一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法技术

本发明专利技术涉及肝素钠的精制工艺，尤其涉及一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法。所述方法包括：将待处理的肝素钠溶解、并将得到的肝素钠溶解液进行酶解，离心后取上清液进行碱化处理，再次离心后取上清液进行梯度层析；其中，在进行梯度层析时，采用阴离子层析柱，依次使用3

【技术实现步骤摘要】
一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法


[0001]本专利技术涉及肝素钠的精制工艺，尤其涉及一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法。

技术介绍

[0002]肝素钠(heparin sodium)为抗凝血药，是一种粘多糖类物质，由猪、牛、羊的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖钠盐，在人体内由肥大细胞分泌，自然存在于血液中。肝素钠具有防止血小板集聚和破坏、抑制纤维蛋白原转变成纤维蛋白单体、抑制凝血活素的形成和对抗已形成的凝血活素、阻止凝血酶原转变成凝血酶和对抗凝血酶等作用。肝素钠在体内体外均能延缓或阻止血液凝固。目前，肝素钠最常见的原料来源便是猪小肠，通过刮取小肠粘膜、酶解、吸附、层析等步骤制备粗品肝素钠；然而，粗品肝素钠需要进一步精制才能应用于临床患者。
[0003]目前，肝素钠的精制工艺主要分为两类：盐解
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树脂吸附法和酶解
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树脂吸附法，其中硫酸皮肤素是其主要的杂质。CN110713558A公开了一种肝素钠的提取工艺，包括如下步骤：原料处理、加热酶解、冷却吸附、洗脱、沉淀、脱水干燥；然而，上述工艺提取得到的肝素钠存在硫酸皮肤素含量过高的问题。而根据其他专利文件及文献中肝素钠精制的方式进行肝素钠生产，结果发现，其硫酸皮肤素虽然合格但含量接近合格线2.0％。CN201410396942.6公开了一种控制肝素钠原料中硫酸皮肤素和硫酸软骨素总含量的方法，采用2次氯化钠盐解、过氧化叔丁醇氧化、异丙醇沉淀可以有效的去除肝素钠原料中的硫酸皮肤素和硫酸软骨素并可以将其总含量降至0.1％以下；但上述方法并没有兼顾去除核酸需求，以至于会出现核酸不合格的问题。在保障肝素钠原料中各项杂质含量均符合药典标准的基础上，尽可能的降低硫酸皮肤素的含量，其更具有实际生产意义。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法，该方法可显著降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量；本专利技术的另一目的在于提供利用该方法制得的肝素钠。
[0006]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法，包括：将待处理的肝素钠溶解、并将得到的肝素钠溶解液进行酶解，离心后取上清液进行碱化处理，再次离心后取上清液进行梯度层析；
[0008]其中，在进行梯度层析时，采用阴离子层析柱，依次使用3
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0.1％的氯化钠溶液、5
±
0.1％的氯化钠溶液、7
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0.1％的氯化钠溶液、18
±
0.1％的氯化钠溶液进行洗脱，收集18
±
0.1％的氯化钠溶液的洗脱液。
[0009]现有技术中，多采用层析的方法将硫酸皮肤素为主的有关物质通过5～9％的氯化钠溶液从肝素钠中洗脱出来；然而，若氯化钠浓度太低，则硫酸皮肤素去除不彻底，有关含
量不合格；若氯化钠浓度太高则肝素钠会被洗脱下来。
[0010]本专利技术以降低肝素钠中硫酸皮肤素含量为研发目的，尝试了大量的层析工艺，在研发过程中发现，采用梯度层析的方式有望降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量。
[0011]进一步在进行梯度层析过程中，采用阴离子层析柱，并依次使用3
±
0.1％的氯化钠溶液、5
±
0.1％的氯化钠溶液、7
±
0.1％的氯化钠溶液、18
±
0.1％的氯化钠溶液进行洗脱，可显著降低肝素钠中硫酸皮肤素含量。
[0012]具体而言，3
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱的目的是平衡柱子以及去除部分碱化离心后仍残留的核酸蛋白；硫酸皮肤素主要在5
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱的过程中除去，但根据传统工艺做法以及其他专利文件的实验方法，所生产的肝素钠精品中有关物质含量低于2％但高于1％(甚至接近2％)，一旦经过工艺放大，其有关物质含量便很容易出现不合格的现象；在上述洗脱步骤的基础上，通过进一步的7
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱，即可以去除残留的硫酸皮肤素又能避免肝素钠被洗脱下来；最终使用18
±
0.1％的氯化钠溶液进行洗脱、并收集18
±
0.1％的氯化钠溶液的洗脱液，即可显著降低肝素钠中硫酸皮肤素含量。
[0013]为了进一步降低肝素钠中硫酸皮肤素的含量，本专利技术对梯度层析的步骤进行了优化，具体如下：
[0014]作为优选，所述阴离子层析柱的体积为所述肝素钠溶解液体积的1.5～2.5倍；
[0015]进一步地，当使用3
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱时，洗脱体积为阴离子层析柱体积的1～3倍；
[0016]进一步地，当使用5
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱时，洗脱至流出液醇检澄清；
[0017]进一步地，当使用7
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0.1％的氯化钠溶液洗脱时，洗脱体积为阴离子层析柱体积的1～2倍；
[0018]进一步地，当使用18
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱时，洗脱至流出液醇检澄清。
[0019]在上述技术方案中，“醇检澄清”具体指：层析即时流出液用95％的乙醇溶液进行检测，检测至无浑浊。
[0020]作为优选，所述方法还包括：对所述洗脱液进行氧化脱色；
[0021]进一步地，所述氧化脱色具体为：将所述洗脱液的pH值调至9.5～10.5，而后加入双氧水，在室温条件下搅拌4～8h；
[0022]更进一步地，所述双氧水的浓度为25～35％；以所述洗脱液的体积为基准，所述双氧水的添加量为2～4％。
[0023]作为优选，所述方法还包括：将经氧化脱色处理后的洗脱液进行醇沉；
[0024]进一步地，所述醇沉具体为：将经氧化脱色处理后的洗脱液的pH调至6.0～8.0，加入乙醇，在3～5℃下静置23～25h，而后在3～5℃、3500～4500rpm下离心10～20min；
[0025]更进一步地，所述乙醇的浓度不低于90％；所述乙醇的添加量为经氧化脱色处理后的洗脱液的1～2倍。
[0026]作为优选，采用3
±
0.1％的氯化钠溶液溶解待处理的肝素钠；以g/ml计，待处理的肝素钠：3
±
0.1％的氯化钠溶液＝1：14～16。
[0027]进一步地，所述溶解在40～50℃下进行。
[0028]作为优选，所述酶解的酶为胰蛋白酶；以g/ml计，胰蛋白酶：肝素钠溶解液＝1：8000～12000；
[0029]进一步地，所述酶解在pH为7.0～9.0的条件下进行；
[0030]更进一步地，所述酶解的时间为5～8h。
[0031]作为优选，两次离心均在3～5℃、3500～4500rpm下进行10～20min。
[0032]作为优选，所述碱化处理具体为：将第一次离心后的上清液的pH值调至10.0～13.0，而后在不低于95℃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低肝素钠中硫酸皮肤素含量的方法，其特征在于，包括：将待处理的肝素钠溶解、并将得到的肝素钠溶解液进行酶解，离心后取上清液进行碱化处理，再次离心后取上清液进行梯度层析；其中，在进行梯度层析时，采用阴离子层析柱，依次使用3
±
0.1％的氯化钠溶液、5
±
0.1％的氯化钠溶液、7
±
0.1％的氯化钠溶液、18
±
0.1％的氯化钠溶液进行洗脱，收集18
±
0.1％的氯化钠溶液的洗脱液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阴离子层析柱的体积为所述肝素钠溶解液体积的1.5～2.5倍。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用3
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱，洗脱体积为阴离子层析柱体积的1～3倍；和/或，使用5
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱，洗脱至流出液醇检澄清；和/或，使用7
±
0.1％的氯化钠溶液洗脱，洗脱体积为阴离子层析柱体积的1～2倍；和/或，使用18
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0.1％的氯化钠溶液洗脱，洗脱至流出液醇检澄清。4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，还包括：对所述洗脱液进行氧化脱色；优选地，所述氧化脱色具体为：将所述洗脱液的pH值调至9.5～10.5，而后加入双氧水，在室温条件下搅拌4～8h；更优选地，所述双氧水的浓度为25～35％；以所述洗脱液的体积为基准，所述双氧水的添加量为2～4％。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括：将经氧化脱色处理后的洗脱液进行醇沉；优选地，所述醇沉具体为：将经氧化脱色处理后的洗脱液的pH调至6.0～8.0，加入乙醇，在3～5℃下静置23～25h，而后在3～5℃、3500～4500rpm下离心10～20min；更优选地，所述乙醇的浓度不低于90％；所述乙醇的添加量为经氧化脱色处理后的洗脱液的1～2倍。6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，采用3
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0.1％的氯化钠溶液溶解待处理的肝素钠；以g/ml计，待处理的肝素钠：3
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0.1％的氯化钠溶液＝1：14～16。7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于，所述酶解的酶为胰蛋白酶；以g/ml计，胰蛋白酶：肝素钠溶解液＝1：8000～12000；优选地，所述酶解在pH为7.0～9.0的条件下进...

【专利技术属性】
技术研发人员：李成斌，田丹，宋威，
申请(专利权)人：北京赛而生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：