一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物及其应用。所述生物标志物包括SHISA5蛋白。本发明专利技术首次发现NOA患者精液中Wnt受体抑制蛋白SHISA5的浓度显著低于正常男性，并提出SHISA5蛋白可作为评估NOA患者生精功能障碍的潜在预警分子，有助于扩充诊断NOA指标，以扩大诊断范围，对于NOA诊断领域具有重要意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生殖医学
，涉及一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物及其应用。

技术介绍

[0002]无精子症的发生率占男性不育症的10％
‑
20％。根据睾丸中有无精子可分为两类：一类是睾丸具有正常精子发生的阻塞性无精子症(obstructive azoospermia，OA)，另一类是睾丸精子发生障碍的非阻塞性无精子症(non
‑
obstructive azoospermia，NOA)。对非阻塞性无精症的准确诊断可以为临床医生提供有价值的指导。
[0003]睾丸体积，血清卵泡刺激素(FSH)水平等可辅助诊断NOA患者，亦有报道以RNA作为NOA的标志物，如CN113215246A公开了一种非梗阻性无精子症诊断的circRNA标志物及其应用，通过实验证实与生精功能正常的对照组相比，非梗阻性无精子症患者血清中的hsa_circMAN1A2表达明显升高，且血清中hsa_circMAN1A2的相对表达量对于非梗阻性无极精子症的预测效能较大。因此，hsa_circMAN1A2能够作为非梗阻性无精子症诊断的circRNA标志物；CN112176052A公开了一种与非梗阻性无精子症诊断相关的血浆外泌体tsRNA标志物及其应用，该标志物为tRF
‑
Gly
‑
GCC
‑
002，其在非梗阻性无精子症和梗阻性无精子症患者血浆中差异表达，能够较好地诊断非梗阻性无精子症，可见，目前已开发出多种诊断NOA指标，但是这些指标主要集中于非编码RNA，其定量检测较为困难，仍有一部分患者无法利用这些指标进行正确的诊断。
[0004]综上所述，开发新的与非梗阻性无精子症相关的生物标志物，尤其是蛋白质分子标志物，以扩充诊断NOA指标，对于NOA诊断领域具有重要意义。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物及其应用，本专利技术首次发现精液中SHISA5蛋白的浓度与非阻塞性无精子症相关，提示SHISA5蛋白可作为评估非阻塞性无精子症(NOA)患者生精功能障碍的潜在预警分子。
[0006]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物，所述标志物包括SHISA5蛋白。
[0008]本专利技术中，结合测序数据与临床样本，对NOA睾丸巨噬细胞相关的差异性分泌蛋白进行筛选和验证，首次发现NOA患者精液中Wnt受体抑制蛋白SHISA5的浓度显著低于正常男性，并提出SHISA5蛋白可作为评估NOA患者生精功能障碍的潜在预警分子，有助于扩充诊断NOA指标，以扩大诊断范围，对于NOA诊断领域具有重要意义。
[0009]优选地，所述SHISA5蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。
[0010]SEQ ID NO.1：
[0011]MASRGLSLFPESCPDFCCGTCDDQYCCSDVLKKFVWSEERCAVPEASVPASVEPVEQLGSALRFRPGY
NDPMSGFGATLAVGLTIFVLSVVTIIICFTCSCCCLYKTCRRPRPVVTTTTSTTVVHAPYPQPPSVPPSYPGPSYQGYHTMPPQPGMPAAPYPMQYPPPYPAQPMGPPAYHETLAGGAAAPYPASQPPYNPAYMDAPKAAL。
[0012]第二方面，本专利技术提供第一方面所述的非梗阻性无精子症相关的生物标志物在制备非梗阻性无精子症诊断或监测产品中的应用。
[0013]本专利技术首次将SHISA5蛋白作为生物标志物应用于制备非梗阻性无精子症诊断或监测产品中，为开发新的非梗阻性无精子症诊断或监测产品提供思路。
[0014]第三方面，本专利技术提供一种非梗阻性无精子症诊断或监测试剂盒，所述试剂盒包括第一方面中所述SHISA5蛋白的抗体。
[0015]本专利技术中，首次提出一种基于检测SHISA5蛋白的非梗阻性无精子症诊断或监测试剂盒，所述试剂盒通过检测精液中SHISA5蛋白的浓度，能够快速、准确的表征异常样本，从而辅助非梗阻性无精子症诊断或监测。
[0016]根据本专利技术，能够特异性识别SHISA5蛋白且可应用于免疫检测的抗体均适用于本专利技术。
[0017]优选地，所述试剂盒还包括SHISA5蛋白标准品、多孔板、洗涤液、稀释液、显色剂或终止液中的任意一种或至少两种的组合。
[0018]优选地，所述多孔板包括96孔板。
[0019]优选地，所述洗涤液包括磷酸盐缓冲液。
[0020]优选地，所述显色剂包括TMB底物溶液。
[0021]优选地，所述终止液包括硫酸。
[0022]本专利技术的试剂盒，采用常规酶联免疫吸附法(ELISA)测定SHISA5蛋白浓度，商品化ELISA试剂均适用于本专利技术。
[0023]优选地，所述试剂盒的使用方法包括：
[0024]收集精液样本，以ELISA检测方法检测精液样本中SHISA5蛋白的浓度，根据所述SHISA5蛋白的浓度判断是否为非梗阻性无精子症阳性。
[0025]优选地，所述试剂盒的使用方法包括以下步骤：
[0026](1)收集精液样本进行预处理；
[0027](2)使用SHISA5蛋白的抗体包被多孔板；
[0028](3)按ELISA检测方法，检测所述精液样本中SHISA5蛋白的浓度，根据所述SHISA5蛋白的浓度判断是否为非梗阻性无精子症阳性。
[0029]优选地，步骤(1)所述预处理包括将所述精液样本置于35～38℃液化25～35min，离心并收集上清液并进行过滤。
[0030]优选地，步骤(2)所述包被多孔板包括使用磷酸盐缓冲液稀释SHISA5蛋白的抗体，将稀释后溶液加入多孔板，于4～8℃放置12～16h，使用牛血清白蛋白封闭。
[0031]作为优选的技术方案，所述试剂盒的使用方法包括以下步骤：
[0032](1)收集手淫取精的精液样本，在35～38℃水浴锅中放置25～35min进行液化，液化完毕后离心去除精液内精子和不溶物杂质，收集上清液，使用30～45μm滤网进一步去除杂质，得到精浆；
[0033](2)使用磷酸盐缓冲液稀释SHISA5蛋白的抗体，稀释至终浓度浓度为100ng/mL～20μg/mL，将稀释液加入多孔板，置于4～8℃冰箱中放置12～16h，使用牛血清白蛋白封闭，
然后烘干装袋；
[0034](3)取所述精浆，按照常规ELISA检测方法，检测其中SHISH5蛋白的浓度，根据所述SHISA5蛋白的浓度判断是否为非梗阻性无精子症阳性。
[0035]优选地，所述非梗阻性无精子症阳性的判断标准为精液样本中SHISA5蛋白的浓度低于8.598ng/mL。
[0036]与现有技术相比，本专利技术具有以下有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与非梗阻性无精子症相关的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括SHISA5蛋白。2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述SHISA5蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。3.权利要求1或2所述的非梗阻性无精子症相关的生物标志物在制备非梗阻性无精子症诊断或监测产品中的应用。4.一种非梗阻性无精子症诊断或监测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括SHISA5蛋白的抗体。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括SHISA5蛋白标准品、多孔板、洗涤液、稀释液、显色剂和终止液。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述多孔板包括96孔板；优选地，所述洗涤液包括磷酸盐缓冲液；优选地，所述显色剂包括TMB底物溶液；优选地，所述终止液包括硫酸。7.根据权利要求4
‑
6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的使用方法包括：收集精液样本，以酶联免疫吸附法检测精液样本中SHISA5蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵亮宇，汤育新，戴英波，叶昆，何侃成，谢能庆，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：