一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于医学免疫诊断领域，具体涉及一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒及其制备方法和应用，包括实验缓冲液、捕获磁微粒溶液、标记了碱性磷酸酶的检测抗体溶液、化学发光底物溶液。本发明专利技术与现有技术相比，具有如下优势：采用真核或者原核表达的黏病毒抗性蛋白A（MxA）作为校准品或者质控品，制作标准曲线，配合使用化学发光仪，可定量检测全血、血清、血浆中黏病毒抗性蛋白A（MxA）的含量，自动化程度高，检测准确率和精度高。检测准确率和精度高。检测准确率和精度高。

【技术实现步骤摘要】
一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医学免疫诊断领域，具体涉及一种检测黏病毒抗性蛋白A(MxA)的磁微粒发光法检测试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]黏病毒抗性蛋白A(Myxovirus resistance protein，MxA)是干扰素(IFN)诱导蛋白之一，该蛋白具有抗多种病毒的活性。
[0003]MxA是由Ⅰ型干扰素(IFNα/β)诱导人细胞所产生的78kd的抗病毒蛋白，其具有生物活性稳定，抗病毒作用直接、半衰期较长，特异性好，检测方便等优点。人的MxA蛋白分布于细胞的胞浆内，大量研究资料表明，MxA蛋白与病毒的感染密切相关，对病毒反应非常敏感甚至极少的病毒量即可诱导细胞表达MxA蛋白，因此MxA蛋白可用于病毒感染的早期诊断，也可用于临床病毒感染与细菌或者其他微生物感染的鉴别诊断。
[0004]目前MxA的临床检测方法有：酶联免疫吸附实验(ELISA)、荧光层析法、胶乳增强免疫比浊法。这些检测方法自动化程度较低，限制了黏病毒抗性蛋白A的检测推广应用。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供自动化程度高、检测准确率高的检测黏病毒抗性蛋白A(MxA)的磁微粒发光法检测试剂盒及其制备方法和应用。
[0006]为实现上述专利技术目的，本专利技术的第一方面是提供一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，包括：
[0007]实验缓冲液；
[0008]捕获磁微粒溶液，由磁微粒偶联链霉亲和素(SA)制成；
[0009]标记了生物素(Biotin)的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为捕获抗体；
[0010]标记了碱性磷酸酶的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为检测抗体；化学发光底物。
[0011]捕获磁微粒溶液、捕获抗体、检测抗体均为浓缩溶液，实验开始前需用实验缓冲液进行稀释。
[0012]或者，一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，包括：
[0013]实验缓冲液；
[0014]捕获磁微粒溶液，由磁微粒偶联抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体制成；
[0015]标记了碱性磷酸酶的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为检测抗体；化学发光底物。
[0016]优选的，所述的实验缓冲液，为pH7.2
‑
7.4的Tris
‑
HCL缓冲液；实验缓冲液中含0.5
‑
2％W/V牛血清白蛋白、0.05
‑
0.1％W/V非离子型表面活性剂、0.05％W/V的消泡剂和
0.3％W/V的防腐剂。
[0017]所述的化学发光底物为酶促化学发光底物，可以为金刚烷衍生物，还可以是APS
‑
5(中文名称:(4
‑
氯苯巯基)(10
‑
甲基
‑
9,10
‑
二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐)或者AMPPD(中文名称：3
‑
(2
’‑
螺旋金刚烷)
‑4‑
甲氧基
‑4‑
(3
”‑
磷酰氧基)苯
‑
1,2
‑
二氧杂环丁烷)。
[0018]所述磁微粒为表面覆有亲水性聚合物(羧基或氨基)的磁微粒，粒径为0.5
‑
6.5μm。
[0019]所述非离子型表面活性剂为Tween
‑
20和/或曲拉通X
‑
100。
[0020]捕获磁微粒溶液、捕获抗体、检测抗体均为浓缩溶液，实验开始前需用实验缓冲液进行稀释。
[0021]本专利技术的第二方面是提供一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0022]制备实验缓冲液：配制pH7.2
‑
7.4的Tris
‑
HCL缓冲液；且使实验缓冲液含0.5
‑
2％W/V牛血清白蛋白、0.05
‑
0.1％W/V非离子型表面活性剂、0.05％W/V的消泡剂和0.3％W/V的防腐剂；
[0023]制备捕获磁微粒溶液：由磁微粒偶联链霉亲和素(SA)制成或由磁微粒偶联抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体(作为捕获抗体)制成；
[0024]制备标记了碱性磷酸酶的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为检测抗体；
[0025]选用合适的化学发光底物；
[0026]当捕获磁微粒溶液由磁微粒偶联链霉亲和素(SA)制成，再加上制备标记了生物素(Biotin)的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体的步骤。
[0027]由磁微粒偶联抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体制成捕获磁微粒溶液的具体步骤为：将磁微粒、NHS(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)、EDC(1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐)以一定质量比混合，并加入MES(2
‑
(N
‑
吗啉)乙磺酸)溶液；使磁微粒浓度为1mg/ml，恒温孵育活化，活化温度为37℃，反应时间为30min；将活化后的磁微粒与抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体进行偶联，恒温孵育活化，活化温度为37℃，反应时间为2小时；洗涤并保存。
[0028]标记了生物素(Biotin)的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体(计算MxA抗体与生物素的质量和)与磁微粒偶联链霉亲和素(SA)制成的捕获磁微粒(计算SA和磁微粒的质量和)的质量比为3:1；
[0029]抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)单克隆抗体与碱性磷酸酶的偶联采用戊二醛交联法。
[0030]本专利技术的第三方面是提供检测试剂盒在制备病毒感染诊断试剂中的应用。
[0031]本试剂盒检验原理为：
[0032]采用双抗体夹心法原理，用磁微粒偶联了链霉亲和素(SA)或者抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体制成固相载体，利用化学发光法与化学发光类测定仪器配合，检测人体血清/血浆中的黏病毒抗性蛋白A(MxA)的含量。
[0033]磁微粒偶联了链霉亲和素(SA)结合生物素(Biotin)标记的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)抗体或者磁微粒偶联了抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体与待测物结合，再与标记了碱性磷酸酶的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体形成双抗体夹心复合物，在外加磁场的作用下将复合物分离，充分洗涤后加入酶促化学发光底物。底物在酶的作用下被
催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时发出光子，形成发光反应，即可使用化学发光检测仪检测反应的发光强度。在测定波长范围内，发光强度与样本的黏病毒抗性蛋白A(MxA)的含量成正比，仪器发光值本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，其特征在于，包括：实验缓冲液；捕获磁微粒溶液，由磁微粒偶联链霉亲和素(SA)制成；标记了生物素(Biotin)的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为捕获抗体；标记了碱性磷酸酶的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为检测抗体；化学发光底物。2.一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，其特征在于，包括：实验缓冲液；捕获磁微粒溶液，由磁微粒偶联抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体制成；标记了碱性磷酸酶的抗黏病毒抗性蛋白A(MxA)的单克隆抗体，作为检测抗体；化学发光底物。3.根据权利要求1或2所述的一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，其特征在于，所述的实验缓冲液，为pH7.2
‑
7.4的Tris
‑
HCL缓冲液；实验缓冲液中含0.5
‑
2％W/V牛血清白蛋白、0.05
‑
0.1％W/V非离子型表面活性剂、0.05％W/V的消泡剂和0.3％W/V的防腐剂。4.根据权利要求1或2所述的一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，其特征在于，所述的化学发光底物为酶促化学发光底物。5.根据权利要求1或2所述的一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，所述磁微粒为表面覆有羧基或氨基的磁微粒，粒径为0.5
‑
6.5μm。6.根据权利要求5所述的一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发光法检测试剂盒，其特征在于，所述非离子型表面活性剂为Tween
‑
20和/或曲拉通X
‑
100。7.一种检测黏病毒抗性蛋白A的磁微粒发...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏智敏，范元志，李志远，
申请(专利权)人：南京艾拓生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：