乌蛇止痒丸的指纹图谱构建和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种乌蛇止痒丸的指纹图谱构建和检测方法，构建方法包括如下步骤：取对照品和乌蛇止痒丸样品，分别制备对照品溶液和供试品溶液；采用高效液相色谱法对对照品溶液和供试品溶液进行检测，获得相应检测图谱和对照图谱；将检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，生成标准指纹图谱，参照对照图谱对检测图谱的色谱峰进行指认，获得具有标识性的乌蛇止痒丸的指纹图谱。本发明专利技术构建得到乌蛇止痒丸的指纹图谱，色谱峰丰富，且包含防风、蛇床子、关黄柏、牡丹皮、当归等多味药材的有效成分，能够更全面地反应乌蛇止痒丸的整体化学成分为乌蛇止痒丸的整体质量控制及评价提供了有效手段，提高了乌蛇止痒丸质量控制的准确性和全面性。的准确性和全面性。的准确性和全面性。

【技术实现步骤摘要】
乌蛇止痒丸的指纹图谱构建和检测方法


[0001]本专利技术属于医药
，特别是一种乌蛇止痒丸的指纹图谱构建和检测方法。

技术介绍

[0002]乌蛇止痒丸由乌梢蛇、防风、蛇床子、关黄柏、苍术、红参须、牡丹皮、蛇胆汁、苦参、人工牛黄和当归等11味中药组成，具有养血祛风、燥湿止痒的功效，主要用于风湿热邪蕴于肌肤所致的慢性荨麻疹、皮肤瘙痒症。作为一种中成药，乌蛇止痒丸成分复杂，一般通过多靶点、多作用途径起效。因此，基于多成分对乌蛇止痒丸进行质量控制尤为重要。
[0003]而传统的乌蛇止痒丸质量控制方法主要是基于单个成分进行的，例如已报道的乌蛇止痒丸的薄层色谱鉴别、盐酸小檗碱的HPLC含量测定方法(王蔚等发表的“RP
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HPLC法测定乌蛇止痒丸中小檗碱含量”以及2020版《中国药典》)以及苦参碱的薄层扫描含量测定方法(郑晓晴等发表的“乌蛇止痒丸质量标准的研究”)。
[0004]基于单个成分对乌蛇止痒丸进行质量检测不能全面反映乌蛇止痒丸的物质基础，进而无法实现对乌蛇止痒丸的整体质量控制及评价。因此，如何全面反映乌蛇止痒丸的物质基础从而为乌蛇止痒丸的整体质量控制和评价提供有效技术手段是目前亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]基于以上
技术介绍
，本专利技术的主要目的是提供一种乌蛇止痒丸的指纹图谱构建方法，采用该方法构建的指纹图谱结合多种化学成分的定量分析能够全面地反映乌蛇止痒丸整体化学成分，为乌蛇止痒丸的整体质量控制及评价提供了有效手段。本专利技术的另一目的是提供一种乌蛇止痒丸的检测方法。本专利技术的还一目的是提供一种乌蛇止痒丸的多成分含量检测方法。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0007]一种乌蛇止痒丸的指纹图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
[0008]取对照品和乌蛇止痒丸样品，分别制备对照品溶液和供试品溶液；采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，获得相应的检测图谱和对照图谱；将所述检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，生成标准指纹图谱，参照所述对照图谱对所述标准指纹图谱的色谱峰进行指认，获得乌蛇止痒丸的指纹图谱；
[0009]所述对照品包含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷F1、人参皂苷Rd、人参皂苷F2、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3、5
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甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷、升麻素、亥茅酚苷、蛇床子素、欧前胡素、花椒毒酚、花椒毒素、佛手柑内酯、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄柏碱、盐酸药根碱、丹皮酚、芍药苷、丹皮酚原苷、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、木兰花碱、掌叶防已碱、柠檬苦素、黄柏酮、胆红素和二氢欧山芹醇当归酸酯中的至少一种；
[0010]检测所采用条件包括：固定相采用C8色谱柱或者C18色谱柱，流动相A为水或者甲
酸水溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱。
[0011]在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相B的体积百分比为5％；5min～35min，所述流动相B的体积百分比由5％升高至20％；35min～40min，所述流动相B的体积百分比为20％；40min～48min，所述流动相B的体积百分比由20％升高至23％；48min～60min，所述流动相B的体积百分比由23％升高至35％；60min～90min，所述流动相B的体积百分比由35％升高至55％；90min～105min，所述流动相B的体积百分比由55％升高至95％；105min～115min，所述流动相B的体积百分比为95％。
[0012]在其中一个实施例中，所述固定相中填料的粒径为1.5μm～3μm。
[0013]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：波长为230nm～300nm。
[0014]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：流速为0.1mL/min～0.6mL/min。
[0015]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：柱温为20℃～50℃。
[0016]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：进样量为1μL～6μL。
[0017]在其中一个实施例中，制备所述对照品溶液采用的溶解溶剂含有甲醇。
[0018]在其中一个实施例中，制备所述供试品溶液的步骤包括：用提取溶剂对所述乌蛇止痒丸样品进行提取，收集提取液。
[0019]在其中一个实施例中，所述提取溶剂含甲醇的体积百分比为10％～100％。
[0020]在其中一个实施例中，提取的方式采用超声提取。
[0021]在其中一个实施例中，收集所述提取液的方式采用离心或者过滤。
[0022]在其中一个实施例中，所述特征图谱包含34个特征峰，其中，7号峰为升麻素苷，9号峰为升麻素、14号峰为5
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甲基维斯阿米醇苷，15号峰为药根碱，20号峰为小檗碱，21号峰为巴马汀，22号峰为丹皮酚，23号峰为佛手柑内酯，25号峰为花椒毒素，30号峰为花椒毒酚，32号峰为蛇床子素。
[0023]一种乌蛇止痒丸的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0024]取待测样品，制备供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述供试品溶液进行检测，并将所得检测图谱与如上构建获得的指纹图谱进行比较；
[0025]检测所采用条件包括：固定相采用C8色谱柱或者C18色谱柱，流动相A为水或者甲酸水溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱。
[0026]在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相B的体积百分比为5％；5min～35min，所述流动相B的体积百分比由5％升高至20％；35min～40min，所述流动相B的体积百分比为20％；40min～48min，所述流动相B的体积百分比由20％升高至23％；48min～60min，所述流动相B的体积百分比由23％升高至35％；60min～90min，所述流动相B的体积百分比由35％升高至55％；90min～105min，所述流动相B的体积百分比由55％升高至95％；105min～115min，所述保持流动相B的体积百分比为95％。
[0027]在其中一个实施例中，所述固定相中填料的粒径为1.5μm～3μm。
[0028]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：波长为230nm～300nm。
[0029]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：流速为0.1mL/min～0.6mL/min。
[0030]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：柱温为20℃～50℃。
[0031]在其中一个实施例中，检测所采用条件还包括：进样量为1μL～6μL。
[0032]在其中一个实施例中，制备所述供试品溶液的步骤包括：用提取溶剂对所述待测
样品进行提取，收集提取液。
[0033]在其本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乌蛇止痒丸的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：取对照品和乌蛇止痒丸样品，分别制备对照品溶液和供试品溶液；采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，获得相应的检测图谱和对照图谱；将所述检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，生成标准指纹图谱，参照所述对照图谱对所述标准指纹图谱的色谱峰进行指认，获得乌蛇止痒丸的指纹图谱；所述对照品包含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷F1、人参皂苷Rd、人参皂苷F2、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rg3、5
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甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷、升麻素、亥茅酚苷、蛇床子素、欧前胡素、花椒毒酚、花椒毒素、佛手柑内酯、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸黄柏碱、盐酸药根碱、丹皮酚、芍药苷、丹皮酚原苷、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、木兰花碱、掌叶防已碱、柠檬苦素、黄柏酮、胆红素和二氢欧山芹醇当归酸酯中的至少一种；检测所采用条件包括：固定相采用C8色谱柱或者C18色谱柱，流动相A为水或者甲酸水溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗脱。2.根据权利要求1所述的乌蛇止痒丸的指纹图谱的构建方法，其特征在于，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相B的体积百分比为5％；5min～35min，所述流动相B的体积百分比由5％升高至20％；35min～40min，所述流动相B的体积百分比为20％；40min～48min，所述流动相B的体积百分比由20％升高至23％；48min～60min，所述流动相B的体积百分比由23％升高至35％；60min～90min，所述流动相B的体积百分比由35％升高至55％；90min～105min，所述流动相B的体积百分比由55％升高至95％；105min～115min，所述流动相B的体积百分比为95％；或/和，所述固定相中填料的粒径为1.5μm～3μm；优选地，检测所采用条件还包括：波长为230nm～300nm；或/和，流速为0.1mL/min～0.6mL/min；或/和，柱温为20℃～50℃；或/和，进样量为1μL～6μL。3.根据权利要求1或者2所述的乌蛇止痒丸的指纹图谱的构建方法，其特征在于，制备所述对照品溶液采用的溶解溶剂含有甲醇；或/和，制备所述供试品溶液的步骤包括：用提取溶剂对所述乌蛇止痒丸样品进行提取，收集提取液；优选地，所述提取溶剂含甲醇的体积百分比为10％～100％；或/和，提取的方式采用超声提取；或/和，收集所述提取液的方式采用离心或者过滤。4.根据权利要求1或者2所述的乌蛇止痒丸的指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述特征图谱包含34个特征峰，其中，7号峰为升麻素苷，9号峰为升麻素、14号峰为5
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甲基维斯阿米醇苷，15号峰为药根碱，20号峰为小檗碱，21号峰为巴马汀，22号峰为丹皮酚，23号峰为佛手柑内酯，25号峰为花椒毒素，30号峰为花椒毒酚，32号峰为蛇床子素。5.一种乌蛇止痒丸的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：取待测样品，制备供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述供试品溶液进行检测，并将所得检测图谱与权利要求1至4任一项构建获得的指纹图谱进行比较；
检测所采用条件包括：固定相采用C8色谱柱或者C18色谱柱，流动相A为水或者甲酸水溶液，流动相B为乙腈，采用梯度洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：宁娜，雷婷，黄秋凌，何子昕，张春波，
申请(专利权)人：广州白云山中一药业有限公司，
类型：发明
国别省市：