一种丹酚酸A有关物质的检测方法技术

本申请公开了一种丹酚酸A有关物质的检测方法。本申请中，所述检测方法包括步骤：使丹酚酸A通过高效液相色谱法进行检测，所述高效液相色谱法中流动相包括水相A和有机相B，所述水相A包括三氟乙酸水溶液，所述有机相B包括乙腈和/或甲醇。本申请提供的丹酚酸A有关物质的检测方法，可有效分离丹酚酸A中多种微量杂质，且分离度较好，主峰峰纯度很高，主峰和各杂质峰间分离情况良好，各杂质峰之间分离情况良好，能够满足新药申报的要求，尤其是化药新药申报资料针对原料药和制剂的有关物质分析方法要求。求。求。

【技术实现步骤摘要】
一种丹酚酸A有关物质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，特别涉及一种丹酚酸A有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]心脑血管疾病是人类健康的头号杀手。随着人们生活水平的逐渐提高，高脂、高糖、高蛋白在饮食中所占的比例逐渐增加。尤其是动物性脂肪，其在体内与胆固醇形成的以“低密度脂蛋白”为代表的一系列物质，逐渐沉积于血管内壁，引起血管堵塞、降低心脏、大脑等关键脏器的供血量，导致其氧供应不足，从而影响正常生理功能的发挥。
[0003]更严重的，因为血管狭窄、栓塞、栓塞脱落、栓塞堵塞毛细血管等导致的“缺血/再灌注”过程，会导致心肌细胞和大脑神经细胞的严重损伤，轻者会影响心脏和大脑的生理功能，引起各种心脑血管疾病，留下瘫痪、半身不遂、冠心病、心绞痛等并发症，重者可以直接导致死亡！
[0004]丹参是一种常用中药材，来源于唇形科鼠尾草属植物丹参(salvia miltiorrhiza)的干燥根及根茎，是全球贸易额最大的药用植物之一。丹参具有广泛的生理活性，其产品广泛的应用于药品、保健品、化妆品、功能性食品等领域。《中国药典》(一部2020版)记载，丹参具有“活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈”的功效，目前以丹参为主要活性成分的中成药，已经广泛的应用于心脑血管疾病的治疗，如：丹红注射液、复方丹参滴丸、注射用丹参多酚酸、注射用丹参多酚酸盐等。
[0005]丹参中的主要活性成分是以丹酚酸B为代表的水溶性酚酸类化合物，和以丹参酮ⅡA为代表的脂溶性丹参酮类化合物。由于中药的用药主要以“水煎煮”的方式进行，其水溶性成分受到了更加广泛的关注。研究表明，丹酚酸A是丹参中活性最高的化合物，其具有抗炎、抗氧化、清除自由基等多种生理活性，对心脑血管疾病具有重要的治疗作用。
[0006][0007]但是，丹酚酸A在丹参中含量极低，丹酚酸A的降解产物中也可能存在难以有效分离的杂质，致使其质量控制难度较大。目前已有关于丹酚酸A的HPLC分析方法的报道，它们一般来源于《药典》中丹参丹酚酸B的含量测定方法。虽然有些也经过了一定的方法优化，但仍然未能有效的实现丹酚酸A主峰及各杂质的有效分离，难以满足药物分析的严苛要求。
[0008]因此，本领域的技术人员致力于开发一种高效的，适用于药物分析的丹酚酸A有关物质的HPLC检测方法，实现丹酚酸A主峰与主要杂质的有效分离，满足新药申报的要求。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的在于提供一种丹酚酸A有关物质的检测方法，以实现丹酚酸A主峰与主要杂质的有效分离，满足药物分析的要求。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种丹酚酸A有关物质的检测方法，所述检测方法包括步骤：
[0011]使丹酚酸A通过高效液相色谱法进行检测，所述高效液相色谱法中流动相包括水相A和有机相B，所述水相A包括三氟乙酸水溶液，所述有机相B包括乙腈和/或甲醇。
[0012]在一些优选的方案中，所述水相A为三氟乙酸水溶液，所述有机相B为乙腈和甲醇。
[0013]在一些优选的方案中，所述高效液相色谱法包括梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序包括依次进行的第一阶段、第二阶段和第三阶段；
[0014]所述第一阶段中，水相A与有机相B的体积比为a1:b1，其中，a1为70～80，b1为20～30，a1+b1＝100；所述第一阶段的持续55～65分钟；
[0015]所述第二阶段中，水相A与有机相B的组成比由a1:b1均匀地变化至a2:b2，其中，a2为55～65，b2为35～45，a2+b2＝100；所述第二阶段的持续35～50分钟；
[0016]所述第三阶段中，水相A与有机相B的组成比由a2:b2均匀地变化至a3:b3，其中，a3为5～15，b3为85～95，a3+b3＝100；所述第三阶段的持续5～15分钟。
[0017]在一些优选的方案中，所述梯度洗脱程序后还包括平衡程序，
[0018]所述平衡程序包括所述第三阶段后依次进行的第四阶段、第五阶段和第六阶段；
[0019]所述第四阶段中，水相A与有机相B的组成比为a3:b3；所述第四阶段的持续5～15分钟；
[0020]所述第五阶段中，水相A与有机相B的组成比由a3:b3均匀地变化至a1:b1，其中，a1为70～80，b1为20～30，a1+b1＝100；所述第五阶段的持续3～7分钟；
[0021]所述第六阶段中，水相A与有机相B的组成比为a1:b1，所述第六阶段的持续3～7分钟。
[0022]在一些优选的方案中，所述乙腈和甲醇的体积比为(1～4):1；优选为(2～3):1，例如2.125:1。
[0023]在一些优选的方案中，所述三氟乙酸水溶液的体积百分浓度为0.01～0.2％，优选为0.02％
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0.1％，例如：0.05％。
[0024]在一些优选的方案中，所述流动相的流速为0.8～1.5mL/分钟，优选为1.1～1.3mL/分钟；例如：1.1mL/分钟、1.2mL/分钟或1.3mL/分钟。
[0025]在一些优选的方案中，所述高效液相色谱法中所用色谱柱为C18色谱柱。
[0026]在一些优选的方案中，所述C18色谱柱选自Agilent Zorbax SB
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Aq C18色谱柱、XBridge C18色谱柱、XBridge Shield RP18 C18色谱柱、CORTECS C18色谱柱和Halo C18色谱柱；最优选地，所述C18色谱柱为Agilent Zorbax SB
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Aq C18色谱柱。
[0027]在一些优选的方案中，所述C18色谱柱的柱内填料粒径为2～5μm。
[0028]在一些优选的方案中，所述色谱柱的柱温为20～30℃，例如20℃、25℃或30℃。
[0029]在一些优选的方案中，所述第一阶段中，水相A与有机相B的体积比为a1:b1，其中，a1为73～77，b1为23～27，a1+b1＝100；所述第一阶段的持续55～65分钟；例如a1:b1＝75:25，所述第一阶段的持续60分钟。
[0030]在一些优选的方案中，所述第二阶段中，水相A与有机相B的组成比由a1:b1均匀地变化至a2:b2，其中，a2为57～63，b2为35～45，a2+b2＝100；所述第二阶段的持续40～50分钟；例如a2:b2＝60:40，所述第二阶段的持续40或50分钟。
[0031]在一些优选的方案中，所述第三阶段中，水相A与有机相B的组成比由a2:b2均匀地变化至a3:b3，其中，a3为7～13，b3为85～95，a3+b3＝100；所述第三阶段的持续5～15分钟；例如a3:b3＝10:90，所述第二阶段的持续10分钟。
[0032]在一些优选的方案中，所述高效液相色谱法中，所述色谱柱柱温为22～27℃；所述流动相的流速为1.1～1.3ml/分钟；
[0033]所述水相A为三氟乙酸水溶液，其中所述三氟乙酸的体积百分浓度为0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丹酚酸A有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括步骤：使丹酚酸A通过高效液相色谱法进行检测，所述高效液相色谱法中流动相包括水相A和有机相B，所述水相A包括三氟乙酸水溶液，所述有机相B包括乙腈和/或甲醇。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述水相A为三氟乙酸水溶液，所述有机相B为乙腈和甲醇。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法包括梯度洗脱程序，所述梯度洗脱程序包括依次进行的第一阶段、第二阶段和第三阶段；所述第一阶段中，水相A与有机相B的体积比为a1:b1，其中，a1为70～80，b1为20～30，a1+b1＝100；所述第一阶段的持续55～65分钟；所述第二阶段中，水相A与有机相B的组成比由a1:b1均匀地变化至a2:b2，其中，a2为55～65，b2为35～45，a2+b2＝100；所述第二阶段的持续35～50分钟；所述第三阶段中，水相A与有机相B的组成比由a2:b2均匀地变化至a3:b3，其中，a3为5～15，b3为85～95，a3+b3＝100；所述第三阶段的持续5～15分钟。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序后还包括平衡程序，所述平衡程序包括所述第三阶段后依次进行的第四阶段、第五阶段和第六阶段；所述第四阶段中，水相A与有机相B的组成比为a3:b3；所述第四阶段的持续5～15分钟；所述第五阶段中，水相A与有机相B...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶天健，阚士东，张志杰，温昱恺，彭仁贵，潘永存，
申请(专利权)人：台州永健医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：