一种提取动物肺脏中肝素的方法技术

本发明专利技术属于肝素生产技术领域，具体涉及一种提取动物肺脏中肝素的方法。该方法采用复合酶解、树脂吸附与洗脱、膜分离、氧化过滤、醇沉干燥的步骤，对动物肺脏进行处理，提取其中的肝素，可以将动物肺脏中含有的蛋白质等其他杂质最大程度地与肝素分离，避免杂质的存在影响肝素的抗凝效果，显著提高动物肺脏中提取所得肝素的效价；并且，本发明专利技术方法操作简单，非常适合大规模产业化生产肝素。合大规模产业化生产肝素。

【技术实现步骤摘要】
一种提取动物肺脏中肝素的方法


[0001]本专利技术属于肝素生产
更具体地，涉及一种提取动物肺脏中肝素的方法。

技术介绍

[0002]养殖的家畜主要的利用部位为肉和皮毛，其余脏器如肺脏等的市场需求较少，往往价格低廉，经济效益较低，除少量的动物肺直接食用或加工成饲料肥料外，大部分都被丢弃，造成了极大的生物资源的浪费。实际上，动物的肺脏中含有非常丰富的肝素，完全可以作为肝素生产的材料来源。其中所述肝素是从动物组织中提取的粘多糖硫酸酯类抗凝血物质，通过和抗凝血酶的结合产生抗凝血功能，是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物。肝素主要应用于心脑血管疾病和血液透析治疗，是在血液透析治疗中唯一有效的特效药物；并且，肝素或其衍生物还具有调血脂、抗炎、抗过敏及免疫调节等多种生物学功能，到目前为止还没有一种产品能够完全替代肝素的临床作用，其仍然是当今最重要的抗凝药物之一。
[0003]目前肝素的提取主要以小肠黏膜为原料，采用盐解
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树脂交换法、酶解
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树脂交换法、超声波辅助盐解法和盐解酶解结合法等进行肝素的提取。但是上述方法无法直接应用于动物肺脏中提取肝素，因为动物肺脏中肝素会和肺脏中存在的各种蛋白质、肝素类似物、核酸类似物、小分子物质等杂质结合，常用的针对小肠粘膜的肝素提取方法无法将肝素与杂质较好的分离，残留的杂质会直接影响肝素的抗凝效果，降低效价。针对动物肺脏提取肝素的问题，中国专利申请提供了一种利用猪肺提取肝素钠粗品的制备工艺，主要通过肝素钠专用酶酶解、树脂吸附、沉淀等步骤来对猪肺中的肝素进行提取；但是该工艺所采用的肝素钠专用酶主要为木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，只能去除蛋白质，而对于肺脏肝素中存在的其他杂质如肝素类似物、小分子物质等无法去除，仍然存在于肝素钠粗品中，活性较低，效价仅为90u/mg。
[0004]因此，迫切需要提供一种可以高效提取动物肺脏中肝素的方法，并且可以显著提高所得肝素的效价。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有针对动物肺脏肝素提取的方法较难完全除杂，所得肝素效价交底的缺陷和不足，提供一种可以高效提取动物肺脏中肝素的方法，并且可以显著提高所得肝素的效价。
[0006]本专利技术的目的是提供一种提取动物肺脏中肝素的方法。
[0007]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0008]一种提取动物肺脏中肝素的方法，包括以下步骤：
[0009]S1、复合酶解：将动物肺脏加水匀浆，调节匀浆液pH为8.0～8.8，温度为40～45℃，加入复合酶酶解完全，过滤，收集滤液；
[0010]S2、树脂吸附与洗脱：调节步骤S1所得滤液的pH为8.2～8.5，加入阴离子交换树
脂，搅拌至完全吸附，过滤，收集树脂，用12～16wt％盐水洗脱，收集洗脱液；
[0011]S3、膜分离：将步骤S2所得洗脱液用聚丙烯腈膜或聚砜酰胺膜进行膜分离，得截留液；
[0012]S4、氧化过滤：向步骤S3所得截留液中加入30～35wt％过氧化氢溶液，氧化完全后过滤，收集滤液；
[0013]S5、醇沉干燥：调节步骤S4所得滤液pH至中性，加入饱和盐水搅拌均匀，再加入乙醇溶液，搅拌均匀，沉淀完全，收集沉淀物，干燥，即得；
[0014]其中，所述复合酶由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶组成。
[0015]本专利技术先采用由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶组成的复合酶对动物肺脏中的蛋白质、核酸类似物等杂质进行酶解，再依次经过阴离子交换树脂去除矿物质、金属盐、色素等杂质，然后经过膜分离将肝素截留，去除分子量较小的杂质，最后依次经过氧化、醇沉，即可得到杂质残留量少，效价较高的肝素产品。
[0016]进一步地，步骤S1中，所述复合酶由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶按重量比10：(3～5)：(0.3～0.5)组成。优选地，所述复合酶由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶按重量比10：(4～5)：(0.4～0.5)组成。更优选地，所述复合酶由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶按重量比10：5：0.5组成。
[0017]更进一步地，步骤S1中，所述复合酶的添加量为匀浆液质量的0.05～0.2％。优选地，所述复合酶的添加量为匀浆液质量的0.1～0.2％。
[0018]进一步地，步骤S1中，所述酶解的时间为3～4h。
[0019]优选地，步骤S1中，所述动物肺脏和水的体积比为1:(3～4)。
[0020]优选地，步骤S1中，所述过滤采用的是80～100目的筛网。
[0021]更进一步地，步骤S2中，所述用12～16wt％盐水洗脱先用12～14wt％盐水洗脱，再用15～16wt％盐水洗脱。优选地，先用树脂体积3～4倍量的12～14wt％盐水洗脱2～3h，再用树脂体积2倍量的15～16wt％盐水洗脱1～2h，合并两次洗脱液。
[0022]优选地，步骤S2中，所述完全吸附需要3～4h。
[0023]优选地，步骤S2中，所述过滤的筛网为80～100目。
[0024]进一步地，步骤S3中，所述聚丙烯腈膜或聚砜酰胺膜的截留分子量为3000～4000Da。
[0025]更进一步地，步骤S3中，当截留液体积为步骤S2所得洗脱液总体积15～20％时，停止膜分离。
[0026]进一步地，步骤S4中，所述过氧化氢溶液的添加量为步骤S3所得截留液体积的0.8～1.2％。
[0027]更进一步地，步骤S4中，所述氧化的时间为16～24h。
[0028]优选地，步骤S4中，过滤采用0.22～0.45μm微孔滤膜过滤器进行过滤。
[0029]进一步地，步骤S5中，所述乙醇溶液的乙醇体积浓度为80～100％。
[0030]优选地，步骤S5中，所述乙醇溶液的添加量为步骤S4所得滤液和盐水总体积的1.5～2倍量体积。
[0031]优选地，步骤S5中，所述沉淀完全所需时间为8～12h。
[0032]更进一步地，所述动物肺脏主要包括猪、牛、羊的肺脏。
[0033]经过测定，本专利技术方法制备得到的肝素效价大于100u/mg。
[0034]本专利技术具有以下有益效果：
[0035]本专利技术一种提取动物肺脏中肝素的方法，采用复合酶解、树脂吸附与洗脱、膜分离、氧化过滤、醇沉干燥的步骤，对动物肺脏进行处理，提取其中的肝素，可以将动物肺脏中含有的蛋白质等其他杂质最大程度地与肝素分离，避免杂质的存在影响肝素的抗凝效果，显著提高动物肺脏中提取所得肝素的效价；并且，本专利技术方法操作简单，非常适合大规模产业化生产肝素。
具体实施方式
[0036]以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0037]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0038]实施例1一种提取动物肺脏中肝素的方法
[0039]所述提取动物肺脏本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提取动物肺脏中肝素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、复合酶解：将动物肺脏加水匀浆，调节匀浆液pH为8.0～8.8，温度为40～45℃，加入复合酶酶解完全，过滤，收集滤液；S2、树脂吸附与洗脱：调节步骤S1所得滤液的pH为8.2～8.5，加入阴离子交换树脂，搅拌至完全吸附，过滤，收集树脂，用12～16wt％盐水洗脱，收集洗脱液；S3、膜分离：将步骤S2所得洗脱液用聚丙烯腈膜或聚砜酰胺膜进行膜分离，得截留液；S4、氧化过滤：向步骤S3所得截留液中加入30～35wt％过氧化氢溶液，氧化完全后过滤，收集滤液；S5、醇沉干燥：调节步骤S4所得滤液pH至中性，加入饱和盐水搅拌均匀，再加入乙醇溶液，搅拌均匀，沉淀完全，收集沉淀物，干燥，即得；其中，所述复合酶由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶组成。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1中，所述复合酶由碱性蛋白酶、胰蛋白酶和核酸酶按重量比10：(3～5)：(0.3～0.5)组成。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏海涛，方秋华，张炳顺，向亚林，余细红，刘铄佳，刘初亮，刘佳华，
申请(专利权)人：广东百试特生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：