一种软骨再生肽KPS10及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了一种软骨再生肽KPS10及其应用。所述软骨再生肽为：(a).如SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列；或者，(b).在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与(a)中氨基酸具有90％以上同源性的氨基酸序列。本发明专利技术的软骨再生肽KPS10安全性高，可以促进间充质干细胞向软骨细胞的分化，并且还可以提高大鼠软骨细胞的增殖，对斑马鱼软骨损伤模型有修复作用，为软骨修复和治疗骨关节炎疾病提供新的路径。修复和治疗骨关节炎疾病提供新的路径。修复和治疗骨关节炎疾病提供新的路径。

【技术实现步骤摘要】
一种软骨再生肽KPS10及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种软骨再生肽KPS10及其应用。

技术介绍

[0002]骨关节炎为一种退行性病变，系由于增龄、肥胖、劳损、创伤、关节先天性异常、关节畸形等诸多因素引起的关节软骨退化损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生，又称骨关节病。关节软骨损伤是骨关节炎的主要病理改变。关节软骨损伤后没有或很少有自我修复能力，这与关节软骨内无血管、神经及淋巴管支配有关。目前关节软骨损伤修复的主要治疗措施包括局部用药、软骨细胞移植、手术(关节置换)等，虽然可在一定程度上缓解症状，但由于未能充分激活关节软骨本身的修复机制，修复往往不完全，甚至可能引发周围组织发生降解，出现继发性骨关节炎。因此，关节软骨损伤修复成为骨科领域重要问题。
[0003]间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)具有强大的增殖能力、多向分化潜能及低免疫原性，在免疫调节、减轻炎症反应、损伤修复方面表现出广阔的应用前景，以间充质干细胞为种子细胞的组织工程学技术为治疗关节软骨损伤提供了新的方法，间充质干细胞具有向软骨细胞分化的潜能，研究发现间充质干细胞向软骨细胞分化并可修复动物的软骨缺损。运用间充质干细胞防治关节软骨损伤，不仅能在结构上影响组织修复，同时可以进行有效的免疫修饰及抗炎。但是，如何使间充质干细胞更有效的向软骨细胞分化是目前有待解决的问题。现在实验室常规使用的促进间充质干细胞分化增值的诱导剂是各种细胞因子，如转化生长因子TGF
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β、胰岛素样生长因子IGF
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1，然而这些细胞因子具有高浓度、高价格、高不良反应的缺点，而且人体的内环境是很难靠细胞因子来模拟的故寻找一种安全、高效且可替代生长因子的药物成为当务之急。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种软骨再生肽KPS10及其应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]本专利技术提供了一种软骨再生肽KPS10，所述软骨再生肽KPS10为：
[0007](a).如SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列；或者，
[0008](b).在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与(a)中氨基酸具有90％以上同源性的氨基酸序列。
[0009]在本专利技术中，SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列为Lys Pro Ser Ser Ala Pro Thr Gln Leu Asn，共10个氨基酸，专利技术人将其命名为软骨再生肽KPS10，该软骨再生肽KPS10可以促进软骨再生，使得软骨得以增殖和修复，有利于为软骨修复和治疗骨关节炎疾病提供新的路径。
[0010]作为本专利技术所述软骨再生肽的优选实施方式，所述软骨再生肽KPS10采用固相合成工艺合成的纯度大于95％。
[0011]本专利技术还提供了一种药物，包括上述软骨再生肽KPS10和药学上可接受的载体。所述载体为本领域常规的药物载体，例如葡萄糖、环糊精等。
[0012]所述药物为胶囊剂、片剂、颗粒剂或粉剂的形式。
[0013]本专利技术还提供了上述软骨再生肽KPS10在促进COL2A1基因和ACAN基因表达量中的应用。所述软骨再生肽KPS10的浓度为0.1～10μM。
[0014]本专利技术还提供了上述软骨再生肽KPS10在促进间充质干细胞分化中的应用。
[0015]经过软骨再生肽KPS10体外对间充质干细胞分化的试验可知，本专利技术的软骨再生肽KPS10可以诱导COL2A1基因和ACAN基因的表达，从而促进间充质干细胞向软骨细胞的分化，其表现为COL2A1基因、ACAN基因的mRNA表达量增加，并且表现出明显的量效关系和时效关系。
[0016]本专利技术还提供了上述软骨再生肽KPS10在制备软骨修复和/或骨关节炎药物中的应用。
[0017]本专利技术还提供了上述软骨再生肽KPS10在由IL
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1β诱导损伤的大鼠软骨细胞增殖中的应用。所述软骨再生肽KPS10的有效剂量浓度为0.01～10μM。
[0018]通过软骨再生肽KPS10对IL
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1β损伤的大鼠软骨细胞增殖的影响试验结果知，加入不同有效剂量浓度为0.01～10μM的软骨再生肽KPS10处理IL
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1β诱导损伤的大鼠软骨细胞，其结果为OD490明显升高，表明软骨再生肽KPS10促进了大鼠软骨细胞的增殖，其中1、10μM软骨再生肽KPS10剂量组在处理3、7天后，软骨细胞的增殖与模型对照组有显著的统计学意义。
[0019]本专利技术还提供了上述软骨再生肽KPS10在修复斑马鱼软骨损伤模型中的应用。在该应用中，软骨再生肽KPS10的浓度为20～500ng/尾。
[0020]在本专利技术中，中剂量(100ng/尾)、高剂量(500ng/尾)的软骨再生肽KPS10均显示出明显的软骨修复效果，尤其高剂量软骨再生肽KPS10修复软骨效果更佳，且量效关系明显。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0022]本专利技术提供了一种软骨再生肽KPS10及其应用，本专利技术的软骨再生肽KPS10安全性高，可以促进间充质干细胞向软骨细胞的分化，并且还可以提高大鼠软骨细胞的增殖，对斑马鱼软骨损伤模型有修复作用，为软骨修复和治疗骨关节炎疾病提供新的路径。
附图说明
[0023]图1为软骨再生肽KPS10的HPLC检测图谱图；
[0024]图2为不同浓度的软骨再生肽KPS10对间充质干细胞COL2A1基因和ACAN基因mRNA表达情况图；
[0025]图3为不同浓度的软骨再生肽KPS10在不同作用时间下对IL
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1β损伤的大鼠软骨细胞增殖的影响图；
[0026]图4为不同剂量的软骨再生肽KPS10修复斑马鱼软骨损伤模型的荧光强度图；
[0027]图5为不同剂量的软骨再生肽KPS10修复斑马鱼软骨损伤模型结果图。
具体实施方式
[0028]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对
本专利技术作进一步说明。
[0029]在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0030]实施例1、软骨再生肽KPS10的固相合成
[0031]本专利技术的软骨再生肽KPS10委托合肥国肽生物科技有限公司采用常规固相工艺合成，合成的软骨再生肽KPS10的纯度＞95％，其HPLC检测图谱分别如图1所示，合成500mg。软骨再生肽KPS10的氨基酸序列为：Lys Pro Ser Ser Ala Pro Thr Gln Leu Asn(如SEQ ID NO:1所示)，共10个氨基酸。
[0032]实施例2、软骨再生肽KPS10对间充质干细胞分化的作用
[0033]1、人间充质干细胞的培养和传代：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种软骨再生肽KPS10，其特征在于，所述软骨再生肽KPS10为：(a).如SEQ ID NO:1所述的氨基酸序列；或者，(b).在(a)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且与(a)中氨基酸具有90％以上同源性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的软骨再生肽KPS10，其特征在于，所述软骨再生肽KPS10采用固相合成工艺合成的纯度大于95％。3.一种药物，其特征在于，包括如权利要求1所述的软骨再生肽KPS10和药学上可接受的载体。4.如权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药物为胶囊剂、片剂、颗粒剂或粉剂的形式。5.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：许元生，卢肖宇，宋燕，吴才梅，卢圆，
申请(专利权)人：广州领晟医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：