热休克蛋白90在制备治疗白内障药物中的应用制造技术

本发明专利技术属医药领域，具体涉及一种热休克蛋白90(HSP90α)和其截断蛋白HSP90

【技术实现步骤摘要】
热休克蛋白90在制备治疗白内障药物中的应用


[0001]本专利技术属医药领域，具体涉及一种热休克蛋白90在制备治疗白内障药物中的应用。

技术介绍

[0002]白内障是全球首位致盲眼病，目前尚无有效药物，唯一治疗方式为手术去除混浊晶状体纤维，结合透明人工晶体置换，但术后容易导致多种并发症的产生，如后发性白内障等，再次造成视力障碍。动物实验及临床研究证明，婴幼儿白内障手术后晶状体囊袋残留上皮细胞可再生为晶状体(参见Haotian Lin，Hong Ouyang,et al.,Lens regeneration using endogenous stem cells with gain of visual function，Nature，2016，531(7594):323
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328.)。组织再生晶状体是替代人工晶体治疗白内障，避免人工晶体治疗所致并发症的最具前景的新方法。晶状体再生的关键技术问题是提升术后晶状体囊袋残留上皮细胞向晶状体纤维细胞分化。因此，研发具有调控组织再生的关键因子，是推动组织再生晶状体的技术关键。
[0003]热休克蛋白90(HSP90α)是细胞内重要的蛋白之一，参与多种细胞信号传导。HSP90一直被认为是细胞内蛋白，行使分子伴侣功能。近年研究发现，HSP90能分泌到细胞外，发挥分子伴侣之外的生物学功能，如细胞外HSP90α能促进损伤部位皮肤细胞的迁移能力，促进皮肤愈合。肿瘤细胞分泌HSP90α，参与肿瘤生长、侵袭和转移调控。
[0004]我们前期研究发现，在白内障手术后导致的并发症
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后发性白内障中，抑制晶状体上皮细胞内HSP90α分子伴侣活性能够治疗后发性白内障。但是，本申请意外发现，所述分泌于细胞外的HSP90α(eHSP90)能够直接促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维，即eHSP90是一个新的调控晶状体上皮分化因子，在晶状体再生中发挥重要作用。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术意外发现：HSP90α能够直接促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维，起到促进晶状体再生和治疗白内障的功效。因此，本专利技术的目的在于提供一种热休克蛋白90的新用途，具体包括以下内容：
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90在制备治疗白内障药物中的应用，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]第二方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90在制备促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维药物中的应用，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]第三方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90在制备抑制晶状体上皮细胞间质化药物中的应用，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0009]第四方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90在制备促进晶状体再生药物中的应用，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]优选地，所述热休克蛋白90加入药学上可接受的载体，制成药学上可接受的任一
剂型。
[0011]第五方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90截断蛋白在制备治疗白内障药物中的应用，所述热休克蛋白90截断蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0012]第六方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90截断蛋白在制备促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维药物中的应用，所述热休克蛋白90截断蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013]第七方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90截断蛋白在制备抑制晶状体上皮细胞间质化药物中的应用，所述热休克蛋白90截断蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0014]第八方面，本专利技术提供了一种热休克蛋白90截断蛋白在制备促进晶状体再生药物中的应用，所述热休克蛋白90截断蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0015]优选地，所述热休克蛋白90截断蛋白加入药学上可接受的载体，制成药学上可接受的任一剂型。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017](1)本专利技术发现热休克蛋白90(HSP90α)能够促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维、抑制晶状体上皮细胞间质化、促进晶状体再生、可用于治疗白内障；
[0018](2)本专利技术发现热休克蛋白90截断蛋白(HSP90α氨基酸385
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750)能够显著促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维、抑制晶状体上皮细胞间质化、促进晶状体再生、可用于治疗白内障，其效果显著优于热休克蛋白90(HSP90α)；
[0019](3)本专利技术提供了一种不需要植入人工晶体，既可用于治疗白内障的新药物，安全性较高，可以避免后发性白内障等并发症的发展，具有广泛的应用价值。
附图说明
[0020]图1原核表达人HSP90α及截断体的考染结果；
[0021]图2晶状体上皮细胞分泌HSP90α；
[0022]图3HSP90α抑制TGF
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β2诱导的上皮间质转化；
[0023]图4HSP90α诱导晶状体上皮细胞梭形改变；
[0024]图5HSP90α促进晶状体再生；
[0025]图6HSP90α截断蛋白(358
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750aa)促进晶状体上皮细胞终末分化。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明，但本专利技术的保护范围不局限于以下所述。
[0027]实施例1人HSP90α全长及其截断体蛋白制备
[0028]提取人Hela细胞的RNA，通过RT
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PCR技术获取热休克蛋白90(HSP90α)基因(SEQ ID NO.2所示)。将HSP90α的DNA片段和GST标签的原核表达载体pGEX
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6p
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1分别用Sma I和Xho I进行双酶切，通过连接酶进行连接，得到重组载体pGEX
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6p
‑1‑
HSP90α，并通过测序验证。
[0029]pGEX
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6p
‑1‑
HSP90α和pGEX
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6p
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1质粒分别转化BL21细菌，涂板过夜后，挑取白色细菌克隆至5毫升LB液体培养基中，220rpm，37℃培养过夜；次日1:100接种至新鲜5毫升LB培养基，继续37℃培养；待细菌OD值在0.8左右时，加入终浓度为0.1mM的IPTG，30℃，200rpm，
培养5小时；4000rpm/min，离心5分钟，收集细菌沉淀，加入500μL PBS进行超声破碎，8000rpm/min，离心5分钟，收集上清液；通过SDS
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PAGE胶电泳，考马斯亮蓝染色后，检测蛋白是否表达。
[0030]取表达蛋白的阳性克隆，进行扩大培养，收集的细菌沉淀通过超声破碎后，用谷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.热休克蛋白90在制备治疗白内障药物中的应用，其特征在于，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.热休克蛋白90在制备促进晶状体上皮细胞终末分化为晶状体纤维药物中的应用，其特征在于，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.热休克蛋白90在制备抑制晶状体上皮细胞间质化药物中的应用，其特征在于，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。4.热休克蛋白90在制备促进晶状体再生药物中的应用，其特征在于，所述热休克蛋白90的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。5.如权利要求1
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4任一所述的应用，其特征在于，所述热休克蛋白90加入药学上可接受的载体，制成药学上可接受的任一剂型。6.热休克蛋白90截断蛋白在制备治疗白内障药...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡延忠，李静，崔秀坤，张军，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：