一种用于动物源性食品中头孢类药物残留量的检测方法技术

本发明专利技术属于食品安全检测领域。技术方案是：一种用于动物源性产品中头孢类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：1)样品预处理：称取1

【技术实现步骤摘要】
一种用于动物源性食品中头孢类药物残留量的检测方法


[0001]本专利技术属于食品安全检测领域，尤其涉及一种动物源性食品中头孢类药物残留的检测方法。

技术介绍

[0002]头孢类药物属于广谱抗生素，杀菌力强，然而过量使用头孢类药物会对人体健康带来潜在的危害，对儿童、老人，特别是胎儿的影响更大，严重者会导致胎儿病变、畸形甚至死亡。且由于细菌产生耐药性和过敏反应等原因，世界各国对部分动物源性产品中头孢类药物残留量均提出了限量要求。现国家标准针对动物源性食品中头孢类化合物检测发布了一系列测定方法。但操作较为繁琐，耗时较长，且对于同时测定这6种头孢类药物的检测方法尚未建立。
[0003]分子印迹技术(molecularly imprinted technique,MIT)是制备对模板分子具有特异选择性识别能力的聚合物
‑
分子印迹聚合物的技术。该技术由于选择性较强、稳定性好、易于制备而受到广泛关注。石墨烯材料比表面积大及吸附能力优良，其原子以一种类似六角形蜂窝的形状排列，特殊的结构可以和其他有机化合物形成较强的π
‑
π共轭体系，使其具备极好的耐酸碱性能和化学稳定性。通过将石墨烯化学性质修饰，具有更广泛的应用。若将石墨烯与磁性纳米材料结合起来，使其强吸附性能和便捷的磁性分离相结合，形成一种新型的磁性石墨烯复合材料，最后在石墨烯磁性纳米粒子表面合成分子印迹壳层。该磁性分子印迹聚合物不仅具有分子印迹的优势，能够特异性识别和吸附目标分子，而且能在磁场的作用下快速分离，同时由于石墨烯粒径较小，具有较大的比表面积，吸附容量较大，在兽药残留检测中有着广泛的应用前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是克服动物源性产品中头孢类物质检测复杂的前处理手段，提供一种简便的头孢类药物残留的检测方法。该方法应具备选择性好、灵敏度高、检测时间短的特点，以提高检测效率。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]一种用于动物源性产品中头孢类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：
[0007]1)样品预处理：称取1
‑
2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸(EDTA)
ꢀ‑
磷酸盐缓冲溶液，50μL氯化胆碱邻甲苯酚混合溶液、0.05
‑
0.1g磁性石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入2mL 0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的头孢类药物残留解析出来,氮气吹干后用1.0mL水复溶、过0.22μm滤膜，获得待测液；
[0008]2)待测液的检测：运用HPLC
‑
MS/MS，在质谱ESI源下正离子模式下测定，外标法定量。
[0009]所述乙二胺四乙酸(EDTA)
‑
磷酸盐缓冲溶液，按如下方法制备：称取30.25g乙二胺
四乙酸二钠(Na2EDTA
·
2H2O)、6.0g磷酸二氢钠(NaH2PO4)，超纯水溶解，稀释至1 000mL，用磷酸氢二钠(Na2HPO4)调节pH值至8.5士0.1。
[0010]所述氯化胆碱邻甲苯酚混合溶液，按如下方法制备：氯化胆碱、邻甲苯酚、甲基叔丁基醚按0.1：0.2:1摩尔比例称取适量，在50℃恒定搅拌下加热，直至形成稳定的均匀透明的液体；将制备的混合溶液储存在密封的小瓶中并保存在干燥器中。
[0011]所述磁性石墨烯分子印迹聚合物，按如下方法制备：
[0012](1)石墨烯的修饰：将石墨烯粉末置于
‑
18℃冰箱中冷冻1小时，称取3g石墨烯粉末，缓慢加入200mL按3:1:0.1比例混合的浓硫酸H2SO4‑
浓硝酸HNO3‑
异丙醇混合溶液中，超声反应1h，在80℃下加热搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水涤至中性，于50℃真空干燥至恒重，研磨过筛得到修饰后石墨烯，备用；
[0013](2)溶剂热法制备磁性碳纳米管：称取5.410g三氯化铁(FeCl3·
6H2O)和3.475g硫酸亚铁(FeSO4·
7H2O)置于250mL平底烧瓶中加入100mL水，60℃下恒温磁力搅拌，全部溶解后，迅速加入25mL氨水、2g步骤(1)制得的修饰后石墨烯、5mL按1:1比例组成的乙二醇
‑
聚乙二醇混合溶剂中，60℃下恒温磁力搅拌2h得到黑色的混合溶液，用乙醇和水洗数次，于50℃真空干燥至恒重，获得磁性碳纳米管备用；
[0014](3)将步骤(2)得到的磁性碳纳米管、1mmol 7
‑
氨基去乙酰氨基头孢磺酸、5mmol甲基丙烯酸、5mmol丙烯酸、1mL二甲基亚砜、50mL按9:1比例组成的乙醇
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聚乙二醇混合溶液涡旋混合1min，再加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯、0.2g聚乙烯吡咯烷酮、0.010g 引发剂偶氮二异丁脐(AIBN)，通氮气密封，80℃水浴超声5h；反应结束后磁场分离除去上清液，其余材料用体积比为9：1的甲醇
‑
甲酸混合溶液反复超声洗涤，直至上清液经示差检测器检测不到模板分子为止，于50℃真空干燥至恒重，得到磁性石墨烯分子印迹聚合物。
[0015]超高效液相色谱
‑
三重四极杆质谱仪色谱条件为：
[0016]色谱柱：Agilent RRHD SB
‑
C18色谱柱(2.1
×
100mm,1.8μm))；流速：0.25mL/min；进样量：2μL；柱温：35℃。溶液A
‑
0.1％甲酸水溶液，B
‑
乙腈(含0.1％甲酸)，梯度洗脱程序：0min，10％B％，0min
‑
0.20min，11％B％，0.20min
‑
3.00min，11％
‑
90％B％， 3.00min
‑
4.00min，90％B％，4.10min
‑
11.00min，11％B％。
[0017]超高效液相色谱
‑
三重四极杆质谱仪质谱条件为：
[0018]离子源：电喷雾离子源(ESI源)。
[0019]喷雾压力：40psi。
[0020]干燥气流速：11L/min。
[0021]干燥气温度：300℃。
[0022]毛细管电压：3500V。
[0023]监测模式：正离子监测模式。监测离子对及相关电压参数设定见表1。
[0024]表1三重四极杆离子对及相关电压参数设定表
[0025][0026]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0027]1)将EDTA
‑
磷酸盐缓冲溶液与疏水性低共熔溶剂(氯化胆碱邻甲苯酚混合溶液)相结合作为提取溶剂，极大的提高了头孢类物质的提取率；同比对不同提取液的提取效果进行实验，数据见表2；
[0028]表2不同提取液提取效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于动物源性产品中头孢类药物残留的检测方法，依照如下步骤进行：1)样品预处理：称取1
‑
2g样品于50mL离心管中，加入10mL乙二胺四乙酸
‑
磷酸盐缓冲溶液，50μL氯化胆碱
‑
邻甲苯酚混合溶液、0.05
‑
0.1g磁性石墨烯分子印迹聚合物，涡旋、超声提取后，用磁力枪将磁性石墨烯分子印迹聚合物吸出；加入2mL 0.2％甲酸甲醇洗脱液将样品中的头孢类药物残留解析出来,氮气吹干后用1.0mL水复溶、过0.22μm滤膜，获得待测液；2)待测液的检测：运用高效液相色谱
‑
串联质谱法，在质谱ESI源下正离子模式下测定，外标法定量。2.根据权利要求1所述的用于动物源性产品中头孢类药物残留的检测方法，其特征在于：所述乙二胺四乙酸
‑
磷酸盐缓冲溶液，按如下方法制备：称取30.25g乙二胺四乙酸二钠、6.0g磷酸氢二钠，超纯水溶解，稀释至1000mL，用磷酸二氢钠调节pH值至8.5士0.1。3.根据权利要求1所述的用于动物源性产品中头孢类药物残留的检测方法，其特征在于：所述氯化胆碱
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邻甲苯酚混合溶液，按如下方法制备：氯化胆碱、邻甲苯酚、甲基叔丁基醚按0.1：0.2:1摩尔比例称取适量，在50℃恒定搅拌下加热，直至形成稳定的均匀透明的液体；将制备的混合溶液储存在密封的小瓶中并保存在干燥器中。4.根据权利要求1所述的用于动物源性产品中头孢类药物残留的检测方法，其特征在于：所述磁性石墨烯分子印迹聚合物，按如下方法制备：(1)石墨烯的修饰：将石墨烯粉末置于
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18℃冰箱中冷冻1小时，称取3g石墨烯粉末，缓慢加入200mL按3:1:0.1比例混合的浓硫酸
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浓硝酸
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异丙醇混合溶液中，超声反应1h，在80℃下加热搅拌反应2h，抽滤，用蒸馏水涤至中性，于50℃真空干燥至恒重，研磨过筛得到修饰后石墨烯，备用；(2)溶剂热法制备磁性碳纳米管：称取5.410g三氯化铁和3.475g硫酸亚铁置于250mL平底烧瓶中加入100mL水，60℃下恒温磁力搅拌，全部溶解后...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟世欢，叶佳明，叶磊海，杨娜，苏敏，陈小丽，王京，秦芸桦，
申请(专利权)人：赞宇科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：