所述的方法，其中所述mRNA包含5
’
帽。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述5
’
帽是CAP
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1。12.根据权利要求3或9所述的方法，其中所述mRNA包含3
’
聚A尾。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述聚A尾的长度为120至135个核苷酸。14.根据权利要求3和9
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13中任一项所述的方法，其中所述至少两个不同肿瘤抗原表位序列的第一肿瘤抗原表位序列通过接头序列连接至所述至少两个不同肿瘤抗原表位序列的第二肿瘤抗原表位序列。15.根据权利要求10
‑
14中任一项所述的方法，其中所述5
’
帽通过接头序列可操作地连接至所述至少两个不同肿瘤抗原表位序列中的肿瘤抗原表位序列。16.根据权利要求3和9
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14中任一项所述的方法，其中所述至少两个不同肿瘤抗原表位序列被表达为单条多肽链。17.根据权利要求1
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14中任一项所述的方法，其中孵育包括在LPS和IFNγ的存在下孵育所述包含APC和T细胞第一群体的CD14和/或CD25耗尽的免疫细胞群体。18.根据权利要求3和9
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17中任一项所述的方法，其中所述至少两个不同肿瘤抗原表位序列的长度各自为8至12个氨基酸。19.根据权利要求3和9
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17中任一项所述的方法，其中所述至少两个不同肿瘤抗原表位序列的长度各自为15至25个氨基酸。20.根据权利要求1
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19中任一项所述的方法，其中所述多肽包含至少3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个由患有癌症的人类受试者的癌细胞表达的不同肿瘤抗原表位序列。21.根据权利要求2
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20中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体包含1x108至1x10
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个总细胞。22.根据权利要求1
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21中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有不可切除的黑素瘤。23.根据权利要求1
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22中任一项所述的方法，其中所述人类受试者先前接受过PD
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1抑制剂或PD
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L1抑制剂和包含CTLA
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4抑制剂的方案，并且有疾病进展。24.根据权利要求1
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22中任一项所述的方法，其中所述人类受试者曾接受过或目前正在接受PD
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1抑制剂或PD
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L1抑制剂至少3个月，并且病情稳定或疾病有无症状进展。25.根据权利要求1
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24中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经
扩充的细胞群体中CD3+细胞的百分比为总细胞群体的至少40％、至少50％或至少60％。26.根据权利要求1
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25中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中CD107a+细胞的百分比为所述肿瘤抗原特异性T细胞群体的至少10％。27.根据权利要求1
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26中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中TNFα+细胞的百分比为所述肿瘤抗原特异性T细胞群体的至少5％。28.根据权利要求1
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27中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中IFNγ+细胞的百分比为所述肿瘤抗原特异性T细胞群体的至少15％。29.根据权利要求1
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28中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中TNFα+和IFNγ+细胞的百分比为所述肿瘤抗原特异性T细胞群体的至少2％。30.根据权利要求1
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29中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中TNFα+和CD107a+细胞的百分比为所述肿瘤抗原特异性T细胞群体的至少0.5％。31.根据权利要求1
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30中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中IFNγ+和CD107a+细胞的百分比为所述肿瘤抗原特异性T细胞群体的至少5％。32.根据权利要求1
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31中任一项所述的方法，其中所述包含肿瘤抗原特异性T细胞的经扩充的细胞群体中TNFα+和IFNγ+和CD...
【专利技术属性】
技术研发人员：马里特，
申请(专利权)人：荷兰癌症研究所基金会安东尼，
类型：发明
国别省市：
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