一种多肽及其在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及肽领域，尤其是涉及一种多肽及其在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用。所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术的多肽GQG15可显著促进COL2A1基因、ACAN基因的mRNA表达量增加，促进间充质干细胞向软骨细胞的分化；此外，多肽GQG15还可以促进软骨细胞的增殖和修复，改善骨关节炎症状。改善骨关节炎症状。

【技术实现步骤摘要】
一种多肽及其在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用


[0001]本专利技术涉及肽领域，尤其是涉及一种多肽及其在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎(osteoarthritis，OA)是一种常见的关节疾病，表现为关节疼痛、僵硬，软骨损伤是导致骨关节炎的主要成因。本病在中年以后多发，女性多于男性，40岁人群的患病率为10％
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17％，60岁以上为50％，而在75岁以上人群则高达80％。该病有一定的致残率。而随着人口的日益老龄化，骨关节炎将成为影响人们生活质量的重要问题，骨关节炎药物市场需求将不断扩大。
[0003]目前临床上对于骨关节炎的治疗药物分为特异性治疗药物与非特异性治疗药物。非特异性治疗药物以镇痛和控制症状为主，但对软骨没有保护作用，如非甾体抗炎药等。特异性治疗药物可保护关节软骨，延缓骨关节炎进展，如氨基葡萄糖、硫酸软骨素、双膦酸盐等，但一般起效较慢，需治疗数周才见效，而且对受损软骨的再生没有作用。因此开发一种安全性好、疗效突出的新型软骨修复和/或骨关节炎药物成为医学界的一大目标。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种多肽及其在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用，该多肽可以用于骨形成，促进软骨修复和/或治疗骨关节炎。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]本专利技术提供了一种多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。/>[0007]本专利技术的多肽含有15个氨基酸，其序列为Gly Gln Gly Phe Ser Tyr Lys Ala Val Phe Ser Thr Gln，专利技术人将多肽命名为GQG15，以下多肽均用此命名。
[0008]本专利技术的多肽可以用于软骨修复和/或用于治疗骨关节炎。
[0009]作为本专利技术所述多肽的优选实施方式，所述多肽采用固相合成工艺合成。
[0010]本专利技术的多肽通过常规的固相合成工艺制备，合成的多肽纯度＞95％。
[0011]作为本专利技术所述多肽的优选实施方式，所述多肽用于软骨修复，和/或用于治疗骨关节炎。
[0012]本专利技术提供了上述多肽在促进COL2A1基因和ACAN基因表达量中的应用。
[0013]本专利技术的多肽GQG15可显著促进COL2A1基因、ACAN基因的mRNA表达量增加，并表现出明显的量效关系和时效关系，说明多肽GQG15可以诱导进COL2A1基因和ACAN基因的表达，促进间充质干细胞向软骨细胞的分化。
[0014]作为本专利技术所述多肽应用的优选实施方式，所述多肽的浓度为0.1～10μM。
[0015]更优选地，所述多肽的浓度为0.1μM、1μM或10μM。
[0016]当多肽的浓度为0.1μM、1μM和10μM时，可以显著促进COL2A1基因和ACAN基因表达
量增加，使得间充质干细胞向软骨细胞分化，有利于软骨修复。
[0017]作为本专利技术所述多肽应用的优选实施方式，多肽与其他治疗骨关节炎的药物联用来治疗骨关节炎，所述其他治疗骨关节炎的药物包括非甾体抗炎药和/或玻璃酸钠注射液。
[0018]本专利技术提供了上述多肽的药学上可接受的盐，所述盐为醋酸盐、盐酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐中的一种。
[0019]本专利技术还提供了一种药物，所述药物含有治疗有效剂量的如上述的多肽和药学上可接受的载体。
[0020]作为本专利技术所述药物的优选实施方式，所述载体包括生理盐水、磷酸钠缓冲液、玻璃酸钠溶液中的至少一种。
[0021]另外，本专利技术提供了上述多肽在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用。
[0022]经过实施例3的数据证实，添加不同浓度的多肽可以显著提高OD490，促进被IL
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1β损伤的大鼠软骨细胞的增殖；当使用多肽处理体外软骨细胞损伤模型3
‑
7天时，其软骨细胞的增殖与模型对照组有显著差异。
[0023]通过实施例4验证，本专利技术的多肽GQG15还可以修复斑马鱼软骨损伤模型，中剂量(100ng/尾)、高剂量(500ng/尾)的多肽GQG15均表现出明显的软骨修复效果。
[0024]当采用BMP
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2肽处理斑马鱼软骨损伤模型时，其测定的荧光强度不及本专利技术的多肽GQG15，说明BMP
‑
2促进受损软骨再生的效果不及多肽GQG15。
[0025]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0026]本专利技术提供了一种多肽GQG15及其在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用，多肽GQG15可显著促进COL2A1基因、ACAN基因的mRNA表达量增加，促进间充质干细胞向软骨细胞的分化；此外，多肽GQG15还可以促进软骨细胞的增殖和修复，改善骨关节炎症状。
附图说明
[0027]图1为多肽GQG15的HPLC检测图谱图；
[0028]图2为不同浓度的多肽GQG15对间充质干细胞Col2A1基因和Acan基因表达情况图；
[0029]图3为不同浓度的多肽GQG15在不同作用时间下对IL
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1β损伤的大鼠软骨细胞增殖的影响图；
[0030]图4为不同剂量的多肽GQG15修复斑马鱼软骨损伤模型的荧光强度图；
[0031]图5为不同剂量的多肽GQG15修复斑马鱼软骨损伤模型结果图。
具体实施方式
[0032]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0033]在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0034]实施例1、多肽GQG15的固相合成
[0035]本专利技术的多肽GQG15委托合肥国肽生物科技有限公司采用常规固相工艺合成，合成的多肽GQG15纯度＞95％，其HPLC检测图谱分别如图1所示，合成500mg。
[0036]实施例2、多肽GQG15体外促进间充质干细胞的分化
[0037]1、人间充质干细胞的培养和传代：将人骨髓间充质干细胞(BMSCs，购自广州赛业生物科技有限公司)复苏，加入完全培养基，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养。复苏后的第二天，给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基，每两天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80％
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90％的汇合度，然后进行传代培养。
[0038]2、成软骨诱导：将多肽GQG15用磷酸缓冲液(PBS)溶解。用含不同浓度的多肽GQG15(0.1μM、1μM和10μM)的完全成软骨培养基重悬细胞，使得BMSCs的浓度为每毫升5.0
×
105个细胞，并以PBS为阴性对照，1μM人胰岛素生长因子1(IGF
‑
1)为阳性对照。处理的BMSCs置于37℃，5％CO2饱和湿度条件下孵育。每2
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽采用固相合成工艺合成。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽用于软骨修复，和/或用于治疗骨关节炎。4.如权利要求1或2所述的多肽在促进COL2A1基因和ACAN基因表达量中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述多肽的浓度为0.1～10μM。6.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，其与其他治疗骨关节炎的药物联用来治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：许元生，卢肖宇，汤宇晴，苏博雅，
申请(专利权)人：广州领晟医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：