角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒及制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒及制备方法与应用，首先将角鲨烯酸和西达本胺分别溶解于甲基甲酰胺中，以N

【技术实现步骤摘要】
角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒及制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其涉及一种角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒及制备方法与应用。

技术介绍

[0002]胰腺癌是一种恶性消化道肿瘤，死亡率为发病率的94％，肿瘤异质性高。由于缺乏早期诊断标志物，预后效果极差，目前5年生存率仅为8～9％。胰腺癌具有十分复杂的肿瘤微环境，包括多种类型的炎症细胞。此外，肿瘤相关成纤维细胞组成了致密的细胞外基质，阻碍药物递送的同时压缩了血管的空间，小分子药物难以进入肿瘤内部从而发挥杀伤肿瘤细胞的作用。目前胰腺癌的治疗仍以传统手术切除为主，然而符合手术条件的病人比例低且切除后有很高的复发率。
[0003]西达本胺是由深圳微芯生物科技有限责任公司自主设计和合成的新分子实体药物，机制新颖，是全球首个亚型选择性组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂，属于表观遗传调控剂类药物，可以用于多种疾病如癌症等的治疗。临床研究表明西达本胺对包括外周T细胞淋巴瘤在内的各种淋巴瘤具有确切疗效，是首个获批用于治疗外周T细胞淋巴瘤的口服药物，通过抑制HDAC的生物学活性产生作用，并由此产生针对肿瘤发生的多条信号传递通路基因表达的改变(即表观遗传改变)。最新临床前研究结果显示，西达本胺对实体肿瘤包括乳腺癌、胰腺癌等具有良好的抗肿瘤作用，综合指标好于同类作用机制药物的同期研究结果。然而西达本胺为亲水性小分子化合物，对胰腺癌等实体肿瘤存在靶向性低，血液毒性大，肿瘤微环境渗透效率低等缺点。这些缺点严重限制了西达本胺在实体肿瘤方面的应用。
[0004]角鲨烯是天然合成胆固醇脂质的前体物质，疏水性强，生物安全性好，广泛应用于医药、化妆品、保健品等领域。许多研究结果表明，角鲨烯具有一定抗肿瘤生物活性，其作用机理是通过抑制肿瘤细胞的生长，增强机体的免疫力，从而增强对肿瘤的抵抗力。目前角鲨烯已被通过结构改造引入羧基，并与吉西他滨等小分子药物共价链接，形成前药分子，该前药分子有效改善了吉西他滨半衰期短的劣势，提高了抗肿瘤活性，同时更易在水中自组装形成纳米粒，揭示了角鲨烯化前药具有良好的应用于肿瘤靶向治疗的前景。然而目前尚未有角鲨烯化前药在改善胰腺癌微环境渗透，并通过胰腺癌细胞响应释药方面的应用公开报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对西达本胺在治疗实体肿瘤时存在靶向性差和肿瘤微环境渗透率低等缺点，提供一种角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒及制备方法与应用。本专利技术通过将西达本胺与角鲨烯链接形成前药分子提高西达本胺的生物相容性，同时以叶酸、对甲氧基苯甲酰胺或RGD等小分子配体作为靶头，制备一种新型双重靶向性自组装纳米粒。该自组装纳米粒可明显提高西达本胺对胰腺癌肿瘤微环境的渗透作用，同时具有更强的胰腺癌肿瘤靶向性和抑制肿瘤细胞增长作用。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)制备角鲨烯化西达本胺(SQ
‑
CHI)前药分子：将角鲨烯酸(SQ
‑
COOH)溶解于甲基甲酰胺(DMF)中，配成浓度为100～200mg/mL的第一SQ
‑
COOH储备液，每毫升SQ
‑
COOH储备液中加入30～60mg的N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)和50～100mg的1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸(EDCI)，室温反应30～120min，得到第一SQ
‑
COOH反应液。另取西达本胺(CHI)溶解于甲基甲酰胺(DMF)，配成浓度为50～100mg/mL的第一CHI储备液，将SQ
‑
COOH反应液与CHI储备液按体积比为1～2:1混合并于室温氮气保护条件下反应48～96h，反应结束后通过快速柱层析法进行提纯即得角鲨烯化西达本胺(SQ
‑
CHI)前药分子；洗脱液为二氯甲烷：甲醇＝85～495:5。
[0008](2)制备配体修饰的聚乙二醇化角鲨烯分子：将SQ
‑
COOH溶解于DMF中，配成浓度为1000～2000mg/mL的第二SQ
‑
COOH储备液，每毫升SQ
‑
COOH储备液中加入30～60mg的NHS和50～100mg的EDCI，室温反应30～120min，得到第二SQ
‑
COOH反应液。另取叶酸
‑
聚乙二醇
‑
氨基(FA
‑
PEG
‑
NH2)、对甲氧基苯甲酰胺
‑
聚乙二醇
‑
氨基(AEAA
‑
PEG
‑
NH2)或(精氨酸
‑
甘氨酸
‑
天冬氨酸
‑
聚乙二醇
‑
氨基)RGD
‑
PEG
‑
NH2溶于DMF配成浓度为50～100mg/mL的第二DMF储备液，将第二SQ
‑
COOH反应液和第二DMF储备液按体积比1～2:1混合并于室温氮气保护条件下反应48～96h。反应结束后用分子截留量为3Kda的超滤离心管以10000～14000rpm转速高速离心30～60min，除去游离SQ
‑
COOH，得到配体修饰聚乙二醇化角鲨烯分子。
[0009](3)制备配体修饰角鲨烯化西达本胺前药纳米粒。将步骤1制备的制备角鲨烯化西达本胺(SQ
‑
CHI)前药分子溶解于体积浓度为95～100％的乙醇，制备成浓度为3.32～6.64mg/mL的第三储备液。另取步骤2制备的配体修饰的聚乙二醇角鲨烯分子溶解于体积浓度为95～100％的乙醇，制备成浓度为0.664～3.32mg/mL的第四储备液。将第三储备液和第四储备液按体积比为1:1混合，所得混合液中角鲨烯化西达本胺(SQ
‑
CHI)前药分子与配体修饰的聚乙二醇角鲨烯分子的质量比为1：0.1～1。将混合液作为油相，去离子水为水相，油相与水相体积比为1:1～20。取上述油相逐滴滴入水相中，搅拌5～10min后，减压蒸发除去乙醇，再将混合物置于超声仪中超声30～60min。即得配体修饰角鲨烯化西达本胺前药纳米粒。
[0010]一种根据上述的方法制备的角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒。
[0011]一种上述角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒在制备抗实体肿瘤治疗的药物中的应用。所述角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒制备成制剂，所述该制剂可提高西达本胺对实体肿瘤的靶向性和肿瘤微环境渗透，增强西达本胺治疗胰腺癌、结直肠癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤的疗效。
[0012]下面对本专利技术作进一步研究：
[0013]1、载药量的测定
[0014]将角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒高速离心，取上清液并采用超高效液相色谱法(U本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种角鲨烯化西达本胺前药自组装纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备角鲨烯化西达本胺(SQ
‑
CHI)前药分子：将角鲨烯酸(SQ
‑
COOH)溶解于甲基甲酰胺(DMF)中，配成浓度为100～200mg/mL的第一SQ
‑
COOH储备液，每毫升SQ
‑
COOH储备液中加入30～60mg的N
‑
羟基琥珀酰亚胺(NHS)和50～100mg的1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸(EDCI)，室温反应30～120min，得到第一SQ
‑
COOH反应液。另取西达本胺(CHI)溶解于甲基甲酰胺(DMF)，配成浓度为50～100mg/mL的第一CHI储备液，将SQ
‑
COOH反应液与CHI储备液按体积比为1～2:1混合并于室温氮气保护条件下反应48～96h，反应结束后通过快速柱层析法进行提纯即得角鲨烯化西达本胺(SQ
‑
CHI)前药分子；洗脱液为二氯甲烷：甲醇＝85～495:5。(2)制备配体修饰的聚乙二醇化角鲨烯分子：将SQ
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COOH溶解于DMF中，配成浓度为1000～2000mg/mL的第二SQ
‑
COOH储备液，每毫升SQ
‑
COOH储备液中加入30～60mg的NHS和50～100mg的EDCI，室温反应30～120min，得到第二SQ
‑
COOH反应液。另取叶酸
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聚乙二醇
‑
氨基(FA
‑
PEG
‑
NH2)、对甲氧基苯甲酰胺
‑
聚乙二醇
‑
氨基(AEAA
‑
PEG
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【专利技术属性】
技术研发人员：谷满仓，陈凯迪，赵山，石燕，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：