用于溶酶体贮积症的经鼻基因递送和口服肉桂酸、油酰胺或吉非贝齐的组合制造技术

本文提供了用于治疗溶酶体贮积症的方法，包括给药编码溶酶体酶的基因和药剂。通过共同给药将基因疗法与药物组合物组合，不仅进一步增强了每种单独疗法的效果，而且由于每种单独组合物的作用机制不同，还提供了多方面的治疗方法。方法。方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于溶酶体贮积症的经鼻基因递送和口服肉桂酸、油酰胺或吉非贝齐的组合
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年3月22日提交的美国临时专利申请第62/822,310号的优先权，其通过引用全文纳入本文。


[0003]本专利技术涉及将编码溶酶体酶的基因与用于治疗溶酶体贮积症(例如晚期婴儿巴顿病和克拉伯病)的药剂组合给药的方法。
[0004]背景
[0005]溶酶体是包含多种酶的膜结合细胞器，这些酶负责脂质、蛋白质、碳水化合物和核酸的降解(De Duve和Wattiaux，1966)。几乎任何这些成分的缺陷和缺损都会导致未消化和/或部分消化的物质在溶酶体中积累，从而形成许多溶酶体贮积症(LSD)的基础(De Duve和Wattiaux，1966，Perez
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Sala等，2009)，包括巴顿病(婴儿、晚期婴儿和青少年神经元蜡样脂褐质沉积症)，克拉伯病和泰
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萨二氏病。
[0006]神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)是一组神经退行性疾病，主要由典型的常染色体隐性遗传溶酶体贮积症组成。NCL的特征可包括临床表现，如进行性精神衰退、认知障碍、视力障碍、癫痫发作和运动功能恶化，并伴有组织学发现，如神经元或其他细胞类型中自发荧光贮积材料的积累(Hachiya等，2006)。根据发病年龄、累积贮积材料中的超微结构变化和每种特定疾病类型特有的遗传改变，NCL被细分为几组(1类
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10类)(Lane等，1996和Mole等，2005)。/>[0007]婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症(INCL)在大约18个月大的儿童中出现，其症状包括失明、认知缺陷、癫痫发作和早夭(Hawkins
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Salsbury等，2013)。编码溶酶体酶棕榈酰蛋白硫酯酶
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1(PPT1)的clnl基因的缺陷导致各种自发荧光材料基质(例如脂褐质)在中枢神经系统和组织中积累(同上)。随后发生的神经元变性、皮质变薄和脑萎缩导致与未受影响的儿童相比脑质量减少约50％(同上)。目前没有可用的治疗方法。
[0008]晚期婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症(詹
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比二氏病(Jansky
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Bielschowsky disease)，LINCL，2型)通常在2
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4岁出现症状，进展迅速并在8
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15岁死亡，这是由于神经元和其他细胞数目急剧减少(Lane等，1996和Sleat等，1997)。LINCL与cln2基因突变有关，该基因总长度为6.65kb，13个外显子和12个内含子，定位到染色体1 1p15.5。cln2基因编码溶酶体三肽基三肽酶I(TPP
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I或胃蛋白酶不敏感蛋白酶)，一种46KD的蛋白质，其在溶酶体隔室的酸性环境中发挥作用，以从蛋白质的氨基末端去除三肽(Goebel 1995和Vines等，1999)。在cln2基因的该突变导致TPP1蛋白质的功能缺陷和/或丧失，这导致溶酶体内积累称为蜡样
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脂褐质的自发荧光脂色素(Goebel，1995)。目前没有针对这种疾病的可用既定治疗或药物，所有方法只是支持性的或对症的，表明需要新的治疗方法(Chang et al.，2008)。然而，cln2突变有不同变体，且有报道称在LINCL患者中发现了残余TPP
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I活性，这表明在患有LINCL的患者中一定有一些剩余的正常cln2基因的拷贝(Viglio等，2001和Walus
等，2010)。
[0009]另一种NCL是青少年巴顿病(青少年婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症(JINCL))。cln3基因编码可能与突触功能或退化有关的溶酶体跨膜蛋白(Dolisca等，2013)。与JINCL相关的cln3的突变特征为1.01kb缺失。与其他NCL的(特征)一样，JINCL的发病发生在4
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7岁的儿童中，症状包括逐渐失明、运动和认知退化、癫痫发作和早天。
[0010]克拉伯病是罕见的溶酶体贮积疾病，是基于髓鞘退化的鞘脂沉积病的结果。该疾病是由β
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半乳糖脑苷酯酶溶酶体贮积酶的突变导致的，从而积累细胞毒性代谢产物并破坏多种代谢途径，导致脱髓鞘。克拉伯病可以是婴儿型、晚期婴儿型、青少年型甚至成人型(Pavuluri等，2017)。
[0011]泰
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萨二氏病是hexa基因突变的结果，该基因编码β
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己糖胺酶，该酶负责将GM2神经节苷脂加工成GM3神经节苷脂(Dersh等，2016)。该酶由两个亚基构成，突变导致酶缺失或失活，导致GM2积累。在hexa基因中已经鉴定出超过100个与泰
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萨二氏病(同上)相关的突变。
[0012]由于各种基因突变与导致溶酶体贮积症的多种酶有关，基因治疗是一种潜在的治疗选择。然而，基因递送(特别是用于治疗神经退行性疾病的)存在将治疗基因递送到大脑的问题。基于病毒的基因递送机制是众所周知的，由于病毒的免疫原性差，可以通过使用腺相关病毒载体特异性地实现基因递送(Shaw等，2013)。此外，这些包含治疗基因的病毒载体的经鼻给药允许递送至大脑。经鼻递送被认为利用了“鼻
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脑”(N2B)运输系统(Djupesland，2013)，其中存在绕过血脑屏障直接递送到大脑的几种可能性。其包括被鼻粘膜吸收的药物排入鼻窦并最终排入颈动脉，在那里可能发生从静脉血到大脑的“逆流转移”。从嗅觉三叉神经和中枢神经系统(CNS)之间进入血管周围空间的淋巴引流也被假定为N2B运输的机制。
[0013]此外，基因治疗和口服药物治疗组合提供了另一种强大的治疗方法，可以增强单一疗法的作用。用于与基因治疗组合的两种候选药剂包括肉桂酸和油酰胺。肉桂酸是天然存在于植物中的具有神经保护作用的脂肪酸(Prorok等，2019)。已发现它参与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARa)的激活以保护帕金森病(Id)中的多巴胺能神经元。肉桂酸的各种衍生物也因其抗氧化特性和穿过血脑屏障的能力而闻名，这使得这些药物成为治疗神经退行性病症的理想选择(Roleira等，2010)。油酰胺是另一种具有广泛神经药理作用的脂肪酸。已知的内源性的脂肪酸油酰胺在脑脊液中首次发现(Nam等，2017)。它组成型存在于海马体中，在那里它作为PPARa配体并参与诱导睡眠(Pahan，2017)。因此，将肉桂酸作为天然药剂和油酰胺作为内源性脑配体与基因治疗组合的潜在用途是有益的。
[0014]此外，几项研究已经得出结论，神经炎症和细胞凋亡通路的诱导可归因于在大多数形式的NCL(包括LINCL)中的神经元损伤(Geraets等2016，Dhar等2002，Puranam等1997，Kohan等2011)。尽管炎症不是LINCL的起始因素，据信胶质细胞介导的持续炎症反应会导致疾病进展(Cooper等2015，Macauley等2014)。吉非贝齐(gemfibrozil)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗溶酶体贮积症的方法，包括将包含治疗有效量的编码溶酶体酶的基因的第一组合物，和包含治疗有效量的药剂的第二组合物给予有需要的对象。2.如权利要求1所述方法，其中所述第一组合物是鼻内给药。3.如权利要求1所述方法，其中所述基因被递送穿过血脑屏障。4.如权利要求1所述方法，其中所述第一组合物约每7
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30天给药一次。5.如权利要求1所述方法，其中所述第一组合物包括病毒载体，其包含所述编码溶酶体酶的基因。6.如权利要求6所述方法，其中所述病毒载体是腺相关病毒载体。7.如权利要求1所述方法，其中所述基因包括pptl、cln2、cln3、gale或hexa。8.如权利要求1所述方法，其中所述溶酶体酶包括棕榈酰
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蛋白质硫酯酶
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1、三肽基肽酶1、半乳糖基神经酰胺、巴顿病蛋白或己糖胺酶A。9.如权利要求7所述方法，其包括给药包含所述pptl基因的所述第一组合物，用于治疗包括婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症的所述溶酶体贮积症。10.如权利要求7所述方法，其包括给药包含所述cln2基因的所述第一组合物，用于治疗包括晚期婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症的所述溶酶体贮积症。11.如权利要求7所述方法，其包括给药包含所述cln3基因的所述第一组合物，用于治疗包括青少年神经元蜡样脂褐质沉积症的所述溶酶体贮积症。12.如权利要求7所述方法，其包括给药包含所述gale基因的所述第一组合物，用于治疗包括克拉伯病的所述溶酶体贮积症。13.如权利要求7所述方法，其包括给药包含所述hexa基因的所述第一组合物，用于治疗包括泰
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萨二氏病...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：拉什大学医学中心，
类型：发明
国别省市：