一种hectd4基因敲除斑马鱼癫痫模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了用于CRISPANT特异性敲除斑马鱼hectd4基因构建斑马鱼癫痫模型的sgRNA组合，其序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示，通过CRISPANT技术，敲除斑马鱼hectd4基因第二个外显子上58bp片段，选育出hectd4基因缺失型斑马鱼，从而构建斑马鱼癫痫模型。本发明专利技术使用多个sgRNA靶向同一基因，可以最大限度地提高编辑效率，更有效进行基因编辑。本发明专利技术提供的斑马鱼癫痫模型为进一步开展HECTD4突变与癫痫发病机制的关系研究及筛选抗癫痫药物奠定了很好的基础。了很好的基础。了很好的基础。

【技术实现步骤摘要】
一种hectd4基因敲除斑马鱼癫痫模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因敲除
，具体涉及一种hectd4基因敲除斑马鱼癫痫模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前，CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。研究人员发现使用多个sgRNA靶向同一基因，可以最大限度地提高编辑效率，并将这种方法命名为CRISPANT技术。
[0003]在前期的癫痫患者的全外显子组测序(WES)结果中，筛选到可能引起癫痫疾病的基因HECTD4。斑马鱼作为脊椎动物，具有复杂的神经系统，遗传结构与人类相似，约70％的基因与人类共享，约84％的人类疾病已知相关基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种sgRNA组合，其特征在于，所述sgRNA组合是用于CRISPANT特异性敲除斑马鱼hectd4基因构建斑马鱼癫痫模型的sgRNA组合，其序列如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述的一种sgRNA组合，其特征在于，所述敲除斑马鱼hectd4基因是敲除斑马鱼hectd4基因第二个外显子上58bp片段，其序列如SEQ ID NO.7所示。3.一种斑马鱼癫痫模型，其特征在于，所述斑马鱼癫痫模型是利用权利要求1所述的sgRNA组合敲除斑马鱼hectd4基因来构建。4.根据权利要求3所述的一种斑马鱼癫痫模型，其特征在于，所述敲除斑马鱼hectd4基因是敲除斑马鱼hectd4基因第二个外显子上58bp片段，其序列如SEQ ID NO.7所示。5.一种构建斑马鱼癫痫模型的试剂盒，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.4所示的sgRNA组合。6.根据权利要求5所述的一种构建斑马鱼癫痫模型的试剂盒，其特征在于，还包括Cas9蛋白。7.权利要求1所述的sgRNA组合在构建斑马鱼...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘乐，刘静，
申请(专利权)人：浙江赛微思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：