T细胞受体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了T细胞受体及其应用，本发明专利技术还公开了相关多肽和蛋白质，以及相关核酸、载体、细胞、组合物和嵌合分子。组合物和嵌合分子。组合物和嵌合分子。

【技术实现步骤摘要】
T细胞受体及其应用


[0001]本专利技术属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及T细胞受体及其应用。

技术介绍

[0002]T淋巴细胞作为人体免疫系统的不可或缺的一大类免疫细胞，对于保护机体免受外来病原微生物的侵染以及维持机体免疫系统平衡具有至关重要的意义。T淋巴细胞经来源于骨髓，且在胸腺激素的诱导下于胸腺微环境中发育成熟形成高度分化的具有免疫活性的免疫细胞。发育成熟的T淋巴细胞随血流进入人体外周免疫器官，并可经淋巴管以及外周血进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。
[0003]目前，肿瘤的治疗方法除了传统的手术、化疗、放疗外，免疫治疗也迅速发展为一种公认的有效方法。免疫治疗当中主要包括抗体疗法以及免疫细胞疗法，其中免疫细胞疗法目前主要包括嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T)和T细胞受体
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T细胞(TCR
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T)，CAR
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T与TCR
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T的抗原识别端都是针对肿瘤抗原靶点而精准设计的(Barrett J.Expanding the antigenic repertoire of CAR
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T cells with"TCR
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like"antibody specificity,[J].Cytotherapy,2016 18(8):929
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930.)。目前，针对CAR
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T细胞免疫治疗，已有报道表明，其在治疗急性和慢性淋巴细胞白血病的临床试验方面已被证实有显著疗效(Ma Q,Garber HR,Lu S,et al.A novel TCR
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like CAR with specificity for PR1/HLA
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A2 effectively targets myeloid leukemia in vitro when expressed in human adult peripheral blood and cord blood T cells.[J]Cytotherapy,2016,18(8):985
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994)。但是，目前的CAR
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T治疗的限制性还是明显存在的，首先CAR
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T可选择靶点有限，对实体瘤的治疗还没有很好的效果。而且CAR
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T治疗带来的不良反应，如细胞因子风暴等有时不易控制。因此，人们需要一种比CAR
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T治疗更好的疗法，能选择更多抗原靶点，并且能够实现对实体瘤治疗达到较好的疗效，且治疗存在的副作用与风险小。随着免疫疗法的迅速发展，针对肿瘤抗原精准设计的TCR
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T细胞疗法与CAR
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T相比较，具备一些明显的优势。首先，TCR
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T可以特异的识别肿瘤抗原，提高T细胞靶向和杀伤肿瘤细胞的能力。另外，TCR
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T疗法抗肿瘤靶标更广，它可以靶向大部分肿瘤特异性抗原，尤其是能识别那些肿瘤细胞内部抗原。T细胞通过T细胞受体识别细胞内部肿瘤抗原以及和递呈在表面的经抗原提成细胞胞吞、降解、加工处理的抗原，通过这种识别机制，可以迅速将遭受侵染的靶细胞杀灭(Golubovskaya V,Berahovich R,Wu L.Major Highlights of the CAR
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TCR Summit,Boston,2016.[J].Anticancer Agents Med Chem,2017,17(10):1344
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1350)。最近的国内外的临床试验表明，TCR
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T免疫治疗技术已对一些实体肿瘤有显著疗效，作为细胞免疫治疗的新方法，其机理明确且具备进行临床转化的技术条件，可实现个体化精准治疗，大大提高对晚期肿瘤的治疗效果，特别是对现有治疗方法失败的肿瘤。因此用于治疗恶性肿瘤的相似技术已分别获得美国食品药品管理监督局(FDA)和欧盟的特别政策以推动其尽快在临床应用。这将为治疗恶性肿瘤开辟一条新的道路，有望治愈更多的肿瘤病人，具有重大意义！现有的证据表明TCR
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T细胞治疗有希望成为治疗一些晚期癌症的新方法。
[0004]自然状态下T细胞受体亲和力比较低下，而且肿瘤细胞存在逃逸机制，比如降低自身MHCI类分子的表达水平，因此寻找有效的肿瘤靶抗原高亲和性的TCR受体和优化TCR
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T细胞的转化效率是目前的研究重点。

技术实现思路

[0005]为了弥补现有技术的不足，本专利技术鉴定出了新的TCR，并进一步确定了TCR的氨基酸序列，包括其CDR区的氨基酸序列，此外，证明了表达根据本专利技术的TCR的T细胞具有杀伤肿瘤细胞的效果。
[0006]因此，本专利技术提供了如下技术方案：
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一方面提供了一种T细胞受体，所述T细胞受体包含CDR3α和CDR3β，所述CDR3α包含SEQ ID NO：包含SEQ ID NO：3
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5任一所示的氨基酸序列；所述CDR3β包含SEQ ID NO：11
‑
13任一所示的氨基酸序列。
[0009]进一步，所述T细胞受体还包含：
[0010]SEQ ID NO：1所示的CDR1α，
[0011]SEQ ID NO：2所示的CDR2α，
[0012]SEQ ID NO：9所示的CDR1β，
[0013]SEQ ID NO：10所示的CDR2β，
[0014]或其具有一个或多个氨基酸取代、添加或缺失的变体。
[0015]进一步，所述T细胞受体还包含：
[0016]α链可变域，其包含SEQ ID NO：6
‑
8任一所示的氨基酸序列或与其具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的变体；
[0017]β链可变域，其包含SEQ ID NO：14
‑
16任一所示的氨基酸序列或与其具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的变体。
[0018]进一步，所述T细胞受体还包含α链/β链界面处的一个或多个突变，使得当在T细胞中表达所述α链和所述β链时，所述链和内源TCRα和β链之间的错配频率减少。
[0019]进一步，所述T细胞受体还包含恒定区。
[0020]本专利技术的第二方面提供了一种核酸分子，所述核酸分子包含编码本专利技术第一方面所述的T细胞受体的核苷酸序列。
[0021]本专利技术的第三方面提供了一种载体，所述载体包含本专利技术第二方面所述的核酸分子。
[0022]进一步，所述载体是病毒载体。
[0023]进一步，所述病毒载体是慢病毒载体或γ逆转录病毒载体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体，其特征在于，所述T细胞受体包含CDR3α和CDR3β，所述CDR3α包含SEQ ID NO：3
‑
5任一所示的氨基酸序列；所述CDR3β包含SEQ ID NO：11
‑
13任一所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的T细胞受体，其特征在于，其还包含：SEQ ID NO：1所示的CDR1α，SEQ ID NO：2所示的CDR2α，SEQ ID NO：9所示的CDR1β，SEQ ID NO：10所示的CDR2β，或其具有一个或多个氨基酸取代、添加或缺失的变体。3.根据权利要求2所述的T细胞受体，其特征在于，其包含：α链可变域，其包含SEQ ID NO：6
‑
8任一所示的氨基酸序列或与其具有至少75％，优选80％，更优选90％序列同一性的变体；β链可变域，其包含SEQ ID NO：14
‑
16任一所示的氨基酸序列或与其具有至少75％，优选80％，更优选90％序列同一性的变体；优选地，所述T细胞受体还包含α链/β链界面处的一个或多个突变，使得当在T细胞中表达所述α链和所述β链时，所述链和内源TCRα和β链之间的错配频率减少；优选地，所述T细胞受体包含具有SEQ ID NO：6
‑
8任一所示的氨基酸序列的α链可变域；和包含SEQ ID NO：14
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16任一所示的氨基酸序列的β链可变域；优选地，所述T细胞受体包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的α链可变域；和包含SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列的β链可变域；优选地，所述T细胞受体还包含恒定区。4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1
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3任一项所述的T细胞受体的核苷酸序列。5.一种载体，其特征在于，包含权利要求4所述的核酸分子；优选地，所述载体是病毒载体；优选地，所述病毒载体是慢病毒载体或γ逆转录病毒载体；优选地，所述载体还包含编码一个或多个CD3链、CD8、自杀基因和/或选择标志物的多核苷酸。6.一种细胞，其特征在于，包含权利要求1
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3中任一项所述的T细胞受体，权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的载体；优选地，所述细胞进一步包含编码一个或多个CD3链、CD8、自杀基因和/或选择标志物的载体；优选地，其中所述细胞是T细胞、淋巴细胞或...

【专利技术属性】
技术研发人员：王智鼎，于力，
申请(专利权)人：深圳大学总医院，
类型：发明
国别省市：