一种对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR检测的方法及引物组合和应用技术

本发明专利技术公开了一种对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR检测的方法及引物组合和应用。该引物组合包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18中的至少两组引物。本申请构建的2个微卫星多重PCR体系包含9个微卫星位点，与现有的简单PCR方法相比，其效率提高了4

【技术实现步骤摘要】
一种对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR检测的方法及引物组合和应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR检测的方法及引物组合和应用。

技术介绍

[0002]半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是舌鳎科、舌鳎属鱼类，俗称为龙利鱼、鳎目鱼。是中国近海一种比目鱼类，由于其味道鲜美且具有极高营养价值，现已成为我国东部沿海最重要的海水养殖鱼类之一。由于其雌性比雄性生长快达2
‑
4倍，因此其性别控制育种备受关注，已开展了较多研究，运用分子标记进行性别鉴定及性别决定机制分析。2019年通过实行传统的家系选育，选育出高雌抗病速生的苗种，再利用国际最先进的基因组编辑技术，剔除掉不利于生长的雄性性别基因。选出来品质优良的种鱼，再培育出优质鱼卵，减少“伪雄鱼”出现的概率，从而提高雌鱼的比例，繁育出高雌品种舌鳎苗种，使得困扰养殖户多年的难题得以攻破。虽然性别控制育种取得一定突破，但由于受近海环境变化影响和过度捕捞等因素影响，加之累代养殖和近亲交配等因素，野生半滑舌鳎在数量急剧降低，良种培育及传统遗传选育技术仍是推动我国半滑舌鳎养殖产业健康、可持续发展亟待解决的重要课题之一。
[0003]研究表明运用微卫星标记辅助管理与物理标记相比可以显著降低遗传育种中环境效应因素的影响。微卫星标记技术具有稳定性高和共显性等优点是进行群体遗传多样性、系谱分析与亲子鉴定的理想标记，已在半滑舌鳎、团头鲂(Megalobrama amblycephala)，草鱼(Ctenopharyngodon idella)、唇(Hemibarbus labeo)、鳜鱼(Siniperca chuatsi)、米氏无齿脂鲤(Curimata mivartii)、真鲷(Pagrus major)、大西洋鳙鲽(Hippoglossus hippoglossus)、牙鲆(Paralichthys olivaceus)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、斑节对虾(Penaeus monodon)、中国对虾(Penaeus chinensis)、拟穴青蟹等重要水生经济动物中获得广泛应用。
[0004]多重PCR技术(Mutiplex PCR)技术具有高效、高通量、检测成本低等优点，自1988年由Chambercian等首次建立该方法以来，迅速发展并应用于多病毒、细菌的高通量快速检测、群体遗传分析、亲子鉴定及数量性状基因座位(QT L)的定位等研究。随着技术发展多重PCR技术已在十余种经济水产生物中得到运用，从而提高了家系管理和亲子鉴定效率。在半滑舌鳎群体及家系选育中，高效率、低成本、可视化的遗传评价方法仍未有效解决，亲本与子代亲缘关系的遗传评价与选择问题越来越突出，因此获取高效，便利的家系亲本辅助选择方法势在必行。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供涉及一种对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR检测的方法及引物组合和应用，可为实现高效、快速准确筛选传统选育亲本、家系遗
传分析和系谱认证提供有效的技术支撑。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0007]一种用于对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR的引物组合，该引物组合包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18中的至少两组引物。
[0008]引物具体序列如下所示：
[0009]B121
‑
20
‑
F：CTATTTACAGGGCTACAGTC；(SEQ ID NO.1)
[0010]B121
‑
20
‑
R：GTCCACAGGAAGCACCAT；(SEQ ID NO.2)
[0011]Cyse147
‑
F：ACCCAAAGCAAACACAAAGG；(SEQ ID NO.3)
[0012]Cyse147
‑
R：GATCGATGGGTGGATAGCAC；(SEQ ID NO.4)
[0013]Cse176
‑
F：ATGGGCTGGTGCAGATAGAG；(SEQ ID NO.5)
[0014]Cse176
‑
R：GGAGCTGCTGATGATCCTTC；(SEQ ID NO.6)
[0015]Cyse166
‑
F：CGTACACACGCTGAAATTG；(SEQ ID NO.7)
[0016]Cyse166
‑
R：GAGAGGGAGAAAAAGCAAAC；(SEQ ID NO.8)
[0017]Cyse232
‑
F：CCCCGGTGATTTATACTCCA；(SEQ ID NO.9)
[0018]Cyse232
‑
R：ACCGCCGTAGACATGGTAAG；(SEQ ID NO.10)
[0019]hncse179
‑
F：CACCACCTTCTTCACTTCCC；(SEQ ID NO.11)
[0020]hncse179
‑
R：CCATCTTCGGCCACTCTGT；(SEQ ID NO.12)
[0021]hncse201
‑
F：AGTCTCTGAAAGTGCCTCCGA；(SEQ ID NO.13)
[0022]hncse201
‑
R：CTCGTTGTTCGTTCGTTCGT；(SEQ ID NO.14)
[0023]hncse187
‑
F：AGTGGCTTCACAACAAACAGT；(SEQ ID NO.15)
[0024]hncse187
‑
R：CGCTTTCTGATCTGAGTTACGC；(SEQ ID NO.16)
[0025]hncse45
‑
F：AGAAGCACATCTTACAACCC；(SEQ ID NO.17)
[0026]hncse45
‑
R：GAATGCAGCAATCAATAAGG；(SEQ ID NO.18)
[0027]微卫星位点为：B121
‑
20、Cyse147、Cse176、Cyse166、Cyse232、hncse179、hncse201、hncse187、hncse45。
[0028]进一步地本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18中的至少两组引物。2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括如SEQ ID NO.1～10所示的引物序列；或如SEQ ID NO.11～18所示的引物序列。3.一种用于对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组合。4.一种对半滑舌鳎微卫星位点进行多重PCR检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品DNA；(2)采用权利要求2所述的引物组合，或权利要求3所述的试剂盒对其进行多重PCR检测即可。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述多重PCR反应体系包括100ng待测样品DNA、1
×
PCR缓冲液、1.5mmol/L Mg
2+
、1U Taq酶、0.2mmol/LdNTPs、引物组合，最后用ddH2O补足至15μL。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物组合为如SEQ ID NO.1～10所示的序列时，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的引物浓度分别为0.27μmol/L、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的引物浓度分别为0.33μmol/L、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6的引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗贵东，徐营，
申请(专利权)人：兴义民族师范学院，
类型：发明
国别省市：