菌株安-15、其选育方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种菌株安-15、其选育方法及其应用。该菌株安-15，拉丁名Saccharomyces cerevisiae，保藏编号为CCTCC NO：M 2019643。本发明专利技术提供的菌株安-15属于布拉氏酵母菌株，其具有更好的耐酸、耐胆盐、耐人工胃液及人工肠液能力。肠液能力。

【技术实现步骤摘要】
菌株安-15、其选育方法及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物领域，具体而言，涉及一种菌株安-15、其选育方法及其应用。

技术介绍

[0002]布拉氏酵母于20世纪20年代由法国微生物学家Henri Boulard首次发现并分离，后被确认为酿酒酵母的一个亚种，其没有病原性，并具有特殊的生物活性。布拉氏酵母能有效的治疗人和动物的各种腹泻，且未发现不良反应。布拉氏酵母菌进入人和动物肠道后，不仅可以降解致病菌产生的毒素，还能刺激肠道黏膜增强免疫功能，同时调节肠道微生态平衡，阻止病原菌的侵袭。
[0003]布拉酵母发挥作用主要环境在人和动物的胃肠环境。在进入胃中要耐受pH2.0～2.5的低pH环境及胃液胃蛋白酶的影响，进入肠道要耐受胆盐及肠液中胰蛋白酶的影响。
[0004]公开号为CN104388325A的中国专利中公开了一株饲用布拉氏酵母菌株SH94及其应用，从该专利的布拉氏酵母耐人工胃液实验结果表明，该布拉氏酵母SH94在pH2.0的人工胃液停留2小时后，活菌数有90％，该布拉氏菌株在pH6.8人工肠液停留2小时后活菌数几乎不变。然而，从其实施例看，菌株SH94的耐人工胃液及人工肠液是分别进行的，实际应该连续检测其耐受能力，并针对其连续消化耐受性进行性状改良。且该专利中没有提及菌株SH94的耐人及动物胆盐的能力，仅提及了耐NaCl的能力，此外该菌株在耐酸能力及耐酸时间上也需要进一步提升。
[0005]基于上述原因，有必要提供一种耐酸、耐胆盐、耐人工胃液及人工肠液能力更强的布拉氏酵母菌株。/>
技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于提供一种菌株安-15、其选育方法及其应用，以解决现有技术中布拉氏酵母菌株耐酸、耐胆盐、耐人工胃液及人工肠液能力不足的问题。
[0007]为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种菌株安-15，拉丁名Saccharomyces cerevisiae，保藏编号为CCTCC NO：M 2019643。
[0008]根据本专利技术的另一方面，还提供了上述菌株安-15的选育方法，其包括以下步骤：将布拉氏酵母进行连续进化培养，得到进化培养菌株；对进化培养菌株进行常压室温等离子体(ARTP)诱变选育，得到突变株；依次对突变株进行高通量筛选和多次迭代诱变，得到菌株安-15。
[0009]进一步地，布拉氏酵母的保藏编号为CCTCC NO：M 2012116。
[0010]进一步地，连续进化培养过程中，将布拉酵母接入pH为2.0～3.0的液体培养基，每16～24h转接一次，连续转接进化培养3～6个月，得到进化培养菌株。
[0011]进一步地，按重量份计，液体培养基包括葡萄糖3～8％，蛋白胨0.5～2％，磷酸二氢钾0.1～0.3％，硫酸镁0.05～0.2％，其余为水。
[0012]进一步地，等离子体诱变选育过程中，处理温度为20～37℃，处理压力为0.8～
15的耐酸性、耐胆盐能力都有较大提高，在人工胃、肠液的持续消化后的存活率也明显提升。
[0027]为了进一步提高适应性定向进化效果，以进一步改善最终菌种的性能，在一种优选的实施方式中，上述连续进化培养过程中，将布拉氏酵母接入pH为2.0～3.0的液体培养基(pH2.0～2.5十分接近胃液环境。)，每16～24h转接一次，连续转接进化培养3～6个月，得到进化培养菌株。
[0028]更优选地，按重量份计，液体培养基包括葡萄糖3～8％，蛋白胨0.5～2％，磷酸二氢钾0.1～0.3％，硫酸镁0.05～0.2％，其余为水。
[0029]在一种优选的实施方式中，等离子体诱变选育过程中，处理温度为20～37℃，处理压力为0.8～1.2KPa；优选地，等离子体诱变选育过程中，诱变功率100～140W，进气量10～12SLM(Standard Liter per Minute)，诱变时间为30～60S。该常压室温等离子体诱变选育条件下更有利于提高最终菌种的性能。
[0030]在一种优选的实施方式中，高通量筛选及多次迭代的步骤包括：将突变株置于装有选择培养基的高通量孔板中；恒温振荡培养，18～24小时后，用酶标仪测定600nm下的吸光值OD，比较所述吸光值OD相对较高的菌株进行所述多次迭代诱变，得到所述菌株安-15。
[0031]优选地，多次迭代诱变的迭代次数为4～8次。
[0032]根据本专利技术的另一方面，还提供了上述菌株安-15在制备抗腹泻药物中的应用。该菌株安-15属于布拉氏酵母菌株，其具有更好的耐酸、耐胆盐、耐人工胃液及人工肠液能力，因此更适合在制备抗腹泻药物中应用。
[0033]根据本专利技术的另一方面，还提供了上述菌株安-15在饲料酵母中的应用。比如在饲料级反刍专用酵母中的应用。
[0034]根据本专利技术另一方面，还提供了上述菌株安-15在制备食品中的应用。
[0035]以下结合具体实施例对本申请作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本申请所要求保护的范围。
[0036]实施例1
[0037]出发菌为安琪菌种库中的一株布拉酵母安琪1.27，将其接入pH2.5的液体培养基连续进化培养，液体培养基包括葡萄糖5％，蛋白胨1％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，pH 2.5。每24h转接一次，这样连续转接进化培养3个月，再对进化培养后的菌株。
[0038]将进化培养菌株进行常压室温等离子体诱变选育，条件如下：功率120W，进气量10SLM,诱变时间30～45秒，得到突变菌。
[0039]将突变株置于装有固体发酵培养基的高通量孔板中；向高通量孔板中添加酒精，离心后取上清液，用酶标仪测定600nm下的吸光值OD，比较吸光值OD相对较高的菌株进行4次迭代诱变，得到菌株安-15。
[0040]性能评价：
[0041]耐酸能力情况：分别将实施例1中选育得到的菌株安-15、出发菌安琪1.27和现有菌株SH94(见已公开专利CN104388325A)在不同pH值37℃摇床培养48小时，平皿活菌计数，各菌株存活率结果见表1：
[0042]表1不同pH值下培养各菌株存活率
[0043]pH安-15安琪1.27菌株SH94
10002.00.61％0.54％0.48％2.583.74％41.37％40.52％3.089.97％63.69％63.27％自然100.00％100.00％100.00％
[0044]由此可见，在耐酸性方面，诱变菌株安-15比原菌株均有提高，从数据可以看出，在耐酸pH2.5情况下提高超过20％以上。
[0045]耐胆盐能力情况：在不同胆盐中情况，37℃摇床培养48小时，平皿活菌计数，各菌株存活率结果见表2：
[0046]表2不同胆盐浓度下培养各菌株存活率
[0047][0048]从上面数据看，安-15耐胆盐有提高，提高9％左右。
[0049]耐人工胃液能力情况：在人工胃液中，活菌数计数(
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106)，结果见表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菌株安-15，拉丁名Saccharomyces cerevisiae，保藏编号为CCTCC NO：M 2019643。2.一种权利要求1所述的菌株安-15的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：将布拉氏酵母进行连续进化培养，得到进化培养菌株；对所述进化培养菌株进行等离子体诱变选育，得到突变株；依次对所述突变株进行高通量筛选和多次迭代诱变，得到所述菌株安-15。3.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，所述布拉氏酵母的保藏编号为CCTCC NO：M 2012116。4.根据权利要求2或3所述的选育方法，其特征在于，所述连续进化培养过程中，将所述布拉氏酵母接入pH为2.0～3.0的液体培养基，每16～24h转接一次，连续转接进化培养3～6个月，得到所述进化培养菌株。5.根据权利要求4所述的选育方法，其特征在于，按重量份计，所述液体培养基包括葡萄糖3～8％，蛋白胨0.5～2％，磷酸二氢钾0.1～0.3％，硫酸镁0.05～...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙雅芳，熊涛，李知洪，周立学，张海波，郭天芬，刘云华，
申请(专利权)人：安琪酵母股份有限公司，
类型：发明
国别省市：