一种新型抗新冠病毒复合物的组成及其在防治冠状病毒感染疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体发明专利技术了一种新型抗新冠病毒双功能一体化复合物。该新型抗新冠病毒复合物由重组的抗冠状病毒的纳米抗体偶联脂质体构成，脂质体包裹免疫激动剂，并且报道了其制备工艺方法及在制备抗冠状病毒药物中的应用。该新型抗新冠病毒复合物可以有效激活诱导I型干扰素信号通路，有效中和新冠病毒、抑制冠状病毒复制及降低病毒性炎症。该新型抗新冠病毒复合物在预防和治疗光谱冠状病毒药物中有潜在应用前景。冠状病毒药物中有潜在应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种新型抗新冠病毒复合物的组成及其在防治冠状病毒感染疾病药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一类新型抗新冠病毒复合物的组成、制备方法及其在防治冠状病毒疾病药物中的应用。

技术介绍

[0002]目前对于新型冠状病毒所致疾病并没有特效治疗方法。新冠肺炎疫情发生以来，最受关注的焦点之一，就是可能对新冠肺炎有效的治疗方法与特效药物。但是，到目前为止，尚没有发现治疗新型冠状肺炎(COVID-19)的特效药物，也没有预防性药物和疫苗上市。人们迫切需要高效的药物来治愈COVID-19。根据目前的临床结果，可重新利用的小分子药物缺乏特异性，疗效受到影响。血浆治疗虽然表现出了一定的疗效，但恢复期血浆的供应受到限制。血浆治疗的有效成分是靶向性中和抗体。抗体药物作为一种生物制剂，已成功应用于HIV、埃博拉病毒、MERS-CoV冠状病毒等病毒的治疗。然而，要开发出适合临床使用的中和抗体，往往需要花费数月甚至数年的时间。尽管部分药物显示初步有效，但最终还有待临床结果。创新特效抗冠状病毒药物和疫苗的研发迫在眉睫！
[0003]最近的研究报道，科学家成功地从恢复期血浆中鉴定出多种针对新型冠状病毒SARS-CoV-2(导致呼吸道疾病COVID-19)的高强效中和抗体。由人体免疫系统产生的中和抗体可以有效防止病毒感染细胞。来自动物研究的新结果显示，这些中和抗体为COVID-19提供了一种潜在的治疗方法，以及短期预防手段。这标志着抵抗COVID-19疫情的一个重要里程碑。另外，从羊驼血液中也分离出多种抗冠状病毒的抗体，筛选出的纳米抗体可以交叉中和多种冠状病毒刺突蛋白，包括新冠病毒刺突蛋白。但是，这些中和抗体能否作为抗新冠病毒肺炎药物还要有待临床验证研究。
[0004]人体抵御病原体的第一道防线是先天性免疫系统，这一免疫系统由能够抵御非特异性病毒感染的细胞和其他机制组成，即以一种通用方式来对入侵的病毒做出识别和反应。人体抗病毒的第二道防线是细胞免疫，包括了称为T细胞的免疫细胞。人体中的细胞不断地将其内部蛋白质的片断展示在细胞表面(抗原呈递) 供T细胞来进行检查，一旦T细胞识别出可能的病毒片断，那么对应的细胞就会由T杀手细胞和病毒特异性T细胞扩增所消灭。诸如巨噬细胞在内的一些细胞专门负责抗原呈递。干扰素(IFN)是病毒感染之后由肌体所产生的一种激素，它能够通过杀死受感染细胞及其邻近细胞来逐步阻止病毒的复制。干扰素为细胞信号传送蛋白，是具有抗病毒功能的宿主特异性糖蛋白。细胞感染病毒后分泌的干扰素能够与周围未感染的细胞上的相关受体作用，促使这些细胞合成抗病毒蛋白防止进一步的感染，从而起到抗病毒的作用。
[0005]在感染的哺乳动物细胞中病毒DNA能通过刺激干扰素分泌诱导内源强有力的免疫应答。内质网(ER)受体蛋白(STING)对胞质DNA的免疫应答是必需的因素。研究表明，环化cGMP-AMP二核苷酸合成酶(cGAS)在结合DNA后的活化条件下，内源性地催化cGAMP的合成。cGAMP作为第二信使通过 STING刺激干扰素INF-I的感应，介导TBK1和IRF-3的活化，进而启
动I型干扰素(INF-β)基因的转录。STING是内质网的跨膜蛋白，内质网上具有一种 ENPP1的水解酶。ENPP1水解酶可以降解STING的激动剂2
’3’-
cGAMP。因此，阻止STING激动剂cGAMP被ENPP1水解是保持免疫激动剂有效寿命和药效的必然选择。作为一种药物载体，纳米脂质体颗粒在延长药物半衰期，增强药效，靶向定点给药等方面具有广阔的应用前景。但是，如何制备稳定性好、包封率高、易于逃过细胞保护屏障的靶向纳米脂质体仍然是一个挑战。单克隆抗体等免疫靶向脂质体是一个很好的发展方向，但是，单克隆抗体有分子量大、制备成本昂贵且难于量产、免疫反应等问题，也形成了严峻挑战。如何选择分子量小，组织穿透能力好，特异性强，亲和力高，对人的免疫原性弱，避免Fc段引起的补体反应的抗体作为靶向脂质体的组成部分是科学家的理想目标。另外，容易制备，可以用原核系统发酵罐高效表达，节省制备成本，可以大规模量产，也是我们优选考虑的重要因素。
[0006]经过多个方面因素的考虑和研究筛选，我们优选制备了一种新型双功能一体化复合物，该一体化复合物包含天然免疫激活剂和能中和新冠病毒刺突蛋白的多价纳米抗体，该一体化的复合物具有双管齐下地抗新冠病毒功能。该类双功能抗新冠病毒复合物具有集多种优势的显著特征。探索研究发现该一体化复合物具有比单一免疫激活剂或新冠病毒中和纳米抗体显著提高的抗病毒活性，在制备防治新冠病毒肺炎药物方面有潜在应用价值。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种新型抗新冠病毒的双功能一体化复合物及其制备方法。该新型抗新冠病毒复合物可显著诱发抗新冠病毒的特异免疫功能，显著有效地中和新冠病毒及有效抑制冠状病毒复制和病毒性炎症。
[0008]该新型抗新冠病毒双功能一体化复合物由重组的抗新冠病毒纳米抗体偶联脂质体与免疫激动剂构成，所述免疫激动剂包封于重组纳米抗体偶联的脂质体中。
[0009]免疫激动剂为天然免疫通路(cGAS-STING-cGAMP-IRF3通路)STING 的激动剂，既环二核苷酸2
’3’-
cGAMP或其衍生物。
[0010]抗新冠病毒纳米抗体是指，能与新冠病毒刺突S蛋白紧密结合，且靶向中和新冠病毒的羊驼纳米抗体或抗新冠病毒的单克隆抗体的可变区结构域。
[0011]优选地，靶向新冠病毒刺突S蛋白的纳米抗体为SARS2-VHH,其氨基酸序列为：SEQ ID NO:1。
[0012][0013]上述新型抗新冠病毒双功能一体化复合物的制备方法，主要包括如下步骤：
[0014](1)运用原核表达载体，在大肠杆菌中重组表达、纯化抗新冠病毒S 蛋白的纳米抗体SARS2-VHH；
[0015](2)对重组抗新冠病毒S蛋白的纳米抗体SARS2-VHH进行巯基化；
[0016](3)巯基化的重组纳米抗体SARS2-VHH与脂质体化学键偶联融合，进而包封免疫激动剂。
[0017]上述新型抗新冠病毒复合物在制备预防和/或治疗冠状病毒感染疾病药物中的应用。
[0018]优选地，冠状病毒感染疾病包括但不限于人或动物感染冠状病毒引起的病毒性肺炎/呼吸道炎症、病毒性肾炎、病毒性脑炎、病毒性肠炎或病毒性肝炎。
[0019]抗新冠病毒复合物药物可单独制备成不同规格的单位制剂或通过药学上可接受的载体制备成药物制剂，包括但不限于静脉注射制剂、鼻腔滴注制剂、静脉滴注制剂、肌肉注射制剂、皮下注射制剂或口服制剂；口服制剂包括但不限于胶囊、片剂或颗粒剂。
[0020]本专利技术综合研究优化天然免疫激动剂、脂质体的作用和优点，亲和且能中和新冠病毒刺突蛋白的纳米抗体，优化组成一种新型抗新冠病毒的双功能一体化复合物。
[0021]本专利技术研究表明，新型抗新冠病毒复合物在预防和治疗冠状病毒药物中有潜在应用前景，该类新型复合物可将新型天然免疫激动剂及靶向中和新本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型抗新冠病毒的双功能一体化复合物，其特征在于：由重组的抗新冠病毒的羊驼纳米抗体偶联脂质体包裹的免疫激动剂构成，所述免疫激动剂包封于重组纳米抗体偶联的脂质体中。所述免疫激动剂为STING的激动剂，既环二核苷酸2
’3’-
cGAMP或其衍生物；抗新冠病毒的重组羊驼纳米抗体，其特征为，能与新冠病毒刺突S蛋白紧密结合，且靶向中和新冠病毒的纳米抗体或抗新冠病毒的单克隆抗体的可变区结构域。优选地，靶向新冠病毒刺突S蛋白的纳米抗体为SARS2-VHH,其氨基酸序列为：QVQLQESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRTFSEYAMGWFRQAPGKEREFVATISWSGGSTYYTDSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPDDTAVYYCAAAGLGTVVSEWDYDYYLDYWGQGTQVTVSS。2.根据权利要求1所述的新型抗新冠病毒双功能...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭相石，裴建武，张跃茹，向道凤，
申请(专利权)人：杭州星鳌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：