一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统及其构建方法技术方案

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统及其构建方法。所述用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统含有干扰素启动子偶联抗性基因编码区，使得该抗性基因的表达受到细胞内干扰素通路激活的上调。在干扰素处理下，细胞内的干扰素通路激活受体将被上调表达，从而对负调控因子的功能丧失更加敏感。没有敲除掉负调控因子的绝大部分细胞，不会发生干扰素通路的激活；而发生负调控因子编码基因敲除的细胞，会因为干扰素通路的激活，而激活抗性基因的表达。与基因敲除文库联合实现了干扰素激活通路中负调控因子的筛选和鉴定。通路中负调控因子的筛选和鉴定。通路中负调控因子的筛选和鉴定。

【技术实现步骤摘要】
一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系统及其构建方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告系 统及其构建方法。

技术介绍

[0002]干扰素信号通路在抵抗病原微生物侵染、维持细胞稳态和机体健康等方面发挥重要作用， 是天然免疫的重要组成部分。该通路的异常激活引发机体炎症反应和自身免疫疾病的发生， 因此对其的正确调控至关重要。这其中，负调控因子发挥关键作用：通过调节细胞内DNA、 RNA代谢等活动，维持非感染状态下该通路的沉默。
[0003]目前，负调控因子的筛选确定主要分两种情况：第一是是基于干扰素通路基因差异表达 的高通量筛选获得的，然后通过功能实验进行鉴定，例如，Lnc
‑
Lsm3b1等，但这种发现途径 效率低，耗时长，所发现的差异表达基因不一定发挥负调控功能，增大鉴定难度。第二种是 在发现基因的基础上，通过后续研究的验证才被鉴定为具有干扰素通路激活的负调控功能， 如TREX1、RNASEH2和SAMHD1等2，但是，该方法存在成本高，效率底，耗时间长等问 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于筛选干扰素信号通路负调控因子的报告载体，其特征在于，所述报告载体包括：含有干扰素启动子和抗性基因的基因组合元件、表达载体、和/或报告基因元件；所述干扰素启动子位于抗性基因的5
’
末端，用于启动抗性基因的表达；且所述干扰素启动子与表达载体基因组转录用启动子方向相反。2.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述基因组合元件还含有Kozac序列，和/或SV40 poly A信号序列；所述Kozac序列3
’
末端与抗性基因起始密码子5
’
末端连接；所述SV40 poly A信号序列的5
’
末端与抗性基因终止子的3
’
末端连接。3.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述抗性基因为氨基糖苷类抗生素抗性基因，所述干扰素启动子为I型干扰素通路启动子。4.如权利要求3所述的报告载体，其特征在于，所述抗性基因包括新霉素抗性基因(NeoR)、潮霉素B抗性基因；所述干扰素启动子为IFN
‑
β启动子。5.如权利要求1所述的报告载体，其特征在于，所述表达载体为FG12载体，所述基因组合元件插入到FG12载体中。6.如权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆昕，杨晗，赵振翔，朱紫祥，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：