引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用技术

本发明专利技术公开了引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用，涉及干细胞技术领域。引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法包括：在培养多能干细胞的培养基中加入rapamycin持续培养。通过在多能干细胞(如人类胚胎干细胞)培养中加入rapamycin，可以引导多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，有利于防止特殊情况下多能干细胞过度增殖，为人类多能干细胞更多应用提供了新的思路，并且可以提高细胞生产的效率；有利于根据需要获得特定发育程度的多能干细胞，为人多能干细胞的应用提供了更多可能。应用提供了更多可能。应用提供了更多可能。

【技术实现步骤摘要】
引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用


[0001]本专利技术涉及干细胞
，具体而言，涉及引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法及应用。

技术介绍

[0002]人类多能干细胞(hPSC)可以分化为我们体内的所有细胞类型，并且是研究人类胚胎发育的重要模型系统。hPSC分化产生的特定细胞类型在细胞治疗，药物筛选和疾病模型研究中起着重要作用。可见，人多能干细胞为再生和修复多种组织和药物筛选提供了材料。
[0003]人多能干细胞不同发育程度的细胞均具有治疗应用价值，获取特定发育程度的人多能干细胞操作难度是非常大的。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法，旨在使多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，为多能干细胞的应用提供了更多可能。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供一种获取多能干细胞的方法，其能够获取特定发育程度的多能干细胞。
[0007]本专利技术是这样实现的：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法，包括：在培养多能干细胞的培养基中加入rapamycin。
[0009]在可选的实施方式中，rapamycin在培养基中的浓度为20
‑
200nM；优选为50
‑
100nM。
[0010]在可选的实施方式中，多能干细胞为人多能干细胞。
[0011]在可选的实施方式中，人多能干细胞选自人类胚胎干细胞或人类诱导多能干细胞。
[0012]在可选的实施方式中，人多能干细胞的培养是在添加有rapamycin的E8培养基中进行培养的。
[0013]在可选的实施方式中，E8培养基的成分包括DMEM/F12培养基、L
‑
抗坏血酸
‑2‑
磷酸镁、硒酸钠、转铁蛋白、胰岛素、碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子
‑
β。
[0014]在可选的实施方式中，在E8培养基中，L
‑
抗坏血酸
‑2‑
磷酸镁的浓度为60
‑
70mg/L，硒酸钠的浓度为12
‑
16μg/L，转铁蛋白的浓度为8
‑
12mg/L，胰岛素的浓度为18
‑
22mg/L，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为90
‑
110μg/L，转化生长因子
‑
β的浓度为1
‑
3μg/L。
[0015]第二方面，本专利技术提供一种获取多能干细胞的方法，其采用前述实施方式中任一项的方法引导人类多能干细胞成为发育停滞的细胞。
[0016]在可选的实施方式中，停止培养之后，采用培养基将得到的细胞进行润洗。
[0017]在可选的实施方式中，采用E8培养基对得到的细胞润洗至少2次。
[0018]本专利技术具有以下有益效果：专利技术人通过在多能干细胞(如人多能干细胞)培养中加入rapamycin，可以引导多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，有利于防止特殊情况下多能干细胞过度增殖，为人类多能干细胞更多应用提供了新的思路，并且可以提高细胞生产的效率；有利于根据需要获得特定发育程度的多能干细胞，为人多能干细胞的应用提供了更多可能。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0020]图1为Rapamycin处理的人多能干细胞生长速度测试结果图；
[0021]图2为Rapamycin处理的人多能干细胞表达性测试结果图；
[0022]图3为Rapamycin处理的人多能干细胞细胞形态的测试图；
[0023]图4为Rapamycin连续处理的人多能干细胞培养组和对照组的生长情况测试结果图。
具体实施方式
[0024]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0025]哺乳动物rapamycin靶蛋白(mTOR)是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸激酶，mTOR信号通路具有促进物质代谢、参与细胞凋亡、自噬的作用，在多种疾病中扮演着不可忽视的角色。rapamycin(rapamycin)是mTOR的特异性抑制剂，其也是最早被发现的mTOR抑制剂，是20世纪70年代从细菌中分离出来的一种大环内酯类抗生素。
[0026]本专利技术实施例提供一种引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法，包括：在培养多能干细胞的培养基中加入rapamycin。专利技术人意外地发现，在多能干细胞培养中加入rapamycin可以使多能干细胞成为类似自然状态下发育停滞的细胞，有利于防止特殊情况下多能干细胞过度增殖，为人类多能干细胞更多应用提供了新的思路，并且可以提高细胞生产的效率。
[0027]具体地，多能干细胞可以为人多能干细胞，也可以为其他动物的多能干细胞。人多能干细胞可以为人胚胎干细胞或人类诱导多能干细胞等常见人多能干细胞。
[0028]为更好地控制人多能干细胞处于发育停滞状态，专利技术人优化了rapamycin的用量。在培养基中，rapamycin在培养基中的浓度为20
‑
200nM；优选为50
‑
100nM。
[0029]具体地，rapamycin的浓度可以为20nM、40nM、60nM、80nM、100nM、200nM等，也可以为以上浓度值之间的任意值。
[0030]在一些实施例中，人多能干细胞的培养是在添加有rapamycin的E8培养基中进行培养的。E8培养基适合于人多能干细胞的培养，适合于本专利技术实施例。
[0031]在其他实施例中，也可以不采用E8培养基，而采用其他适合于人多能干细胞培养的现有培养基。
[0032]进一步地，在E8培养基中，L
‑
抗坏血酸
‑2‑
磷酸镁的浓度为60
‑
70mg/L，硒酸钠的浓度为12
‑
16μg/L，转铁蛋白的浓度为8
‑
12mg/L，胰岛素的浓度为18
‑
22mg/L，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为90
‑
110μg/L，转化生长因子
‑
β的浓度为1
‑
3μg/L。
[0033]需要说明的是，通过对E8培养基中的成分进行控制，能够更好地促进人多能干细胞的生长。L
‑
抗坏血酸
‑2‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种引导多能干细胞成为发育停滞的细胞的方法，其特征在于，包括：在培养多能干细胞的培养基中加入rapamycin。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述rapamycin在培养基中的浓度为20
‑
200nM；优选为50
‑
100nM。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多能干细胞为人多能干细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞选自人类胚胎干细胞或人类诱导多能干细胞。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述人多能干细胞的培养是在添加有rapamycin的E8培养基中进行培养的。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述E8培养基的成分包括DMEM/F12培养基、L
‑
抗坏血酸
‑2‑
磷酸镁、硒酸钠、转铁蛋白、胰岛素、碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子
‑
β。7.根据权利要求6...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈国凯，周小晓，
申请(专利权)人：澳门大学，
类型：发明
国别省市：