杂交瘤细胞株、抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体及其制备和应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，特别是涉及一种杂交瘤细胞株、抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体及其制备和应用。本发明专利技术针对具有良好的反应原性的BAB抗原制备、筛选得到杂交瘤细胞株，制备得到了抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体，为布鲁氏菌诊断及新型疫苗的研制提供了基础。础。

【技术实现步骤摘要】
杂交瘤细胞株、抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体及其制备和应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，特别是涉及一种杂交瘤细胞株、抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体及其制备和应用。

技术介绍

[0002]布鲁菌病(布病)是由布鲁氏菌引起的以流产和发热为特征的人兽共患病，严重地威胁着人和多种动物的生命健康，对农业生产和公共卫生造成了巨大的威胁。布鲁氏菌具有内寄生的特性,因此被感染的人或动物一般需要接受长时间的抗生素治疗,而且往往会留下严重后遗症。
[0003]反刍动物和猪对布鲁氏菌高度易感。布鲁氏菌特征性地侵害其生殖器官并导致母畜流产和不孕。当患病母畜分娩时，胎盘组织中布鲁氏菌达到极高数量，每克组织中细菌数可高达1014个，因此母畜流产是该病的传染性病症。在世界卫生组织(WHO)实验室生物安全手册中，布鲁氏菌被列为Ⅲ类危险级。布鲁氏菌病易传播给人，引起急性发热性疫病(波浪热)，可进一步发展成慢性型，引起肌肉-骨骼系统、心血管系统和中枢神经系统的严重并发症。本病流行区域应采取预防措施，防止人感染。职业性接触是常见的感染原因，口腔、呼吸道和结膜是基本感染途径。
[0004]布鲁菌是一种兼性胞内寄生菌，感染人畜后可在宿主体内建立慢性感染且难以被彻底清除，布鲁菌被认为缺乏病原菌所具有的经典毒力因子，因此对毒力基因的鉴定和研究对阐述其致病机制有着重要的意义。
[0005]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的首要专利技术目的在于提供一种用于生产抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆隆抗体的杂交瘤细胞株。
[0007]本专利技术的第二专利技术目的在于提供一种抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体。
[0008]本专利技术的第三专利技术目的在于提出上述杂交瘤细胞株、布鲁氏BAB抗原的单克隆抗体的应用。
[0009]本专利技术的第四专利技术目的在于提出上述杂交瘤细胞株、布鲁氏BAB抗原的单克隆抗体的制备方法。
[0010]为了完成上述专利技术目的，采用的技术方案为：
[0011]本专利技术提出一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19941。
[0012]本专利技术还提出该杂交细胞株在用于产抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆隆抗体中的应用。
[0013]可选的，所述布鲁氏菌BAB抗原的表位如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示。
[0014]可选的，编码所述布鲁氏菌BAB抗原氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0015]本专利技术还提出一种抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC No.19941的杂交瘤细胞株产生。
[0016]本专利技术还提出该单克隆抗体在制备布鲁氏菌BAB抗原检测试剂中的应用。
[0017]可选的，所述布鲁氏菌BAB抗原的表位如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示。
[0018]本专利技术还提出该杂交瘤细胞株的筛选方法，其特征在于，至少包括以下步骤：
[0019]以BAB蛋白作为免疫原，免疫注射BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾脏细胞并将其与骨髓瘤细胞融合，获得了表达抗布鲁氏菌BAB抗原的杂交瘤细胞株；所述BAB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示。
[0020]其中，编码所述BAB蛋白的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本专利技术还提出该单克隆抗体的制备方法，至少包括以下步骤：
[0021]以BAB蛋白作为免疫原，免疫注射BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾脏细胞并将其与骨髓瘤细胞融合，获得了表达抗布鲁氏菌BAB抗原的杂交瘤细胞株；所述BAB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示；
[0022]采用所述杂交瘤细胞株进行表达，获得所述单克隆抗体。
[0023]其中，编码所述BAB蛋白的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0024]本专利技术至少具有以下有益的效果：
[0025]本专利技术获得了具有良好的反应原性的BAB抗原，并针对BAB抗原制备、筛选得到杂交瘤细胞株，制备得到了抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体，为布鲁氏菌诊断及新型疫苗的研制提供了基础。
附图说明
[0026]图1为免疫效价检测结果图；
[0027]图2 SDS-PAGE电泳鉴定图，2为本专利技术实施例保藏的杂交瘤细胞株，3为mark；
[0028]图3为Western-Blot检测结果图，左侧条带为mark，右侧条带为目的蛋白、12％SDS-PAGE。
[0029]保藏说明
[0030]杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.19941，分类命名：杂交瘤细胞株，保藏日期为2020年5月11日。
[0031]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本专利技术的范围。
具体实施方式
[0032]下面通过实施例和对比例进一步说明本专利技术，这些实施例只是用于说明本专利技术，本专利技术不限于以下实施例。凡是对本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵盖在本专利技术的保护范围中。
[0033]为了寻找布鲁菌的经典毒力因子，本专利技术实施例从布鲁氏菌Rev.I株基因组中扩
增BAB-22915基因片段。布鲁菌的BAB22915基因为编码裂解酶基因，突变株表现出在RAW264.7细胞和小鼠体内存活率下降；突变株BAB22915在宿主细胞内不与溶酶体融合，不引起明显的病理损伤。本专利技术通过锐意研究发现，获得了具有良好的反应原性的BAB抗原，并针对BAB抗原制备、筛选得到杂交瘤细胞株，制备得到了抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体，为布鲁氏菌诊断及新型疫苗的研制提供了基础。
[0034]本专利技术实施例的杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.19941，分类命名：杂交瘤细胞株，保藏日期为2020年5月11日。
[0035]本专利技术实施例的抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体，其由保藏编号CGMCC No.19941的杂交瘤细胞株产生。
[0036]本专利技术实施例还涉及该杂交细胞株在用于产抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆隆抗体中的应用。
[0037]具体的，布鲁氏菌BAB抗原的表位如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示。
[0038]具体的，SEQ ID No.1的氨基酸序列为：
[0039]GSMKIIASVLAAALFASTALSGAGAATTPAPAAATDNAVNMPKPECETDFGQWMENLTREAREAGVGEKGIAELHKASIDQKVLGRDRKQTVFNLTFTEFSKRLISEARLKKGQENLV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19941。2.如权利要求1所述的杂交细胞株在用于产抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆隆抗体中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述布鲁氏菌BAB抗原的表位如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，编码所述布鲁氏菌BAB抗原氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。5.一种抗布鲁氏菌BAB抗原的单克隆抗体，其特征在于，其由保藏编号为CGMCC No.19941的杂交瘤细胞株产生。6.如权利要求5所述的单克隆抗体在制备布鲁氏菌BAB抗原检测试剂中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述布鲁氏菌BAB抗原的表位如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列所示。8.一种如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：温永俊，刘国英，关平原，范秀丽，杭天宇，刘建奇，魏学峰，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：