本发明专利技术提供了一种不需要离心机的细胞回收方法，以抑制对细胞的损害。当回收在含有液体培养基的至少一个容器中培养的并粘附在所述容器内表面的细胞时，执行培养基排出步骤(步骤S11)，其从所述容器中排出所述培养基；剥离液供应步骤(步骤S12)，其在排出所述培养基后，向所述容器供应用于从所述容器内表面剥离细胞的剥离液；剥离液排出步骤(步骤S14)，其在从所述容器内表面完全剥离所述细胞之前，从所述容器中排出所述剥离液；等待步骤(步骤S15)，其在所述剥离液排出之后，等待直到所述细胞在残留的剥离液的作用下被剥离；以及回收液供应步骤(步骤S16)，其在所述等待步骤完成之后，向所述容器供应用于回收细胞的回收液。所述容器供应用于回收细胞的回收液。所述容器供应用于回收细胞的回收液。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞回收方法及细胞培养装置
[0001]本专利技术涉及一种细胞回收方法，用于回收在含有液体培养基的容器中培养并粘附在容器内表面的细胞，以及一种能够执行该细胞回收方法的细胞培养装置。
技术介绍
[0002]当在含有液体培养基的容器中培养细胞时，容器中的细胞需要在培养过程中被转移到另一个容器中的传代培养(subculture)时或在培养完成后收获细胞时被回收。传统上，这种细胞回收操作是按以下方式进行的。也就是说，在排出容器中的培养基后，向容器中供应剥离液，在剥离液的作用下，粘附在容器内表面的细胞被剥离。接下来，将含有细胞的剥离液转移到离心管中，并通过离心机将离心管中的细胞与剥离液分离，从而回收细胞。
[0003]近年来，自动培养iPS细胞和ES细胞的细胞培养装置的发展得到了促进。然而，当离心机被引入到这样的细胞培养装置中时，会带来问题，即装置变得很大，成本增加。鉴于此，专利文献1中记载的细胞培养装置采用了一种不需要离心机的细胞回收方法。具体地说，在供应剥离液后，当细胞的粘附力减弱时，剥离液被排出，然后将培养基供入容器。细胞在这个时候被流动的培养基的力从容器的内表面剥离。这样就不需要将细胞从剥离液中分离出来，从而不需要离心机。
[0004]现有技术文件
[0005]专利文件
[0006]专利文献1：日本专利技术专利公开第2017
‑
6058号
技术实现思路
[0007]本专利技术要解决的问题
[0008]然而，在专利文献1所述的细胞回收方法中，具有弱粘附力的细胞被流动的培养基的力从容器的内表面剥离。因此，对细胞施加了过大的力，这可能会损坏细胞。此外，在专利文件1中，细胞在剥离液的作用充分施加在细胞上之前就被剥离了。因此，被剥离的细胞是以附聚物的形式存在。因此，在细胞被回收后，通过让含有细胞的培养基(细胞悬浮液)通过管泵来破坏细胞附聚物。在这一步骤中，细胞也可能因被管泵处理而被损坏。
[0009]本专利技术考虑了上述事项，并提供了不需要离心机并能减少对细胞的损害的细胞回收方法的一些实施方式。
[0010]解决问题的手段
[0011]根据本专利技术的一个实施方式，提供了一种细胞回收方法，用于回收在含有液体培养基的至少一个容器中培养的并粘附在该容器的内表面上的细胞，该方法包括执行：培养基排出步骤，其从容器中排出液体培养基；剥离液供应步骤，其在液体培养基排出后，向容器供应用于从容器内表面剥离细胞的剥离液；剥离液排出步骤，其在从容器内表面完全剥离细胞之前，从容器中排出所述剥离液；等待步骤，其在剥离液排出之后，等待直到细胞在残留的剥离液的作用下被剥离；以及回收液供应步骤，其在所述等待步骤完成之后，向所述
容器供应用于回收细胞的回收液。
[0012]在根据本专利技术的细胞回收方法中，在剥离液排出后，在等到细胞被残余剥离液的作用下被剥离后，供应回收液。因此，没有必要将细胞从剥离液中分离出来，而且有可能消除对离心机的需求。此外，由于该过程要等到细胞在残留剥离液的作用下被分离，因此没有必要在流动的回收液的作用下强行分离粘附在容器内表面的细胞。此外，由于细胞在残留剥离液的作用下被充分地相互分离，因此没有必要用管泵等来分解细胞附聚物。因此，根据本专利技术，有可能在消除对离心机的需求的同时，抑制对细胞的损害。
[0013]根据本专利技术的另一个实施方式，提供了一种被配置为执行上述细胞回收方法的细胞培养装置，包括：培养基供应/排出装置，配置为向容器供应液体培养基和从容器中排出液体培养基；剥离液供应/排出装置，配置为向容器供应剥离液和从容器中排出剥离液，回收液供应/排出装置，配置为向容器供应回收液和从容器中排出回收液；以及控制器，其中细胞回收方法通过控制器控制培养基供应/排出装置、剥离液供应/排出装置和回收液供应/排出装置的操作来执行。
[0014]根据本专利技术的细胞培养装置，上述的细胞回收方法可以在没有人工干预的情况下自动执行。
[0015]在根据本专利技术的细胞培养装置中，至少一个容器可以包括至少两个容器，至少两个容器可以通过连接路径连接，并且在至少两个容器中的一个容器中执行细胞回收方法后，通过向至少两个容器中的一个容器输入气体，可以将至少两个容器中的一个容器中含有细胞的回收液转移到至少两个容器中的另一个容器。
[0016]根据这样的配置，在将细胞悬浮液(含有细胞的回收液)从至少两个容器中的一个容器转移到至少两个容器中的另一个容器的传代培养过程中，可以不通过管泵等转移细胞悬浮液。因此，有可能抑制对细胞的损害。
附图说明
[0017]图1是示出根据本专利技术的实施方式的细胞培养装置的配置的示意性正视图。
[0018]图2是示出培养器配置的正视图。
[0019]图3是示出细胞培养装置内部形成的培养回路的图。
[0020]图4是示出传代培养的一系列流程的流程图。
[0021]图5是示出细胞回收操作的示意图。
具体实施方式
[0022]现在将参照附图详细描述本专利技术的实施方式。
[0023](细胞培养装置的配置)
[0024]如图1所示，根据本实施方式的细胞培养装置1包括冷藏储存器2、加热器3、培养器4和控制器5。细胞培养装置1是根据输入并存储在控制器5中的数据来培养细胞的装置。在下面的描述中，前后方向被定义为垂直于图1中纸面的方向。
[0025]冷藏储存器2和加热器3是其中形成用于设置容纳介质或试剂的容器的架子的外壳。虽然没有显示，但冷藏储存器2和加热器3的前表面设有门，该门可以打开和关闭形成在外壳前表面的开口。冷藏储存器2设有冷却机构(未显示)，并且该冷却机构内部温度保持在
低于室温的任意温度。加热器3设置在培养器4内，加热器3内的温度与培养器4内的温度基本相等。此外，管与设置在冷藏储存器2内的容器和设置在加热器3内的容器相连，使得容器内的液体可以通过管流出。容器内的液体可以通过后述泵102排出。容器的实例包括瓶子、袋子等。
[0026]如图1和图2所示，培养器4包括第一室11，包括其前表面上的第一开/关器21；第二室12，包括其前表面上的第二开/关器22和环境调节器13。第一开/关器21、第二开/关器22以及第一室11和第二室12的壁面是由隔热材料制成。因此，在第一开/关器21和第二开/关器22关闭的状态下，第一室11和第二室12内的温度保持不变。此外，如图2所示，在第一室11内安装了密闭容器50，在第二室12内安装了密闭容器60。密闭容器50和60的内部是无菌的。容器的实例包括烧瓶、多层容器、袋子，等等。此外，在本实施方式中，密闭容器50和60是由具有CO2渗透性的材料制成。然而，密闭容器50和60可以由不允许CO2通过的材料制成。此外，密闭容器60的体积比密闭容器50的体积大。这是因为当在密闭容器50中培养的、具有高浓度的细胞被转移到密闭容器60中并在密闭容器60中进一步培养时，密闭容器60中容纳的培养基的量需要大于密闭容器50中容纳的培养基的量。然而，密闭容器60的体积比密本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞回收方法，用于回收在含有液体培养基的至少一个容器中培养的并粘附在所述容器内表面的细胞，所述方法包括执行：培养基排出步骤，从所述容器中排出所述液体培养基；剥离液供应步骤，在排出所述液体培养基后，向所述容器供应用于从所述容器内表面剥离所述细胞的剥离液；剥离液排出步骤，在从所述容器内表面完全剥离所述细胞之前，从所述容器中排出所述剥离液；等待步骤，在所述剥离液排出之后，等待直到所述细胞在残留的剥离液的作用下被剥离；以及回收液供应步骤，在所述等待步骤完成之后，向所述容器供应用于回收所述细胞的回收液。2.一种细胞培养装置，被配置为执行根据权利要求1所述的细胞回收方法，包括：培养基供应/排出装置，被配置为向所述容器供应所述液体培养基和从所述容器中...
【专利技术属性】
技术研发人员：堀井大地，竹内晴纪，须田佳雅，占部雄士，
申请(专利权)人：昕芙旎雅有限公司，
类型：发明
国别省市：
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