用于抑制SCAP表达的RNAI构建体及其使用方法技术

本发明专利技术涉及用于降低SCAP基因的表达的RNAi构建体。还描述了使用这类RNAi构建体来治疗或预防肝脏疾病、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的方法。(NAFLD)的方法。(NAFLD)的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制SCAP表达的RNAI构建体及其使用方法


[0001]本专利技术涉及用于调节固醇调控元件结合蛋白(SREBP)裂解激活蛋白(SCAP)的肝脏表达的组合物及方法。特别地，本专利技术涉及通过RNA干扰(RNAi)降低SCAP表达的基于核酸的治疗剂、及利用这类基于核酸的治疗剂来治疗或预防诸如非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肝脏疾病的方法。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求于2019年5月30日提交的美国临时专利申请号62/854,433的权益，该临时专利申请通过引用以其全文并入本文。

技术介绍

[0004]包括一系列肝脏病理的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是世界上最常见的慢性肝病，在过去的20年中其患病率增加了一倍，目前估计大约影响到世界人口的20％(Sattar等人(2014)BMJ 349:g4596；Loomba和Sanyal(2013)Nature Reviews Gastroenterology&hepatology[自然综述肠病学与肝脏病学]10(11):686
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690；Kim和Kim(2017)Clin Gastroenterol Hepatol[临床胃肠病学与肝脏病学]15(4):474
‑
485；Petta等人(2016)Dig Liver Dis[消化疾病与肝病]48(3):333
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342)。NAFLD开始于甘油三酯在肝脏中的累积，其定义为在如下个体的超过5％的肝细胞中存在细胞质脂滴：1)没有大量饮酒史且2)其中已排除其他类型肝脏疾病的诊断(Zhu等人(2016)World J Gastroenterol[世界胃肠病学杂志]22(36):8226
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33；Rinella(2015)JAMA[美国医学会杂志]313(22):2263
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73；Yki
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Jarvinen(2016)Diabetologia[糖尿病学]59(6):1104
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11)。在一些个体中，异位脂肪在肝脏中的累积(被称为脂肪变性)引起炎症和肝细胞损伤，从而导致疾病的更晚期阶段，这被称为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)(Rinella，见上文)。截至2015年，预计有7500万至1亿美国人患有NAFLD；NASH大约占NAFLD诊断的10％至30％(Rinella，见上文；Younossi等人(2016)Hepatology[肝脏病学]64(5):1577
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1586)。
[0005]SCAP(SREBP裂解激活蛋白)是SREBP家族的转录因子的仅有的已知转录后调控因子。SREBP(固醇反应元件结合蛋白)家族在对于从头脂肪生成和TG在肝脏内累积的调控中发挥了重要作用。在ER中，SREBP是以无活性前体的形式而合成。在合成后SCAP立即与SREBP形成复合体，并护送SREBP向高尔基囊泡的转运。然后，SREBP被进一步加工，以释放转录因子的活性氨基末端。活性SREBP易位至细胞核并与SREBP反应元件结合，以驱动靶基因的转录激活(Brown,M.S.和Goldstein,J.L.(1997)Cell[细胞]89,331
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340)。有人提出了SCAP的靶向沉默，用以防止对活性SREBP的加工和下游转录变化。
[0006]蛋白质的SREBP家族包括三种同种型：SREBP
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1a、SREBP
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1c和SREBP
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2，它们具有不同但相互重叠的功能。SREPB
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1c在肝脏中含量丰富，并且主要激活脂肪酸和TG合成。SREBP
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1的种系缺失展现出SREBP
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2水平的相伴增加，这弥补了SREBP
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1的损失。
[0007]SREBP
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2通过激活LDL受体(LDLR)来驱动胆固醇产生和低密度脂蛋白(LDL)加工。SREBP
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2还调控PCSK9，这是一种与LDLR相互作用以促进其降解并减少胆固醇摄取的分泌性
蛋白。SCAP/SREBP的损失维持LDLR的蛋白水平。SREBP1c也是PNPLA3的仅有的已知转录调控因子。PNPLA3多态性rs738409(I148M)是NASH/NAFLD的主要遗传定子，存在于50％的患者中。有人提出了使SCAP活性沉默以使携带此突变的个体受益。因此，靶向SCAP功能的新治疗剂代表了降低SCAP水平并治疗肝病(如非酒精性脂肪性肝病)的新方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术部分地是基于RNAi构建体的设计和产生，该RNAi构建体靶向SCAP基因并降低SCAP在肝细胞中的表达。SCAP表达的序列特异性抑制可用于治疗或预防与SCAP表达相关的病症，如肝相关疾病，例如像单纯性脂肪肝(脂肪变性)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝硬化(不可逆的晚期肝脏瘢痕形成)、或SCAP相关性肥胖症。因此，在一个实施例中，本专利技术提供一种包含正义链和反义链的RNAi构建体，其中反义链包含具有与SCAP mRNA序列为互补的序列的区域。在某些实施例中，反义链包含具有来自在表1或表2中所列出的反义序列的至少15个连续核苷酸的区域。
[0009]在一些实施例中，本文所描述RNAi构建体的正义链包含如下序列，其与反义链的序列充分地互补以形成长度为约15至约30个碱基对的双链体区。在这些和其他实施例中，正义链和反义链各自的长度为约15至约30个核苷酸。在一些实施例中，RNAi构建体包含至少一个平端。在其他实施例中，RNAi构建体包含至少一个核苷酸突出端。这类核苷酸突出端可包含至少1至6个未配对核苷酸，并且可以位于正义链的3'端、反义链的3'端、或者正义链和反义链两者的3'端。在某些实施例中，RNAi构建体在正义链的3'端和反义链的3'端包含具有两个未配对核苷酸的突出端。在其他实施例中，RNAi构建体在反义链的3'端和正义链的3'端/反义链的5'端包含具有两个未配对核苷酸的突出端。
[0010]本专利技术的RNAi构建体可包含一个或多个经修饰的核苷酸，包括具有针对核糖环、核碱基、或磷酸二酯主链的修饰的核苷酸。在一些实施例中，RNAi构建体包含一个或多个2'
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修饰的核苷酸。这类2'
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修饰的核苷酸可以包括：2'
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氟修饰的核苷酸、2'
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O
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甲基修饰的核苷酸、2'
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O
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甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'
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O
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烯丙基修饰的核苷酸、二环核酸(BNA)、乙二醇核酸(GNA)、反向碱基(例如，反向腺苷)或其组合。在一个特定实施例中，RNAi构建体包含一个或多个2'
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氟修饰的核苷酸、2'
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O
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甲基修饰的核苷酸、或其组合。在一些实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含正义链和反义链的RNAi构建体，其中该反义链包含具有与在表1或表2中所列出的反义序列差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸的区域，并且其中该RNAi构建体抑制SREBP裂解激活蛋白（SCAP）的表达。2.如权利要求1所述的RNAi构建体，其中该反义链包含与SCAP mRNA序列互补的区域。3.如前述权利要求中任一项所述的RNAi构建体，其中该正义链包含具有与在表1或表2中所列出的反义序列差异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸的区域。4.如前述权利要求中任一项所述的RNAi构建体，其中该正义链包含与该反义链的序列充分地互补以形成长度为约15至约30个碱基对的双链体区的序列。5.如权利要求4所述的RNAi构建体，其中该双链体区的长度为约17至约24个碱基对。6.如权利要求4所述的RNAi构建体，其中该双链体区的长度为约19至约21个碱基对。7.如权利要求6所述的RNAi构建体，其中该双链体区的长度为19个碱基对。8.如权利要求4至7中任一项所述的RNAi构建体，其中该正义链和该反义链的长度各自为约15至约30个核苷酸。9.如权利要求8所述的RNAi构建体，其中该正义链和该反义链的长度各自为约19至约27个核苷酸。10.如权利要求8所述的RNAi构建体，其中该正义链和该反义链的长度各自为约21至约25个核苷酸。11.如权利要求8所述的RNAi构建体，其中该正义链和该反义链的长度各自为约21至约23个核苷酸。12.如权利要求1至11中任一项所述的RNAi构建体，其中该RNAi构建体包含至少一个平端。13.如权利要求1至11中任一项所述的RNAi构建体，其中该RNAi构建体包含具有1
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4个未配对核苷酸的至少一个核苷酸突出端。14.如权利要求13所述的RNAi构建体，其中该核苷酸突出端具有2个未配对的核苷酸。15.如权利要求13或14所述的RNAi构建体，其中该RNAi构建体在该正义链的3'端、该反义链的3'端、或者该正义链和该反义链两者的3'端包含核苷酸突出端。16.如权利要求13至15中任一项所述的RNAi构建体，其中该核苷酸突出端包含5'
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UU
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3'二核苷酸或5'
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dTdT
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3'二核苷酸。17.如权利要求1至16中任一项所述的RNAi构建体，其中该RNAi构建体包含至少一个经修饰的核苷酸。18.如权利要求17所述的RNAi构建体，其中该经修饰的核苷酸是2'
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修饰的核苷酸。19.如权利要求17所述的RNAi构建体，其中该经修饰的核苷酸是2'
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氟修饰的核苷酸、2'
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O
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甲基修饰的核苷酸、2'
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O
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甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'
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O
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烯丙基修饰的核苷酸、二环核酸（BNA）、乙二醇核酸、反向碱基、或其组合。20.如权利要求19所述的RNAi构建体，其中该经修饰的核苷酸是2'
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O
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甲基修饰的核苷酸、2'
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O
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甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'
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氟修饰的核苷酸、或其组合。21.如权利要求17所述的R...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：美国安进公司，
类型：发明
国别省市：