一种支原体检测培养基及其制备方法技术

本申请涉及细胞质量检测的技术领域，具体公开了一种支原体检测培养基及其制备方法。该支原体检测培养基具体包括以下组分，基础培养基75

【技术实现步骤摘要】
一种支原体检测培养基及其制备方法


[0001]本申请涉及细胞质量检测的
，更具体地说，它涉及一种支原体检测培养基及其制备方法。

技术介绍

[0002]人间充质干细胞(human MSCs，hMSCs)是一类具有一定的自我复制更新和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于胎儿和成人各组织中，如骨髓、脂肪、皮肤、牙髓、肌腱，以及新生儿附属组织，如脐带、胎盘、羊膜等组织。除一定程度的分化潜能外，hMSCs还具有独特的免疫调控和组织再生功能，参与调控异常免疫反应、维护免疫平衡，帮助机体形成有利于病损组织细胞修复或再生的微环境，以促进损伤组织细胞的修复或再生。hMSCs制剂/制品的质量和安全性将直接影响到hMSCs制剂/制品的修复或再生效果。因此，对hMSCs制剂/制品的质量评价和安全性检测尤为重要。
[0003]hMSCs微生物学安全性检测包括对支原体的检测。支原体(mycoplasma)是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1～0.3μm。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。对人致病的支原体主要有肺炎支原体、溶脲脲原体、人型支原体、生殖器支原体等。
[0004]目前，常用的hMSCs支原体的检测方法有两种，一种是直接培养法和指示细胞感染法(或称DNA染色法)相结合进行确证性支原体检测；另一种是先进行支原体的核酸扩增，再进行支原体检测的方法。然而，上述两种检测方法均存在培养周期长的缺点，同时，还存在支原体检测灵敏度较低的问题。
专利技术内容
[0005]为了缩短支原体的检测周期，同时，提高支原体检测的灵敏度，本申请提供一种支原体检测培养基及其制备方法。
[0006]第一方面，本申请提供的一种支原体检测培养基，采用如下的技术方案：
[0007]一种支原体检测培养基，所述支原体检测培养基具体包括以下组分：基础培养基75
‑
85份；酵母粉2.5
‑
5.0份；灭活的马血清10
‑
20份；短肽3.0
‑
4.5份；氯化四氮唑0.08
‑
0.18份；苦杏仁苷2.5
‑
3.5份；所述基础培养基包括以下重量份的组分，氯化钠0.3
‑
0.7份；磷酸氢二钾0.1
‑
0.3份；蛋白胨3.5
‑
4份；牛肉浸出液90
‑
95份。
[0008]通过采用上述技术方案，本申请提供了一种新的用于检测hMSCs质量检测的培养基，主要目的是用于检测hMSCs中支原体的情况。本申请提供的支原体检测培养基，能够在较短时间内得到检测结果，从而有效缩短了hMSCs中支原体的检测周期，进而能够在最短时间内收到hMSCs的情况并今早做出准备应对性策略，降低因检测周期较长而发生耽误准备应对性策略以及准备临床治疗的情况。
[0009]短肽是蛋白质水解的中间产物。由于支原体自身合成能力较弱，故需要较长时间合成蛋白质。本申请通过在培养基中加入短肽为支原体合成蛋白质提供短肽，进而提高支
原体的合成速度，从而缩短支原体的生长周期，使得支原体在本申请提供的支原体检测培养基上能够在较短时间内检测到。
[0010]苦杏仁苷来源于苦扁桃(巴旦杏)的种子仁、枇杷叶、桃仁、杏仁、梅仁等。在本申请提供的检测培养基的基础上，加入苦杏仁苷，能够进一步提高利用本申请提高的支原体检测培养基的检测周期。目前，对于苦杏仁苷的作用并没有明确的作用和作用机理，而通过在本申请的检测培养基中加入苦杏仁苷，能够缩短支原体的检测周期来看，苦杏仁苷具有保护细胞并促进细胞生长的作用，从而能够促进支原体的生长，缩短支原体的生长周期，从而缩短支原体的检测周期。
[0011]基于上述，即便待测样品中支原体的含量较低，也可以在短肽和苦杏仁苷的作用下，使得待测样品中的支原体快速扩增，从而达到支原体检测培养基能够检出的限度，从而便于利用支原体检测培养基检测出待测样品中含有支原体。因此，本申请提供的支原体检测培养基对于支原体的检测具有较高的灵敏度。
[0012]综上所述，本申请提供的支原体检测培养基能够有效缩短支原体的检测周期，同时提高支原体检测的灵敏度。
[0013]优选的，所述支原体检测培养基具体包括以下组分：基础培养基75
‑
85份；酵母粉2.5
‑
5.0份；灭活的马血清10
‑
20份；短肽3.6
‑
4.2份；氯化四氮唑0.12
‑
0.15份；苦杏仁苷2.8
‑
3.2份。
[0014]优选的，所述支原体检测培养基还包括抗生素，所述抗生素的终浓度为60
‑
85U/mL。
[0015]优选的，所述支原体检测培养基还包括抗生素，所述抗生素的终浓度为50
‑
60U/mL。
[0016]优选的，所述支原体检测培养基还包括抗生素，所述抗生素的终浓度为85
‑
100U/mL。
[0017]在一个具体的实施方案中，所述抗生素的终浓度可以是50U/mL、60U/mL、85U/mL、100U/mL。
[0018]优选的，所述短肽为由4个氨基酸残基组成的短链肽。
[0019]优选的，所述短肽为由6个氨基酸残基组成的短链肽。
[0020]优选的，所述短肽为由5个氨基酸残基组成的短链肽。
[0021]优选的，所述短肽为由7个氨基酸残基组成的短链肽。
[0022]优选的，所述短肽链为Val
‑
Tyr
‑
Leu
‑
Tyr
‑
Glu
‑
Val
‑
Ala的低聚短肽。
[0023]优选的，所述短肽链为Tyr
‑
Leu
‑
Tyr
‑
Glu
‑
Val
‑
Ala的低聚短肽。
[0024]优选的，所述短肽链为Leu
‑
Tyr
‑
Glu
‑
Val
‑
Ala的低聚短肽。
[0025]优选的，所述短肽链为Tyr
‑
Glu
‑
Val
‑
Ala的低聚短肽。
[0026]优选的，所述短肽链为Val
‑
Tyr
‑
Leu
‑
Tyr的低聚短肽。
[0027]优选的，所述支原体检测培养基还包括琼脂，所述琼脂的浓度为7.5
‑
15g/L。
[0028]通过采用上述技术方案，经过试验分析，将短肽、氯化四氮唑、苦杏仁苷的添加量控制在上述范围，能够再进一步缩短支原体的检测周期。同时，对本申请提供的支原体检测培养基进一步优化，能够本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种支原体检测培养基，其特征在于，所述支原体检测培养基具体包括以下组分：基础培养基75
‑
85份；酵母粉2.5
‑
5.0份；灭活的马血清10
‑
20份；短肽3.0
‑
4.5份；氯化四氮唑0.08
‑
0.18份；苦杏仁苷2.5
‑
3.5份；所述基础培养基包括以下重量份的组分，氯化钠0.3
‑
0.7份；磷酸氢二钾0.1
‑
0.3份；蛋白胨3.5
‑
4份；牛肉浸出液90
‑
95份。2.根据权利要求1所述的一种支原体检测培养基，其特征在于，所述支原体检测培养基具体包括以下组分，基础培养基75
‑
85份；酵母粉2.5
‑
5.0份；灭活的马血清10
‑
20份；短肽3.6
‑
4.2份；氯化四氮唑0.12
‑
0.15份；苦杏仁苷2.8
‑
3.2份。3.根据权利要求1所述的一种支原...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁潇，黄明光，
申请(专利权)人：北京兴德通医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：