载物脂质体的多靶点复合体及含其的载药平台与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种载物脂质体的多靶点复合体及含其的载药平台与应用。所述载物脂质体的多靶点复合体包含：干扰素基因刺激因子(STING)激动剂、免疫检查点抑制剂、外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ENPP1)抑制剂和脂质体；所述免疫检查点抑制剂靶向至少两个不同的免疫检查点抗原表位；所述STING激动剂与所述ENPP1抑制剂的质量比为10:(2.5～10)，并且不为10:10；所述STING激动剂与所述免疫检查点抑制剂的质量比为10:(2.5～100)，并且不为10:100；具体见正文。本发明专利技术的载物脂质体的多靶点复合体共载STING激动剂、ENPP1抑制剂和免疫检查点抑制剂，提高了多靶点复合体的抗肿瘤活性，具备广阔的抗肿瘤药物设计的应用前景和较高的临床应用价值。床应用价值。

【技术实现步骤摘要】
载物脂质体的多靶点复合体及含其的载药平台与应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种载物脂质体的多靶点复合体及含其的载药平台与应用。

技术介绍

[0002]肿瘤是一类严重危害人类生命健康的重大疾病。免疫治疗是近几年发展最为迅速的治疗肿瘤的手段，可称作肿瘤治疗的一场革命。免疫治疗利用人体自身的免疫功能，对肿瘤细胞进行攻击，控制肿瘤的发展及转移。但是，由于肿瘤在癌变之前难以被免疫监视系统发现，而在肿瘤发生发展中，免疫功能可能通过免疫检查点受到抑制，发生免疫逃逸。因此，利用自身免疫抗肿瘤的两个关键点是：(1)通过免疫通路激活剂/激动剂，增强天然免疫能力；(2)破坏免疫检查点对免疫细胞的抑制，防止免疫逃逸。肿瘤的免疫治疗包括免疫检查点抑制剂单克隆抗体药物、细胞免疫治疗等。
[0003]STING(干扰素基因刺激因子，stimulator of interferon genes)，也称作MITA、TMEM73、ERIS、NET23、MPYS等，是一种内质网(ER)受体蛋白，激活STING可以增强先天免疫系统抗肿瘤或抗感染的能力。在感染的哺乳动物细胞中微生物和病毒DNA能通过刺激干扰素分泌诱导内源强有力的免疫应答。先天免疫STING通路激动剂cGAMP在抗肿瘤方面的药效已被证实。通过免疫激活或加强先天免疫通路，激活树突状细胞等免疫细胞，进而诱导激活细胞毒性T细胞杀肿瘤细胞。
[0004]内质网受体蛋白(例如STING)对胞质DNA的免疫应答是必需的因素。研究表明，环化cGMP
‑/>AMP二核苷酸合成酶(cGAS)在结合DNA后的活化条件下，内源性地催化环二核苷酸cGAMP的合成。cGAMP作为第二信使通过STING刺激干扰素IFN
‑
I的响应，介导TBK1和IRF
‑
3的活化，进而启动I型干扰素IFN
‑
β基因的转录。STING是内质网的跨膜蛋白，内质网上具有一种外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(Ectonucleotide pyrophosphatase/phos
‑
phodiesterase1，ENPP1)的水解酶。ENPP1在还原状态下以单体形式存在，分子量为115kd；在非还原情况下以二聚体形式存在，分子量为230kd。ENPP1是跨膜蛋白，位于细胞膜或者内质网上，ENPP1可以分泌到胞外，以可溶性的N端裂解的单体形式存在。ENPP1不但可以水解天然核苷酸中的磷酸二酯键，还可以水解环二核苷酸cGAMP。将小鼠的ENPP1基因敲除，cGAMP的半衰期有很大的提高。cGAMP会通过某种特殊的方式离开病毒细胞或者癌细胞转移到其他的宿主细胞中，然后通过激活宿主细胞的STING来诱导I型干扰素的表达。cGAMP会被细胞外游离的ENPP1降解。因此，阻止STING激动剂cGAMP被ENPP1水解是保持免疫激动剂有效寿命和药效的必然选择，高效的ENPP1抑制剂对于提高肿瘤免疫治疗效果有着重要的作用。
[0005]纳米抗体(nanobody)是一种单域抗体，天然缺失重链恒定区1(CH1)和轻链，具有结构稳定、分子小、溶解性好、耐受各类不良环境、易于人源化等优点，但是不同的纳米抗体有其特异性，在药物中的应用大多仍在临床研究中。
[0006]作为一种药物载体，纳米脂质体在延长药物半衰期、增强药效、靶向定点给药等方
面具有广阔的应用前景。但是，如何制备稳定性好、包封率高、易于逃过细胞保护屏障进入细胞的靶向脂质体仍然是一个挑战。为了进一步提高药物的精准靶向性和利用率，单克隆抗体等免疫靶向脂质体可以靶向免疫细胞和肿瘤微环境，但是，单克隆抗体有分子量大、制备成本昂贵且难于量产、免疫反应等问题，形成了严峻挑战。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中缺少稳定性好、包封率高、药效好的可靶向定点给药的载物脂质体的缺陷，提供一种载物脂质体的多靶点复合体及含其的载药平台与应用。本专利技术的载物脂质体的多靶点复合体共载STING激动剂、ENPP1抑制剂和免疫检查点抑制剂，能快速精准靶向肿瘤微环境，将主动免疫激活剂和防止免疫逃逸的阻断剂抗体相结合，提高抗肿瘤活性。
[0008]专利技术人研究发现，当脂质体外侧连接抗体时，脂质体在肿瘤微环境内可作为肿瘤细胞与免疫细胞的衔接器，促进肿瘤细胞与免疫细胞的相互作用。因此，专利技术人尝试结合免疫检查点抑制剂与免疫通路激动剂、以及肿瘤靶向试剂，发现结合后的脂质体可以有效解除肿瘤微环境内的免疫抑制，阻断免疫逃逸，从而增强靶向作用和免疫检查点抑制剂的抑制作用，并进一步可以协同增强抗肿瘤效应。但是一味抑制免疫检查点、活化免疫通路导致细胞因子风暴等免疫反应，为了平衡多种抑制剂和受体间的相互作用，专利技术人增加相应的抑制剂并通过大量复杂的实验获得了可以有效提高抗肿瘤作用且不产生免疫风暴的载物脂质体的多靶点复合体。为了进一步优化多靶点复合体的性能，选择分子量小、组织穿透能力好、特异性强、亲和力高、对人的免疫原性弱、避免Fc段引起的补体反应的抗体作为多靶点复合体的组成部分，专利技术人对现有抗体或其抗原结合片段进行了大量筛选，发现纳米抗体具有较强的表位识别与结合能力，体积小，使其能够高密度地牢固结合在固相载体上捕捉微量抗原，有效提高了多靶点复合体的结合活性。
[0009]本专利技术通过以下技术方案解决上述技术问题：
[0010]本专利技术的第一方面提供一种载物脂质体的多靶点复合体，其包含：干扰素基因刺激因子(STING)激动剂、免疫检查点抑制剂、外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ENPP1)抑制剂和脂质体；其中，所述脂质体为具有同心脂质双层膜和亲水性内核的单室封闭囊泡，所述STING激动剂位于所述亲水性内核中，所述外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶抑制剂位于所述同心脂质双层膜的疏水夹层中，所述免疫检查点抑制剂与所述脂质体的外表面连接；所述免疫检查点抑制剂靶向至少两个不同的免疫检查点抗原表位；
[0011]所述STING激动剂与所述ENPP1抑制剂的质量比为10:(2.5～10)，并且不为10:10；所述STING激动剂与所述免疫检查点抑制剂的质量比为10:(2.5～100)，并且不为10:100。
[0012]在本专利技术一些较佳的实施方案中，所述STING激动剂与所述ENPP1抑制剂的质量比为10:(2.5～5)；所述STING激动剂与所述免疫检查点抑制剂的质量比为10:(2.5～50)。
[0013]在本专利技术一些更佳的实施方案中，所述STING激动剂与所述免疫检查点抑制剂的质量比为10:(5～50)，进一步更佳地为10:(5～10)。
[0014]在本专利技术一些较佳的实施方案中，所述STING激动剂为cGAS
‑
STING
‑
cGAMP
‑
IRF3免疫通路的激动剂。
[0015]在本专利技术一些更佳的实施方案中，所述激动剂选自环二核苷酸类、氨基苯并咪唑
类、呫吨酮类和吖啶酮类、苯并塞吩类、苯并二茂类或其组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种载物脂质体的多靶点复合体，其特征在于，其包含：干扰素基因刺激因子(STING)激动剂、免疫检查点抑制剂、外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(ENPP1)抑制剂和脂质体；其中，所述脂质体为具有同心脂质双层膜和亲水性内核的单室封闭囊泡，所述STING激动剂位于所述亲水性内核中，所述外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶抑制剂位于所述同心脂质双层膜的疏水夹层中，所述免疫检查点抑制剂与所述脂质体的外表面连接；所述免疫检查点抑制剂靶向至少两个不同的免疫检查点抗原表位；所述STING激动剂与所述ENPP1抑制剂的质量比为10:(2.5～10)，并且不为10:10；所述STING激动剂与所述免疫检查点抑制剂的质量比为10:(2.5～100)，并且不为10:100。2.如权利要求1所述的多靶点复合体，其特征在于，所述STING激动剂与所述ENPP1抑制剂的质量比为10:(2.5～5)，所述STING激动剂与所述免疫检查点抑制剂的质量比为10:(5～80)，例如为10:50或10:10；和/或，所述STING激动剂为cGAS
‑
STING
‑
cGAMP
‑
IRF3免疫通路的激动剂；和/或，所述免疫检查点抑制剂为抗免疫检查点的抗体或其抗原结合片段；较佳地，和/或，所述激动剂选自环二核苷酸类、氨基苯并咪唑类、呫吨酮类和吖啶酮类、苯并塞吩类、苯并二茂类或其组合；和/或，所述免疫检查点选自PD
‑
1/PD
‑
L1、CD47、VEGF、PVRIG、TIGIT、NKG2A、LILRB4、LILRB2、LAG
‑
3、OX40、CTLA
‑
4、TIM
‑
3、VISTA、ILDR2、KIR、MHCII、GITR和4
‑
1BB中的一种或多种；和/或，所述免疫检查点抑制剂为抗免疫检查点的抗体；更佳地，所述激动剂为环二核苷酸或环二核苷酸金属配合物，例如为环二核苷酸2
’3’‑
cGAMP；和/或，所述免疫检查点选自PD
‑
1/PD
‑
L1和CD47；和/或，所述抗体为纳米抗体(VHH)。3.如权利要求1所述的多靶点复合体，其特征在于，所述ENPP1抑制剂为4(3H)
‑
喹唑啉酮衍生物；优选地为2
‑
[(4
‑
甲基
‑
(噻唑并[4,5
‑
B]吡啶)
‑2‑
硫代)甲基]
‑7‑
氟
‑
喹唑啉
‑
4(3H)
‑
酮、2
‑
[(5
‑
甲氧基
‑
(咪唑并[4,5
‑
B]吡啶)
‑2‑
硫代)甲基]
‑7‑
氟
‑
喹唑啉
‑
4(3H)
‑
酮或2
‑
[(5
‑
氯
‑
(咪唑并[4,5
‑
B]吡啶)
‑2‑
硫代)甲基]
‑7‑
甲酸甲酯
‑
喹唑啉
‑
4(3H)
‑
酮；和/或，所述脂质体包含下述原料：磷脂和胆固醇；所述磷脂选自氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺
‑
聚乙二醇2000
‑
马来酰乙醇胺、1,2
‑
二硬脂酰

【专利技术属性】
技术研发人员：谭相石，向道凤，谭瀛轩，
申请(专利权)人：杭州星鳌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：