一种马来酸阿法替尼遗传毒性杂质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种马来酸阿法替尼遗传毒性杂质的检测方法。运用高效液相色谱法，以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，设置流动相A的pH、流速、柱温、检测波长与进样量，通过C18色谱柱梯度洗脱。本发明专利技术采用的高效液相色谱法不仅能使得马来酸阿法替尼遗传毒杂质中间体V、马来酸阿法替尼以及其他已知杂质均能有效分离，且峰型对称性较好、出峰快，还能快速检测出低于质控限度1/10的遗传毒杂质中间体V，在专属性、定量限、检测限、线性范围以及重复性上表现出显著优势，具有检测时间更短、精密度和准确度更高、重复性好以及系统适用性好等优点，为阿法替尼药品的质量控制提供重要的方法检测参考依据。制提供重要的方法检测参考依据。制提供重要的方法检测参考依据。

【技术实现步骤摘要】
一种马来酸阿法替尼遗传毒性杂质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及一种马来酸阿法替尼的遗传毒性杂质检测方法。

技术介绍

[0002]马来酸阿法替尼(afatinib dimaleate)，化学名为(2E)
‑
N
‑
[4
‑
[(3
‑
氯
‑4‑
氟苯基)氨基]‑7‑
[[(3S)
‑
四氢呋喃
‑3‑ꢀ
基]氧基]喹唑啉
‑6‑
基]‑4‑
(二甲胺基)
‑2‑
丁烯酰胺双马来酸盐，由德国勃林格殷格翰研发，2013年7月获美国FDA 批准上市，商品名Gilotrif，剂型为薄膜衣片，有20、30和40 mg 3种规格。阿法替尼是一种不可逆的表皮生长因子受体(EGFR) 和人表皮生长因子受体2(HER
‑
2)双重酪氨酸激酶抑制剂，用于EGFR 外显子19缺失和外显子21(L858R) 取代突变的转移性非小细胞肺癌(non
‑
small
‑
cell carcinoma，NSCLC)患者的一线治疗。马来酸阿法替尼目前已知的主要杂质为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F、杂质G、杂质H、杂质I和中间体V，来自于起始原料、中间体以及降解产物，结构式如下：原料、中间体以及降解产物，结构式如下：
鉴于中间体V含烷基磷酸酯，是遗传毒性警示结构。按ICH M7和中国药典2020年版四部通则9306遗传毒性杂质控制指导原则，按TTC 1.5μg/天计算，中间体V限度为30ppm。在马来酸阿法替尼产品中需对中间体V进行检测，以期达到药品质量标准要求。
[0003]专利CN105588893B公布了中间体V系统适用性溶液0.75ug/mL（30ppm）的检测方法，但没有深入研究，检测方法灵敏度低，检测时间达到100min、耗时长，检测成本得不到控制，不能广泛应用。
[0004]遗传毒性杂质限度较低，检测方法大多还会使用LC
‑
MS或GC
‑
MS进行检测；由于LC
‑
MS或GC
‑
MS仪器较昂贵，大多药企QC部门不具备LC
‑
MS或GC
‑
MS的检测条件，故开发常规液相色谱方法检测遗传毒性杂质更具有实用性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种检索精密度更高、检测时间更短、系统适应性更好的马来酸阿法替尼产品中遗传毒性杂质检测方法，使其专属性、定量限、检测限、线性范围、重复性、准确度等方面完全符合标准。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：取马来酸阿法替尼待测品配制供试品溶液，取马来酸阿法替尼中间体V对照品配制对照品溶液，然后以磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，分别进行HPLC检测，按照外标法计算公式：供试品中马来酸阿法替尼中间体V的含量（%）= 其中：Ai为供试品溶液各杂质的峰面积；As为对照品溶液各杂质的峰面积；V为供试品溶液的稀释倍数；Vs为对照品溶液的稀释倍数；Wi为供试品的称样量；Ws为对照品的称样量。
[0007]基于以上研究，本专利技术提供了一种马来酸阿法替尼遗传毒性杂质检测方法，采用高效液相色谱法，以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，设置检测波长与进样量，以体积比计，通过C18色谱柱梯度洗脱，洗脱程序为：以流动相A 75%，流动相B 25%开始洗脱，逐渐减少流动相A比例，逐渐增加流动相B比例，至25分钟流动相A达到35%，流动相B达到65%，继续洗脱10分钟至35分钟，增加流动相A比例，减少流动相B比例，至36分钟时将流动相A调整至75%，流动相B调整至25%，继续洗脱9分钟；该检测方法能检测8.0 ppm的马来酸阿法替尼基因毒性杂质，该杂质为中间体V，结构式如下：
根据本专利技术的实施方式，按ICH M7和中国药典2020年版四部通则9306遗传毒性杂质控制指导原则，中间体V限度质控限度为30ppm。在定量限的试验中，中间体V定量限浓度低于中间体V的质控限度，检测限浓度低于中间体V质控限度的1/10以下，采用本专利技术的高效液相色谱法进行梯度洗涤时，中间体V浓度在2.6~8.0 ppm可被有效检出，表明中间体V在质控限度1/10以上均可被有效检出。
[0008]根据本专利技术的实施方式，采用本专利技术的高效液相色谱法进行梯度洗涤时，检测波长优选自230nm，进样量优选自50μL，C18色谱柱优选自YMC Triart C18柱，规格为4.6mm
×
250mm、3μm。
[0009]根据本专利技术的实施方式，采用本专利技术的高效液相色谱法进行梯度洗涤时，当初始流动相A:B体积比例为75:25、77:23或73:27；A流动相磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH为2.8
‑
3.2；流速为0.8~1.2mL/min；柱温为25~35℃时，该检测方法耐用性良好，杂质V检出量均小于检测限，对照品溶液中中间体V峰拖尾因子在0.8~1.5之间。
[0010]优选地，A流动相磷酸二氢钾溶液用磷酸调节pH为3.0，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。
[0011]根据本专利技术的实施方式，采用本专利技术的高效液相色谱法进行梯度洗涤时，含有中间体V及各已知杂质的阿法替尼产品的在专属性的试验中，空白溶剂、各已知杂质均不干扰中间体V检测，中间体V与相邻杂质峰之间的分离度大于1.5；在线性范围的试验中，中间体V在相对于供试品浓度8ppm~45ppm范围内线性关系良好，相关系数r不低于0.999；在准确度的试验中，中间体V的回收率在80%~115%之间，RSD≤5.0%；在重复性的试验中，6份样品中间体V检出量RSD≤10%；在中间精密度的试验中，由不同试验人员，于不同日期，在不同仪器上对同一样品照重复性试验操作进行检测，12份样品中中间体V检出量RSD≤15%。
[0012]本专利技术的有益效果是：与现有技术相比，本专利技术采用乙腈
‑
磷酸二氢钾溶液梯度洗脱体系，不仅能使得遗传毒杂质中间体V和马来酸阿法替尼以及其他已知杂质均能有效分离，且峰型对称性较好、出峰快，还能快速检测出低于质控限度1/10的遗传毒杂质中间体V，同时在专属性、定量限、检测限、线性范围以及重复性上表现出显著的优势，具有检测时间更短、精密度和准确度更高、重复性好以及系统适用性好等优点，为阿法替尼药品的质量控制提供重要的方法检测参考依据。
附图说明
[0013]图1是检查空白溶剂液相色谱图；图2是检查马来酸定位溶液液相色谱图；图3是检查中间体V溶液液相色谱图；图4是检查杂质干扰液相色谱图；图5是检查样品溶液液相色谱图；图6是检查8.0ppm中间体V液相色谱图；图7是相对于供试品浓度8ppm~45ppm范围内线性图。
具体实施方案
[0014]本专利技术公开了一种马来本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马来酸阿法替尼遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，运用高效液相色谱法，以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，设置检测波长与进样量，以体积比计，通过C18色谱柱梯度洗脱，洗脱程序为：以流动相A 75%，流动相B 25%开始洗脱，逐渐减少流动相A比例，逐渐增加流动相B比例，至25分钟流动相A达到35%，流动相B达到65%，继续洗脱10分钟至35分钟，增加流动相A比例，减少流动相B比例，至36分钟时将流动相A调整至75%，流动相B调整至25%，继续洗脱9分钟；该检测方法能检测8.0ppm的马来酸阿法替尼遗传毒性杂质。2.根据权利要求1所述的一种马来酸阿法替尼遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述的高效液相色谱法中检测波长为230nm，进样量为50μL，C18色谱柱选自YMC Triart C18柱，规格为4.6mm
×
250mm、3μm。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐进，王子月，叶志兵，李龙霞，姚书扬，汤怀松，
申请(专利权)人：南京华威医药科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：