一种MYB基因上游34kb区域转录的lncRNA、表达载体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种MYB基因上游34kb区域转录的lncRNA，其cDNA核苷酸序列包括SEQ ID No.1所示的序列。该lncRNA能够调控MYB基因的表达及白血病细胞的增殖。过表达会促进MYB基因表达及白血病细胞的增殖；通过抑制该lncRNA的表达，能够降低MYB基因表达及抑制白血病细胞的增殖。因此，这种MYB上游34kb区域转录的lncRNA可以为分子标志物或靶点应用于肿瘤尤其是白血病的检测治疗和药物开发，具有深远的临床意义。具有深远的临床意义。具有深远的临床意义。

【技术实现步骤摘要】
一种MYB基因上游34kb区域转录的lncRNA、表达载体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体为一种原癌基因MYB基因上游lncRNA及其应用。

技术介绍

[0002]白血病是一种起源于造血干细胞的恶性增殖疾病，其特征是骨髓异常分化的造血细胞克隆性扩张，白血病细胞因为增殖失控、分化障碍、凋亡受阻等机制在骨髓和其他造血组织中大量增殖累积，并浸润其他非造血组织和器官，同时抑制正常造血功能。
[0003]目前白血病的临床治疗方法主要以联合化疗和干细胞移植为主，尽管在一定程度能够缓解发病进程，但是总的来说，白血病患者的总生存率仍然较低，且白血病易复发，这也增加了治疗难度。因此，寻找早期而敏感的治疗靶点，并探索有效的治疗方法对有效控制白血病具有重要的意义。
[0004]原癌基因MYB是一种重要的转录因子，在造血细胞的增殖和分化中发挥重要作用。研究表明，在人的白血病癌细胞中MYB的表达显著升高。MYB能够直接调控多种与肿瘤转移相关的基因表达水平，对癌细胞侵袭、增殖均产生影响，参与白血病的发生、发展以及转移等过程。
[0005]长链非编码RNA(long non
‑
coding RNA，lncRNA)是指长度大于200nt，没有编码能力的非编码RNA，lncRNA可以通过顺式(in cis)或反式(in trans)作用的方式调节RNA代谢、蛋白质功能活性、组蛋白修饰及染色质重塑等。近年来，长链非编码RNA越来越受到学者们的关注，已被证实，lncRNA参与多种肿瘤的发生发展过程，但lncRNA在白血病中的研究仍处于起步阶段。
[0006]已有研究发现，MYB的转录受其上游区域的非编码区调控，MYB启动子可以与MYB上游远端区域DNA序列形成DNA
‑
loop，并募集转录因子Hoxa9、PU.1和结构蛋白等远端调控MYB的表达。而MYB上游区域转录生成的lncRNA对MYB基因的作用以及对白血病细胞增殖的影响研究目前尚不明确。

技术实现思路

[0007]针对目前白血病检测和治疗的缺陷和不足，本专利技术提供了一种lncRNA MYB
‑
34KS，由MYB基因上游间区转录生成，对MYB的表达具有调控作用，并调控白血病细胞的增殖，可作为白血病检测的标志物和治疗的靶点。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]一种MYB上游34kb区域转录的lncRNA，简称为MYB
‑
34KS，位于人第六号染色体的MYB基因正义链上，其cDNA核苷酸序列包含如SEQ ID NO.1所示的序列。
[0010]优选的，lncRNA MYB
‑
34KS的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0011]SEQ ID No.1:acacactttataattccatattgttccctcatgctagttcctctttgggaaatgttctgagtttctctcccatatgcttctactagtgccaacccagtatctcctcctctgtgaagtccttcatttgtgatcctttctcattcgtctgtgatccctgatacacactgttagcataggactgaccacaatatatcaacattcattataa
acaacaactccctgactactggtctcctcaagtacaagaatctctgttactatttatctctgtatcaccaatatttagcactgatgataatgaatgagtaagtatacaagacagtcataacgtgatatagaaaagtctcaataaattcccatgacattgaagggaaagtgactattttttctgagtcaggcgtcaattgggttaacagtggttgaaagtggagcaaaaaagtagggtagcaataaagttaagaacacaagcagaatccttgcgtaagaacaaattcagaaagcagtacataccttccaaatacagataggtaaaatagaaaaagaagaagagaggaaggagaaggaggagaagatgaaggagaagaaaagggagaagaagatgaagacaacatgaggaaaactgtgaaggaaacagagacatgaggagagtatttgtatttacattctgtagctaaaaccattttcaaatgaagtcgtattgttcttacaattaaggaaagtcaatttcaggaattgtttataaaccaattcctctacattacagagataagaggttcaaattgccaaatgtatgttatggaaggaaaaacaaaaacaa
[0012]可通过RACE技术获取lncRNA MYB
‑
34KS cDNA全长序列，步骤包括：
[0013](1)以总RNA为模板，合成RACE第一链cDNA；
[0014](2)以RACE第一链cDNA为模板，进行第一轮RACE
‑
PCR；所采用的引物为通用引物UPM和5
′‑
末端或3
′‑
末端基因特异性引物；
[0015]第一轮RACE
‑
PCR的5
′‑
末端基因特异性引物序列为5
′
RACE
‑
MYB
‑
34KS
‑
GSP：5
′‑
accactgttaacccaattgacgcctgact
‑3′
；
[0016]第一轮RACE
‑
PCR的3
′‑
末端基因特异性引物序列为3
′
RACE
‑
MYB
‑
34KS
‑
GSP：5
′‑
ccctgatacacactgttagcataggactg
‑3′
；
[0017](3)以第一轮RACE
‑
PCR产物为模板，进行第二轮RACE
‑
PCR；所采用的引物为通用引物UPM和5
′‑
末端或3
′‑
末端基因特异性引物；
[0018]第二轮RACE
‑
PCR的5
′‑
末端基因特异性引物序列为5
′
RACE
‑
MYB
‑
34KS
‑
NGSP：5
′‑
ggagatactgggttggcactagtagaag
‑3′
；
[0019]第二轮RACE
‑
PCR的3
′‑
末端基因特异性引物序列为3
′
RACE
‑
MYB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MYB上游34kb区域转录的lncRNA或者其cDNA，其特征在于，其cDNA核苷酸序列包括SEQ ID No.1所示的序列。2.权利要求1所述MYB上游34kb区域转录的lncRNA或者其cDNA，其特征在于，其cDNA核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。3.用于扩增权利要求1或2所述lncRNA 或者其cDNA序列的引物，其特征在于，上游引物核苷酸序列包括如SEQ ID No.2所示的序列，下游引物核苷酸序列包括如SEQ ID No.3所示的序列。4.权利要求3所述的引物，其特征在于，上游引物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。5.一种检测权利要求1或2所述MYB上游34kb区域转录的lncRNA的表达丰度或者...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩兵社，张俊芳，王玉成，李梦佳，张泽辉，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：