棕榈酰五肽-4的分离方法技术

本发明专利技术提供了一种棕榈酰五肽

【技术实现步骤摘要】
棕榈酰五肽
‑
4的分离方法


[0001]本专利技术属于多肽分离
，具体涉及一种棕榈酰五肽
‑
4的分离方法。

技术介绍

[0002]棕榈酰五肽
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4是胜肽系列应用最早、最广泛的多胜肽之一。棕榈酰五肽
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4的作用机理为：通过作用于真皮成纤维细胞，促进大分子物质如I、III、IV型胶原蛋白、纤维连接蛋白和糖胺聚糖的合成，修复和重建细胞外基质及表皮
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真皮连接部，达到改善皱纹的效果，同时棕榈酰五肽
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4也可以促进伤口修复基因的表达，有利于皮肤组织的恢复。棕榈酰五肽
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4的抗皱活性高于维生素A和维生素C，且无副作用，因此受到化妆品行业的追捧，在许多国内外著名品牌中均有添加。
[0003]棕榈酰五肽
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4主要以固相合成为主，合成过程中需要用三氟乙酸、苯甲硫醚等脱除保护基，得到的粗肽中常含有三氟乙酸盐和有机溶剂，严重影响棕榈酰五肽
‑
4的生物活性，因此需要对其进行分离纯化。目前多肽的分离纯化方法主要包括：盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析法、吸附层析法、等电点沉淀法、酶解法等，但传统方法的步骤繁琐且效率低下，需要消耗大量有机溶剂，造成极大地浪费。为弥补传统方法的缺陷，刘少军等人提出了一种棕榈酰五肽
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4的纯化方法，通过反相聚合物层析除去色谱可见杂质，再通过离子交换色谱转化为乙酸盐，减少了有机溶剂的使用，但纯化得到的棕榈酰五肽
‑/>4的纯度仅为97.51%，纯度较低。因此，仍有必要对现有的分离纯化技术作出改进，以获得高纯度、高收率的棕榈酰五肽
‑
4。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了一种凝胶渗透色谱填料
‑
改性葡聚糖凝胶微球，其粒径均匀，吸附容量大，纯化效率高，且机械性能优异，将改性葡聚糖凝胶微球用于分离纯化棕榈酰五肽
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4，配合两次反相高效液相色谱，分离效率高，所得高纯棕榈酰五肽
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4的纯度高，收率大。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：第一方面，一种改性葡聚糖凝胶微球的制备方法，所述方法包括：1)在强氧化剂的作用下，将葡聚糖氧化得到醛基化葡聚糖；2)邻磺酸对苯二胺与醛基化葡聚糖反应制备得到具有三维网络交联结构的葡聚糖凝胶；3)利用2
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甲氧苯基)异烟酸对葡聚糖凝胶进行改性，得到改性葡聚糖凝胶；4)改性葡聚糖凝胶在氯化钠水溶液中造粒，制得改性葡聚糖凝胶微球。
[0006]在本专利技术中，醛基化葡聚糖的具体制备步骤包括：葡聚糖按照料液比1g:6～10mL溶于去离子水中，冰水浴条件下加入强氧化剂，室温下避光反应2～5h，透析，冷冻干燥得到醛基化葡聚糖。
[0007]进一步地，所述葡聚糖的分子量为20000～60000g/mol。
[0008]进一步地，所述葡聚糖、强氧化剂的质量比为1:0.4～0.6；其中，强氧化剂为高碘酸钠、双氧水、次氯酸钠中的任一种。
[0009]在本专利技术中，葡聚糖凝胶的具体制备步骤包括：醛基化葡聚糖、氯化钠、去离子水按照质量比1:0.2～0.3:3～4混合，室温下搅拌均匀，加入邻磺酸对苯二胺，室温下搅拌5～10min，升至60～70℃搅拌20～30min，得到葡聚糖凝胶。
[0010]进一步地，所述醛基化葡聚糖、邻磺酸对苯二胺的质量比为1:0.25～0.4。
[0011]在本专利技术中，改性葡聚糖凝胶的具体制备步骤包括：葡聚糖凝胶、异丙醇水溶液按质量比1:3～5混合，搅拌溶胀20～50min，加入2
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甲氧苯基)异烟酸，搅拌反应3～5h，得到2
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(3
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甲氧苯基)异烟酸改性葡聚糖凝胶。
[0012]进一步地，所述葡聚糖凝胶、2
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甲氧苯基)异烟酸的添加质量比为1:2～3.8。
[0013]进一步地，所述异丙醇水溶液的质量分数为10～40%。
[0014]在本专利技术中，所述造粒的具体步骤包括：将2
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(3
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甲氧苯基)异烟酸改性葡聚糖凝胶喷洒到氯化钠水溶液中，60～70℃下搅拌反应4～6h，去离子水清洗，过滤，冷冻干燥，得到改性葡聚糖凝胶微球。
[0015]进一步地，所述氯化钠水溶液的质量分数为4～8%。
[0016]进一步地，所述改性葡聚糖凝胶微球的平均粒径为60～90μm。
[0017]葡聚糖凝胶是凝胶渗透色谱中常用的一种色谱填料，其具有化学稳定性高的优点，葡聚糖凝胶的交联程度与机械强度有直接的关系，交联程度小，分离效率高，但机械强度低，交联程度高，机械强度大，但分离效率大大降低。本专利技术利用上述方法，以葡聚糖为基材，利用强氧化剂将部分羟基转化为醛基，得到部分醛基化葡聚糖，接着利用邻磺酸对苯二胺为交联剂，制备得到具有三维网络结构的葡聚糖凝胶，利用邻磺酸对苯二胺作为交联剂制得的葡聚糖凝胶具有更为均匀的孔隙结构，比表面积高，吸附容量大，还弥补了葡聚糖凝胶机械强度差的缺陷，使其同时具备高强度、高吸附容量；然后以2
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甲氧苯基)异烟酸为改性剂，对葡聚糖凝胶进行改性制得改性葡聚糖凝胶微球，不仅能进一步增强葡聚糖凝胶的机械强度，减少色谱柱在长时间使用后出现的孔穴、断层、压缩等问题，避免了分离效率下降的缺陷，还可提升分离效率，增加收率，减少目标产物的损失，这可能是因为2
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甲氧苯基)异烟酸中的羧基与葡聚糖凝胶中的氨基、羟基等发生反应，增加了活性基团，并引入了疏水性基团，其足够大的电荷排斥作用力和疏水性，使其具有良好的分离效果，有助于非目标物质的洗脱，从而提高多肽的分离效率。
[0018]第二方面，前述方法制得的改性葡聚糖凝胶微球在分离棕榈酰五肽
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4中的应用。
[0019]所述应用包括提高提高棕榈酰五肽
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4的收率和纯度。
[0020]第三方面，一种棕榈酰五肽
‑
4的分离方法，所述方法包括利用前述改性葡聚糖凝胶微球作为填料对棕榈酰五肽
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4粗拼进行凝胶渗透色谱分离纯化。
[0021]在本专利技术中，所述分离方法包括：S1：将棕榈酰五肽
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4粗品置于二氯甲烷/甲醇混合水溶液中微波预处理，过滤；S2：凝胶渗透色谱分离纯化；S3：两次反相高效液相色谱分离纯化；S4：冷冻干燥，得到高纯棕榈酰五肽
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4；其中，所述步骤S2中的填料为第一方面所述方法制备得到的改性葡聚糖凝胶微
球。
[0022]本专利技术通过上述步骤对固相合成得到的棕榈酰五肽
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4粗品进行分离纯化，首先利用二氯甲烷/甲醇水溶液将棕榈酰五肽<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改性葡聚糖凝胶微球的制备方法，其特征在于，所述方法包括：1)在强氧化剂的作用下，将葡聚糖氧化得到醛基化葡聚糖；2)邻磺酸对苯二胺与醛基化葡聚糖反应制备得到具有三维网络交联结构的葡聚糖凝胶；3)利用2
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甲氧苯基)异烟酸对葡聚糖凝胶进行改性，得到改性葡聚糖凝胶；4)改性葡聚糖凝胶在氯化钠水溶液中造粒，制得改性葡聚糖凝胶微球；醛基化葡聚糖、邻磺酸对苯二胺的添加质量比为1:0.25～0.4；葡聚糖凝胶、2
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甲氧苯基)异烟酸的添加质量比为1:2～3.8。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，葡聚糖、强氧化剂的添加质量比为1:0.4～0.6。3.权利要求1或2所述方法制得的改性葡聚糖凝胶微球在分离棕榈酰五肽
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4中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：提高棕榈酰五肽
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4的收率；和/或提高棕榈酰五肽
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4的纯度。5.一种棕榈酰五肽
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4的分离方法，其特征在于，所述方法包括：S1：将棕榈酰五肽
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4粗品置于二氯甲烷/甲醇混合水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓航，陈超，虞慧飞，周永兵，
申请(专利权)人：浙江湃肽生物有限公司深圳分公司，
类型：发明
国别省市：