转基因玉米事件LP007-8及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种核酸序列，其包含选自序列SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
转基因玉米事件LP007
‑
8及其检测方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及转基因植物及其产品的检测方法，具体涉及对昆虫具有抗性且耐受草甘膦除草剂施用的转基因玉米事件LP007
‑
8和用于检测转基因玉米LP007
‑
8的核酸序列及方法。

技术介绍

[0002]玉米(Zea mays L.)在世界上很多地区都是主要的粮食作物。生物技术已经应用于玉米以改善其农艺性状和品质。在玉米生产中昆虫抗性是一项重要的农艺性状，特别是对鳞翅目昆虫(例如玉米螟、棉铃虫、草地贪夜蛾、黏虫等)的抗性。玉米对鳞翅目昆虫的抗性可以通过转基因的方法使鳞翅目昆虫的抗性基因在玉米植物中表达而获得。另一个重要的农艺性状是除草剂耐受性，特别是耐受草甘膦除草剂。玉米对草甘膦除草剂的耐受性可以通过转基因的方法使草甘膦除草剂耐受型基因(如epsps)在玉米植物中表达而获得。
[0003]已知外源基因在植物体内的表达受到它们的染色体位置的影响，可能是由于染色质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。为此，通常需要筛选大量的事件才有可能鉴定出可以商业化的事件(即导入的目标基因得到最优表达的事件)。例如，在植物和其他生物体中已经观察到导入基因的表达量在事件间可能有很大差异；在表达的空间或时间模式上可能也存在差异，如在不同植物组织之间转基因的相对表达存在差异，这种差异表现在实际的表达模式可能与导入的基因构建体中的转录调节元件所预期的表达模式不一致。因此，通常需要产生成百上千个不同的事件并从这些事件中筛选出具有以商业化为目的所预期的转基因表达量和表达模式的单一事件。这样的转化事件具有优异的鳞翅目害虫(如亚洲玉米螟、草地贪夜蛾、东方黏虫、草地贪夜蛾、棉铃虫、小地老虎和桃蛀螟等)和草甘膦除草剂抗性且不影响玉米产量，可采用常规育种方法通过杂交将转基因回交到其他遗传背景中。通过这种杂交方式产生的后代保持了原始转化体的转基因表达特征和性状表现。应用这种策略模式可以确保在许多品种中具有可靠的基因表达，具备稳定的鳞翅目害虫(如亚洲玉米螟、草地贪夜蛾、东方黏虫、草地贪夜蛾、棉铃虫、小地老虎和桃蛀螟等)和草甘膦除草剂抗性，使这些品种免受主要鳞翅目害虫的为害，具有广谱的杂草防控能力，同时能很好的适应当地的生长条件。
[0004]能够检测特定事件的存在以确定有性杂交的后代是否包含目的基因将是有益的。此外，检测特定事件的方法还将有助于遵守相关法规，例如来源于重组农作物的食物在投入市场前需要获得正式批准和进行标记。通过任何熟知的多核苷酸检测方法来检测转基因的存在都是可能的，例如聚合酶链式反应(PCR)或利用多核苷酸探针的DNA杂交。这些检测方法通常集中于常用的遗传元件，例如启动子、终止子、标记基因等。因此，除非与插入的转基因DNA相邻的染色体DNA(“侧翼DNA”)的序列是己知的，否则上述这种方法不能用于区别不同的事件，特别是那些用相同的DNA构建体产生的事件。所以，目前常利用跨越了插入的转基因和侧翼DNA的接合部位的一对引物通过PCR来鉴定转基因特定事件，具体地说是包含于侧翼序列的第一引物和包含插入序列的第二引物。
[0005]玉米(ZeamayL.)是当今世界最重要的粮食、饲料、工业原料和能源作物，在保障世界粮食安全、经济发展及缓解能源危机等方面作用巨大。与1990年相比，我国2015年玉米总产量增加了2.32倍，但总产的增加主要依赖于种植面积的增加，单产提高对总产增加的贡献约35％～40％。由于土地供给的刚性制约，为满足我国国民经济持续发展对玉米的需求，提高玉米单位面积产量是遗传育种学科的重大课题。玉米产量是一个复杂的数量性状，在特定种植密度下，玉米单位面积产量由单穗籽粒产量与穗数决定；单穗籽粒产量又可进一步剖分为，穗行数，行粒数，百粒重。百粒重作为重要的产量构成因素，是玉米产量的形成的关键因子。随着分子生物学的快速发展，挖掘、验证控制百粒重的基因并整合在植物体内是一种简捷、快速、高效的育种策略。当前，玉米百粒重的遗传解析主要集中在QTL初步定位，控制玉米百粒重相关基因的精细定位、克隆验证鲜有报道，但通过筛选转化事件获得增产的技术手段，报道更少。将玉米的产量性状剖分为不同的产量因子来研究，有利于解析产量性状形成的遗传学基础。穗长和行粒数是玉米产量的重要构成因子，与玉米的单穗产量显著正相关，解析穗长和行粒数的遗传学基础对于认知玉米产量形成的机理具有重要的意义，也为育种实践提供理论依据。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种转基因玉米事件LP007
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8以及用于检测玉米植物LP007
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8事件的核酸序列及其检测方法，可以准确快速的鉴定生物样品中是否包含特定的转基因玉米事件LP007
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8的DNA分子。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供了一种核酸序列，其包含选自序列SEQ ID NO:1
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7(即SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7)及其互补序列中的一种或多种。在一些实施方式中，所述核酸序列来源于包含玉米事件LP007
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8的植物、种子或细胞，包含所述事件的种子的代表性样本已以保藏编号CCTCC NO:P202116保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，邮编430072)。在一些实施方式中，所述核酸序列是诊断玉米事件LP007
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8的存在的扩增子。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术提供了一种核酸序列，其包含SEQ ID NO:3或其互补序列中至少11个连续的核苷酸、和/或SEQ ID NO:4或其互补序列中至少11个连续的核苷酸。在一些实施方式中，所述核酸序列包括SEQ ID NO:1或其互补序列、和/或SEQ ID NO:2或其互补序列。在一些实施方式中，所述核酸序列包括SEQ ID NO:3或其互补序列、和/或SEQ ID NO:4或其互补序列。在一些实施方式中，所述核酸序列包括SEQ ID NO:5或其互补序列。
[0009]所述SEQ ID NO:1或其互补序列为转基因玉米事件LP007
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8中在插入序列的5
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末端位于插入接合部位附近的一个长度为22个核苷酸的序列，所述SEQ ID NO:1或其互补序列跨越了玉米插入位点的侧翼基因组DNA序列和插入序列的5
’
末端的DNA序列，包含所述SEQ ID NO:1或其互补序列即可鉴定为转基因玉米事件LP007
‑
8的存在。所述SEQ ID NO:2或其互补序列为转基因玉米事件LP007
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8中在插入序列的3
’
末端位于插入接合部位附近的一个长度为22个核苷酸的序列，所述SEQ ID本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸序列，其特征在于，包含选自序列SEQ ID NO:1
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7及其互补序列中的一种或多种。2.如权利要求1所述的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列来源于包含玉米事件LP007
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8的植物、种子或细胞，包含所述事件的种子的代表性样本已以保藏编号CCTCC NO:P202116保藏。3.如权利要求1所述的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列是诊断玉米事件LP007
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8的存在的扩增子。4.一种DNA引物对，包含第一引物和第二引物，其特征在于，所述第一引物和所述第二引物各自包含SEQ ID NO:5的部分序列或其互补序列，且当与含有玉米事件LP007
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8的DNA一起用于扩增反应时，产生检测样品中玉米事件LP007
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8的扩增子，具体的，所述第一引物选自SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:12；所述第二引物选自SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14。更具体的，所述第一引物选自SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:12，所述第二引物选自SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:13；或者所述第一引物选自SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14，所述第二引物选自SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:15。5.一种DNA探针，其特征在于，包含SEQ ID NO:5的部分序列或其互补序列，所述DNA探针在严格杂交条件下与包含选自SEQ ID NO:1
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7或其互补序列的核酸序列的DNA分子杂交并在严格杂交条件下不与不含选自SEQ ID NO:1
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7或其互补序列的核酸序列的DNA分子杂交，具体的，所述DNA探针包含选自SEQ ID NO:3或其互补序列、SEQ ID NO:4或其互补序列，更具体的，所述DNA探针包含选自SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:6或其互补序列和SEQ ID NO:7或其互补序列的序列。6.一种标记物核酸分子，其特征在于，包含SEQ ID NO:5的部分序列或其互补序列，所述标记物核酸分子在严格杂交条件下与包含选自SEQ ID NO:1
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7或其互补序列的核酸序列的DNA分子杂交并在严格杂交条件下不与不含选自SEQ ID NO:1
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7或其互补序列的核酸序列的DNA分子杂交，具体的，所述标记物核酸分子包含选自SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾志伟，李晓娇，李树秀，王强，吕玉平，赵丽媛，李涛，孙宇，贺志豪，李斌，
申请(专利权)人：隆平生物技术海南有限公司，
类型：发明
国别省市：