抗人periostin单克隆嵌合抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及抗体技术领域，尤其涉及抗人periostin单克隆嵌合抗体及应用。本发明专利技术提供的抗人periostin单克隆嵌合抗体轻链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；重链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。所述重链及轻链可变区分别与人重链的恒定区及人轻链恒定区嵌合，形成比现有技术的抗人periostin单克隆抗体更加安全可靠的、功能更显著的抗人periostin嵌合抗体，所述嵌合抗体能够高特异性地抗periostin的作用。性地抗periostin的作用。

【技术实现步骤摘要】
抗人periostin单克隆嵌合抗体及应用


[0001]本专利技术涉及抗体
，尤其涉及抗人periostin单克隆嵌合抗体及应用。

技术介绍

[0002]Periostin由835个氨基酸组成，分子量为90kDa；蛋白质序列分析表明，该periostin包含一个典型的信号序列及4个富含半胱氨酸的重复结构域，并具有C末端结构域；由于C端结构域的不同引起转录过程选择性剪接，其转录产物具有4种不同的单体，各个单体在不同组织的表达不尽相同。通过对periostin的生物学功能的研究表明periostin是一种细胞基质蛋白，在组织损伤和组织修复过程中periostin的表达上调，并且可以与细胞外基质中的蛋白相结合。Periostin是一种独特的细胞外基质蛋白，其表达主要集中于骨外膜、牙周韧带、肌腱、角膜、成熟的心脏瓣膜以及发育的心脏的心内膜垫等在体内机械应力大的富含胶原的结缔组织。组织损伤、修复、重塑等过程都会出现periostin的表达增加。
[0003]不仅如此，近年来人们发现肿瘤组织与正常组织间periostin的表达具有明显差异，且多项研究证实periostin可以促进肿瘤细胞存活、侵袭、血管生成及转移，提示其与肿瘤的恶性程度转移及预后密切相关。有研究表明，periostin在肿瘤的形成中起到重要的作用，在多种癌症组织中，其表达量均有上调，包括结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、甲状腺癌、胃癌等。Periostin上调，可促进肿瘤细胞侵袭和转移；Periostin通过激活Akt通路，整合素αvβ3结合上调Akt酶磷酸化，促进缺血诱导的视网膜新生血管增生，从而促进肿瘤细胞的适应生存能力。
[0004]20世纪70年代单克隆抗体技术问世，即抗单个抗原决定簇的抗体，具有高度的特异性和均一性，且能大量生产，从而为抗体的研究和应用带来了巨大突破。但目前鼠源性抗体作为异种蛋白应用于人体，可引起针对异种蛋白的免疫反应，易产生人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody，HAMA)，既可影响单抗的治疗效果，又可引起过敏反应。其次，由于鼠源性抗体对人而言是异源蛋白，在体内快速清除，血液循环中半衰期很短。抗体相对分子量较大，抗体分子很难穿越体内屏障系统到达靶位发挥作用。另外，抗体本身效能不强，不能发挥理性治疗效果。鼠源性抗体通常不能有效激活人体的生物效应功能，与人补体成分结合能力低，介导的CDC和ADCC作用均较弱。
[0005]相比之下，人-鼠嵌合抗体的人源化程度可达到70％，最大限度的保留了亲本活性，人抗体恒定区的引入则大大降低了免疫原性，降低了人抗鼠抗体反应的发生几率，改善了临床治疗。随着蛋白质基因工程技术的迅速发展，使人们有可能将编码小鼠McAb可变区的基因与编码人Ig恒定区的基因重组相嵌，构建成鼠/人嵌合Ig基因，经表达而制备出一种鼠/人嵌合McAb(cMcAb)。这种cMcAb既具有鼠源性McAb容易制备的优点，又不易在人体内产生异常的免疫反应；既保留了鼠源性McAb结合特异性抗原的特性，又具备在体内介导补体和有关效应细胞杀伤和清除靶抗原的作用，从而为解决McAb的体内应用这一难题提供了一条新的途径。
[0006]因此，研发抗人periostin单克隆嵌合抗体，对于提高人体的相容性和安全性存在
重要意义。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供抗人periostin单克隆嵌合抗体及应用，并提供了编码该单抗的核酸、载体和宿主细胞，从而提高了periostin单克隆的相容性和安全性，且延长了在人体内停留的时间，提高了有效性。
[0008]本专利技术提供的抗人periostin单克隆嵌合抗体中：
[0009]所述轻链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；
[0010]所述重链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。
[0011]一些实施例中，所述抗人periostin单克隆嵌合抗体中，轻链的三个CDR区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2和3所示；所述重链的三个CDR区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、5和6所示。
[0012]其中，SEQ ID NO:1所示的序列为SSASY；SEQ ID NO:2所示的序列为DTS；SEQ ID NO:3所示的序列为QQWSSNPPT；SEQ ID NO:4所示的序列为GYSFTDYF；SEQ ID NO:5所示的序列为INPYSGDT；SEQ ID NO:6所示的序列为GRSGVSGLDY。
[0013]所述轻链的4个FR区分别具有如SEQ ID NO:7、8、9和10所示的氨基酸序列；
[0014]所述重链的4个FR区分别具有如SEQ ID NO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。
[0015]一些实施例中，所述抗人periostin单克隆嵌合抗体中，所述轻链的4个FR区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7、8、9和10所示；所述重链的4个FR区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:11、12、13和14所示。
[0016]其中，SEQ ID NO:7所示的序列为X1IVLTQSPX9IMSASPGDKVTMT CSAS；X1为D或Q，X9为A或V；SEQ ID NO:8所示的序列为MHWYQQKSGTSPKRWIY；SEQ ID NO:9所示的序列为KLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEA EDAATYYC；SEQ ID NO:10所示的序列为FGGGTKLEIK；SEQ ID NO:11所示的序列为EVQLQQSGPEL VKPGASVRISCKAS；SEQ ID NO:12所示的序列为MNWVKQSHGRSLEWIGR。SEQ ID NO:13所示的序列为LYNQRLKGKATLTVDKSSSTAHMELLS LTSEDSAVYYC；SEQ ID NO:14所示的序列为WGQGTSVTVSS。
[0017]本专利技术所述单克隆嵌合抗体中，轻链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；重链可变区具有如SEQ ID NO:16或17所示的氨基酸序列。
[0018]一些实施例中，本专利技术所述的单克隆嵌合抗体中，其轻链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，重链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；
[0019]或其轻链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，重链可变区具有如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
[0020]本专利技术所述的单克隆嵌合抗体中，还包括恒定区，所述重链的恒定区为人IgG1；所述轻链的恒定区为periostin的轻链恒定区，其为kappa型。
[0021]本专利技术提供的抗人periostin单克隆嵌合抗体以上述重链及轻链可变区分别与人重链的恒定区及人轻链恒定区嵌合，形成比现有技术的抗人periostin鼠单克隆抗体更加安全可靠的、功能更显著的抗人p本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗人periostin单克隆嵌合抗体，其特征在于，所述轻链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:1、2和3所示的氨基酸序列；所述重链的三个CDR区分别具有如SEQ ID NO:4、5和6所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗人periostin单克隆嵌合抗体，其特征在于，所述轻链的4个FR区分别具有如SEQ ID NO:7、8、9和10所示的氨基酸序列；所述重链的4个FR区分别具有如SEQ ID NO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的单克隆嵌合抗体，其特征在于，其轻链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，重链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；或其轻链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，重链可变区具有如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1～3任一项所述的抗人periostin单克隆嵌合抗体，其特征在于，还包括：恒定区，所述重链的恒定区为人IgG1；所述轻链的恒定区为periostin的轻链恒定区，其为kappa型。5.编码权利要求1～4任一项所述的抗人periostin单克隆嵌合抗体的核苷酸。6.一种表达载体，其特征在于，包括编码权利要求1～4任一项所述的抗人periostin单克隆嵌合抗体的核苷酸。7.转化或转染权利要求6所述的表达载体的重组宿主；所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪娇，赵洪礼，何伟，何向东，张朔，赵航，冯铃，刘辉，张鹏，周艳楠，
申请(专利权)人：沈阳眼产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：