一种获得识别空间构象表位抗体的方法技术

本发明专利技术公开了一种获得识别空间构象表位抗体的方法，其包括如下步骤：构建重组质粒；所述重组质粒表达抗原蛋白和表面锚定蛋白形成的融合蛋白；将重组质粒转入真核细胞，获得重组真核细胞；重组真核细胞表面展示抗原蛋白或抗原蛋白片段；采用重组真核细胞免疫动物，获得杂交瘤细胞；从杂交瘤细胞中分离抗体；该抗体即为识别抗原蛋白空间构象表位的抗体。采用该方法获得的识别CCN1蛋白空间构象表位的抗体—单克隆抗体15G7，其仅结合天然CCN1蛋白，不结合变性CCN1蛋白，即只能专一性的识别天然构象的CCN1蛋白。本发明专利技术可以获得识别空间构象表位抗体，具有重要的应用价值。具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种获得识别空间构象表位抗体的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种获得识别空间构象表位抗体的方法。

技术介绍

[0002]治疗性抗体已被证明是对抗人类疾病的强大工具。迄今为止，市场上大多数治疗性抗体都是通过杂交瘤和噬菌体展示方法开发的。然而，通过这些方法产生的高亲和力抗体依旧充满挑战。由于蛋白抗原本身的特性，采用上述方法获得的抗体可能随机识别并结合到抗原不同结构区域(抗体结合表位)。抗体在体内的生物学活性各异。例如抗CD20抗体依照抗体结合表位分为I型抗体(如美罗华单抗)和II型抗体(如奥比妥珠单抗)，II型抗体引发的补体杀伤作用较I型抗体显著降低但具有更强的抗体依赖的细胞杀伤能力、以及I型抗体所不具有的对靶细胞直接杀伤的能力。在非霍奇金式淋巴瘤的临床数据对比中，与美罗华单抗相比，奥比妥珠单抗显著延长了病人的无进展生存期。又如，抗CD22抗体M971和Epratuzumab由于结合表位的不同，仅后者可以引发CD22分子的迅速内化。综上所述，在抗体筛选过程中，保证所构建抗体筛选文库的多样性是获得具有生物学活性抗体的重要前提。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种获得识别抗原蛋白空间构象表位抗体的方法，包括如下步骤：(1)构建重组质粒；所述重组质粒表达抗原蛋白和表面锚定蛋白形成的融合蛋白；(2)将步骤(1)构建的重组质粒转入真核细胞，筛选，获得重组真核细胞；所述重组真核细胞表面展示抗原蛋白或抗原蛋白片段；(3)采用步骤(2)获得的重组真核细胞免疫动物，获得杂交瘤细胞；(4)从步骤(3)获得的杂交瘤细胞中分离抗体；该抗体即为识别抗原蛋白空间构象表位的抗体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，表面锚定蛋白为糖磷脂酰肌醇。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，真核细胞为Sp2/0
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Ag14细胞。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述抗原蛋白为CCN1蛋白。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述重组质粒为SEQ ID NO:1所示的融合序列和pOptiVEC
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TOPO载体使用TA克隆法连接而成...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋南，林坜桁，
申请(专利权)人：杏联药业苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：