一种半滑舌鳎半乳糖凝集素-8的应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体的说是一种半滑舌鳎半乳糖凝集素

【技术实现步骤摘要】
一种半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体的说是一种半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8(galectin
‑
8)的应用。

技术介绍

[0002]半乳糖凝集素(Galectin)是一类糖结合蛋白，半乳糖凝集素
‑
8(Galectin
‑
8)是其中一个成员。Galectin
‑
8为分泌蛋白或胞内蛋白，其结构中包含两个由约130个氨基酸组成的保守糖识别结构域(carbohydrate
‑
recognition domain)，能特异性识别与结合β
‑
半乳糖苷。Galectin
‑
8能识别细菌表面的糖分子而与细菌结合，其与细菌结合后能激引发一系列的免疫反应发生，如促进细胞吞噬功能增强等，从而帮助机体清除病原菌。因此，Galectin
‑
8在宿主先天免疫反应中发挥着重要作用。目前，鱼类的Galectin
‑
8研究很少，其抗细菌感染的免疫功能亦不清楚。

技术实现思路

[0003]本专利技术目的在于提供一种半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8(galectin
‑
8)的应用。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0005]一种半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8的应用，半乳糖凝集素
‑
8在用于制备杀菌制剂中的应用。
[0006]所述半乳糖凝集素
‑
8核苷酸序列如SEQ ID No.1中所示。
[0007]所述半乳糖凝集素
‑
8在大肠杆菌中表达获得的重组蛋白。
[0008]所述细菌为鳗弧菌(Vibrio anguillarum)或哈氏弧菌(Vibrio harveyi)。
[0009]本专利技术具有如下优点：本专利技术的galectin
‑
8能够结合并杀死致病细菌鳗弧菌和哈氏弧菌。
附图说明
[0010]图1为本专利技术实施例提供的重组galectin
‑
8蛋白对细菌的杀伤作用。
具体实施方式
[0011]下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。实施例旨在对本专利技术进行举例描述，而非以任何形式对本专利技术进行限制。
[0012]实施例1
[0013]本专利技术中的galectin
‑
8(命名为CsGal
‑
8)为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列。
[0014]序列表SEQ ID No.1为：
[0015]MLVSRTRQTFLKPSIPFAGTILGGLLPGEMVLVQGSVPVGADRFQVDLACGSSMKPRADVAFHFNPRFSGSPCVVCNTLQCERWGPEEIQHQNPLKSAHTFELVFLVLQDKFKVAVNGAHLLQYKQRVALERVDTILISGKVAVEVVGVVPSMSNAPLAVSNIQDSQMKSILSTAGNTRVPFSGFLGDGLRVGQSVSIRAETNHNAQSFCVNLCSSESSDIAL
HLNPRLKSRIFVRNSFLSDSWGSEETALDGFPFMAGQYFEMIVYCDSQHYGVAVNGDHILTYKHRVQDLRRINQVEVQGDVSLLDVKLH
[0016](a)序列特征：
[0017]·
长度：312
[0018]·
类型：氨基酸序列
[0019]·
链型：单链
[0020]·
拓扑结构：线性
[0021](b)分子类型：蛋白质
[0022](c)假设：否
[0023](d)反义：否
[0024](e)最初来源：半滑舌鳎
[0025]序列的特征：半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8包含两个糖识别结构域，其关键位点是63
‑
67位氨基酸HFNPR，84
‑
89位氨基酸WGPEEI，224
‑
228位氨基酸HLNPR，244
‑
249位氨基酸WGSEET。
[0026]实施例2
[0027]CsGal
‑
8和硫氧还蛋白(Trx)的重组蛋白的制备
[0028]1)表达CsGal
‑
8重组蛋白的质粒pEtCsGal
‑
8的构建：
[0029]pEtCsGal
‑
8的构建如下：以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增。PCR条件为：94℃5min预变性模板DNA,然后94℃30s,55℃30s,72℃60s,30个循环。PCR产物用EZNA DNA琼脂糖胶回收试剂盒(购自于“Omega Bio
‑
tek”，美国)纯化后与PCR克隆载体PMD19
‑
T(购自于“大连TaKaRa公司”，大连)于室温连接2－4小时，连接混合液转化到大肠杆菌DH5α后在含有100μg/ml安卡青霉素、40μg/ml 5
‑
溴
‑4‑
氯
‑3‑
吲哚
‑
β
‑
D
‑
乳糖苷和24μg/ml异丙基
‑
β
‑
D
‑
硫代半乳糖苷的LB固体培养基上培养18－24小时，挑出白色转化子，提取质粒，命名为质粒pMDCsGal
‑
8。以质粒pMDCsGal
‑
8为模板用引物F2和R2进行PCR扩增，PCR条件同上。PCR产物用限制性内切酶Nde I和Xho I酶切后回收0.9kb，同时将表达载体pET28a(购自于“Novagen公司”，美国)用限制性内切酶Nde I和Xho I酶切后回收5.3kb。将上述回收的两片段用T4DNA连接酶于室温连接2－4小时，连接液转化入大肠杆菌DH5α，在含卡那霉素(50ug/ml)的LB培养基上培养18－24小时,筛选转化子提取质粒，即为pEtCsGal
‑
8。DNA测序表明pEtCsGal
‑
8含有编码凝集素CsGal
‑
8序列的基因。
[0030]所述LB组成成分按重量百分比计：1.0％蛋白胨,0.5％酵母粉,1.0％氯化钠,97.5％蒸馏水。所述F1为5
’‑
ATGCTAGTGTCACGTACAAGGCAG
‑3’
；R1为5
’‑
TCAGTGGAGTTTTACATCCAGCAGTG
‑3’
；F2为5
’‑
GGAATTCCATATGCTAGTGTCACGTACAAGGCAG
‑3’
；R2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8的应用，其特征在于：半乳糖凝集素
‑
8在用于制备杀菌制剂中的应用。2.按权利要求1所述的半滑舌鳎半乳糖凝集素
‑
8的应用，其特征在于：所述半乳糖凝集素
‑
8的氨基酸序列如SEQ ID No.1中所示。3.按权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜帅，张腾飞，孙黎，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：