间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用，属于生物药物技术领域。本发明专利技术提供了间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。实验证明，从脐带间充质干细胞提取分泌的微囊泡后，用于子痫前期大鼠动物模型的治疗，hucMSC来源的微囊泡具有降低子痫前期模型鼠血压和24h蛋白尿，改善大鼠子痫前期样症状的作用，并且能够增加仔鼠重改善胎仔发育，为子痫前期疾病的治疗提供新方向。为子痫前期疾病的治疗提供新方向。为子痫前期疾病的治疗提供新方向。

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物药物
，具体涉及间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。

技术介绍

[0002]子痫前期是妊娠期的一个严重的并发症，发病率约5％至8％，是世界范围内引起孕产妇死亡主要原因。子痫前期会导致胎儿生长受限甚至死亡。尽管子痫前期对孕妇和胎儿的健康有显著的影响，但目前尚无有效的治疗方法可以延长怀孕时间，而不会对胎儿造成不良后果。目前，终止妊娠仍是子痫前期的唯一治疗方法，导致胎儿早产和心肺不成熟等不良结局。此外，临床上最常用的治疗的药物有硫酸镁等，但长期大量应用可引起一定的副作用，并且只是从疾病的表现症状出发，主要是起到降压作用，并非从病因学角度起到治疗作用。因此，积极探索子痫前期治疗新方案并揭示其作用机理，具有重要的科学意义与临床转化价值。
[0003]近年来，间充质干细胞(MSCs)以其多能性及旁分泌能力在医学领域备受关注。但是干细胞的伦理、安全性、难以储存和运输等问题限制其临床应用。近年来，MSCs旁分泌中的重要成分微囊泡被报道广泛参与细胞侵袭与迁移、免疫调节、血管新生和组织再生等很多疾病生理及病理过程。间充质干细胞来源的微囊泡与MSCs相比具有运输方便、生物安全好和靶向性高等优点。脐带也早已被证明是MSCs分泌的微囊泡的优质来源之一，相对于其他来源的MSC分泌的微囊泡，脐带MSC分泌的微囊泡具备无伦理争议、基因稳定安全、采集方便和免疫原性低等优势。微囊泡结构是近年来发现的细胞间信号通讯的重要途径，是细胞可溶性细胞因子外的重要旁分泌形式。目前MSCs来源的微囊泡在组织损伤的修复和再生中发挥作用，主要通过传递其含有MSCs来源蛋白质、脂质、mRNA、miRNA等物质并介导旁分泌通路，是损伤组织中尚存活的细胞重新进入细胞周期，同时能通过与受损细胞释放的MVs的遗传物质的双向性交换获得组织特异性，进一步修复受损组织。然而现有技术中还没有关于MSCs来源的微囊泡能够用于治疗子癫前期的报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。
[0005]本专利技术提供了间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。
[0006]优选的，所述间充质干细胞来源的纳米微囊泡的制备方法，包括以下步骤：
[0007]1)将hucMSC体外扩增培养，待细胞汇合度达到75％～80％时收集培养上清液，去除细胞碎块后，得到MSC
‑
CM；
[0008]2)将所述MSC
‑
CM去除细胞碎片和细胞器后进行超滤洗涤，收集浓缩液；
[0009]3)将所述浓缩液转移至质量浓度30％的庶糖/D2O密度垫上进行密度梯度离心，收集底部缓冲垫；
[0010]4)将所述底部缓冲垫稀释洗涤后，进行所述超滤洗涤，收集微囊泡浓缩液除菌得到间充质干细胞来源的纳米微囊泡。
[0011]优选的，步骤1)中去除细胞碎块的方法包括离心；所述离心的离心力为1800～2200g，所述离心的时间为8～12min。
[0012]优选的，步骤2)中去除细胞碎片和细胞器包括差速离心；所述差速离心的离心力为1500～2200rpm，所述差速离心的时间为15～30min。
[0013]优选的，步骤2)或步骤4)中所述超滤洗涤采用100000Da MWCO超滤离心管进行。
[0014]优选的，步骤3)中所述密度梯度离心的离心力为100000g，所述密度梯度离心的时间为3h；所述密度梯度离心的温度为4℃。
[0015]优选的，所述间充质干细胞来源的纳米微囊泡的表面标记蛋白包括 CD63和CD9。
[0016]优选的，所述药物的剂型为注射剂；在所述注射剂中，间充质干细胞来源的纳米微囊泡的浓度不低于4.5
×
10
11
微粒数/0.4ml。
[0017]本专利技术提供了间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。从脐带间充质干细胞提取分泌的微囊泡后，用于子痫前期大鼠动物模型的治疗，发现hucMSC具有降低子痫前期模型鼠血压和24h蛋白尿，改善大鼠子痫前期样症状的作用，并且能够增加仔鼠重改善胎仔发育。
附图说明
[0018]图1为本专利技术分离纯化得到的hucMSC微囊泡鉴定结果；其中图1A为电子显微镜图片；图1B为hucMSC微囊泡的大小分布结果；图1C为western blot技术检测结果；
[0019]图2为PE大鼠模型造模以及hucMSC微囊泡干预流程图；
[0020]图3为判断大鼠怀孕的结果图，其中图3A为阴道栓电镜图；图3B为取阴道分泌物现场图；图3C为阴道涂片结果；
[0021]图4为成功构建PE模型大鼠的检测结果；其中图4A为大鼠24h蛋白尿水平柱形图；图4B为大鼠的血压柱形图；
[0022]图5为采用hucMSC微囊泡治疗改善PE大鼠子痫前期样症；
[0023]图6为采用hucMSC微囊泡治疗子痫前期对PE仔鼠重、窝产仔数和胎盘重的影响结果图，其中图6A为平均胎鼠重，图6B为平均胎盘重。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。
[0025]在本专利技术中，所述间充质干细胞来源的纳米微囊泡的制备方法，优选包括以下步骤：
[0026]1)将hucMSC体外扩增培养，待细胞汇合度达到75％～80％时收集培养上清液，去除细胞碎块后，得到MSC
‑
CM；
[0027]2)将MSC
‑
CM去除细胞碎片和细胞器后进行超滤洗涤，收集浓缩液；
[0028]3)将所述浓缩液转移至质量浓度30％的庶糖/D2O密度垫上进行密度梯度离心，收集底部缓冲垫；
[0029]4)将所述底部缓冲垫稀释洗涤后，进行所述超滤洗涤，收集浓缩液除菌得到间充质干细胞来源的纳米微囊泡。
[0030]本专利技术将hucMSC体外扩增培养，待细胞汇合度达到75％～80％时收集培养上清液，去除细胞碎块后，得到MSC
‑
CM。
[0031]在本专利技术中，hucMSC体外扩增培养的方法可参见现有技术(Qiao Chunet al.Human mesenchymal stem cells isolated from the umbilical cord.Cell Biol Int.2008Jan；32(1):8
‑
15.)。在本专利技术实施例中，hucMSC的购自赛业生物。所述hucMSC优选増殖能力强、状态好的健康人hucMSC，例如选择体外扩增培养第三代或第四代细胞。所述培养优选采用无血清培养基。
[0032]在本专利技术中，去除细胞碎块的方法优选包括离心；所述离心的离心力优选为1800～2200g，更优选为2000g；所述离心的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.间充质干细胞来源的纳米微囊泡在制备治疗子痫前期的药物中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述间充质干细胞来源的纳米微囊泡的制备方法，包括以下步骤：1)将hucMSC体外扩增培养，待细胞汇合度达到75％～80％时收集培养上清液，去除细胞碎块后，得到MSC
‑
CM；2)将所述MSC
‑
CM去除细胞碎片和细胞器后进行超滤洗涤，收集浓缩液；3)将所述浓缩液转移至质量浓度30％的庶糖/D2O密度垫上进行密度梯度离心，收集底部缓冲垫；4)将所述底部缓冲垫稀释洗涤后进行所述超滤洗涤，收集微囊泡浓缩液除菌得到间充质干细胞来源的纳米微囊泡。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤1)中去除细胞碎块的方法包括离心；所述离心的离心力为1800～2200g，所述离心的时间为8～12min。4.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：王凤鸽，张斌，满冬梅，赵柔，刘淼，魏利，梁敬，陈彦戎，魏东，
申请(专利权)人：济宁医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：