三肽及其在制备改善记忆的药品和保健品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种三肽在制备改善记忆的药品和保健品中的应用。该多肽的氨基酸序列是Pro

【技术实现步骤摘要】
三肽及其在制备改善记忆的药品和保健品中的应用


[0001]本专利技术涉及一种三肽及其在制备改善记忆的药品和保健品中的应用。

技术介绍

[0002]生物活性肽经口服进入机体后面临着被蛋白酶或肽酶降解的可能，以及多种生理屏障的阻碍，其中，胃肠道消化系统是第一道屏障。生物活性肽极易被胃蛋白酶和胰蛋白酶所降解，这也是蛋白多肽类药物失去生物活性的主要原因。研究表明，胃肠道消化对于多肽的生理活性有显著影响，采用体外方法评估具有较好生理活性的多肽，进入体内后生理活性会降低。
[0003]小肠粘膜系统是多肽吸收的一道生理屏障，由小肠上皮细胞和黏液层组成。多肽需要被小肠上皮细胞所摄取从而进入血液循环或靶器官，进而发挥生理作用。此外，小肠上皮细胞一般通过PepT1介导的转运途径、紧密蛋白介导的胞外途径和囊泡介导的转胞吞途径等途径来介导多肽的吸收转运。因此，多肽在胃肠道消化中的稳定性是多肽以序列完整的形式进入小肠上皮细胞的吸收的前提。同时，近年来，多肽能否透过小肠吸收屏障从而进入体循环成为活性肽领域的研究热点。
[0004]睡眠影响精神和身体状态，包括代谢稳态，突触可塑性和神经元功能。随着工作压力的增加，睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)、睡眠不足或睡眠抑制在现代社会中是普遍存在的现象，长期睡眠剥夺会影响学习和工作、记忆、认知能力和脑功能。在睡眠剥夺期间，人们的工作能力、认知功能下降，情绪焦躁。越来越多的研究表明，睡眠不足会诱发海马依赖性记忆障碍，导致突触减少、改善突触可塑性、是导致神经退行性疾病如阿尔茨海默症(Alzheimer's disease，AD)、帕金森症(Parkinson's disease，PD)等的因素之一。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种具有改善记忆功效的三肽，及其在制备相关药品和保健品中的应用。
[0006]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0007]一种三肽，其氨基酸序列为Pro
‑
Pro
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Trp(PPW)，可通过固相合成法合成。
[0008]本专利技术的三肽PPW具有抗胃肠道消化特性，且能以完整的形式透过caco
‑
2肠系膜屏障。
[0009]本专利技术的三肽对睡眠剥夺小鼠的记忆障碍具有改善作用，且呈剂量依赖特性，可以用于制备改善记忆的药品和保健品。本专利技术的三肽通过抑制谷氨酸诱导的神经细胞损伤来发挥神经保护作用；
[0010]所述的神经保护作用，包括降低谷氨酸诱导的细胞存活率下降。
[0011]所述的神经细胞是人神经母细胞瘤细胞(SH
‑
SY5Y细胞)。
[0012]所述的改善记忆的药品和保健品还包含其他具有改善记忆的活性成分和/或可接受的辅料，按照常规工艺制成可接受的用于改善记忆的药品或保健品。
[0013]所述的改善记忆的药品和保健品可以是固体制剂或液体制剂。其中固体制剂可以为胶囊、片剂、粉剂、颗粒剂；液体制剂可以是乳液、口服液。
[0014]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0015]本专利技术三肽的结构明确，可以采用固相化学方法直接合成。该三肽能够抵御胃肠道消化，且能以完整的形式被小肠上皮细胞吸收，能改善谷氨酸诱导的神经细胞存活率下降和小鼠睡眠剥夺诱导的记忆障碍，既能单独应用于制备改善记忆的药品或保健品，又能与现有的改善记忆活性成分共同组合应用于制备改善记忆的药品或保健品。
附图说明
[0016]图1是PPW经胃肠道消化前后的UPLC
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MS/MS的TIC图。
[0017]图2是不同抑制剂对PPW在caco
‑
2细胞中吸收转运的影响。
[0018]图3是PPW对谷氨酸诱导的SH
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SY5Y细胞的细胞存活率的影响。
[0019]图4是睡眠剥夺小鼠空间探索试验的典型游泳轨迹。
具体实施方式
[0020]下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。
[0021]实施例1
[0022]固相合成法合成多肽PPW，包括以下步骤：将二氯树脂溶胀、洗涤，脱除Fmoc保护基，加入多肽的组成氨基酸进行缩合反应，重复脱除
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保护
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缩合的过程直至所有氨基酸连接完毕。用反相高效液相色谱法纯化，得到多肽纯品(>95％)。
[0023]实施例2多肽的胃肠道消化特性
[0024]采用INFOGEST静态体外模拟胃肠道消化评估本专利技术三肽的胃肠道消化特性。将模拟胃液(SGF)和CaCl2(0.3M)与三肽混合均匀，置于锥形瓶中。将混合物的pH值调节至3.0，并添加胃蛋白酶(酶终活为2000U/mL)，并重新校正pH值，将锥形瓶置于37℃的恒温水浴摇床中振荡孵育2小时。随后，将混合物的pH调节至7.0，并通过向混合物中加入模拟肠液(SIF)和CaCl2进行肠消化。添加胰酶(终酶活为100U/mL)和胆汁(10mM)启动肠道消化，并将混合物置于恒温水浴摇床中振荡孵育2小时，然后在90℃加热10分钟以灭活酶。收集样品，采用UPLC/MS/MS进行进一步分析。
[0025]如图1所示，模拟胃肠道消化对PPW的结构没有显著影响，经胃肠道消化后，PPW的稳定性为94.05％，说明PPW对胃蛋白酶和胰蛋白酶具有很强的抗性。
[0026]实施例3三肽在caco
‑
2细胞中的吸收转运
[0027]将caco
‑
2细胞采用添加了10％FBS，100U/mL青霉素和100mg/mL链霉素的DMEM培养，并置于37℃，含有5％CO2的培养箱中培养。对于细胞毒性分析，将细胞以1
×
105细胞/mL的密度接种于96孔板，24小时后更换含有本专利技术三肽的培养基继续孵育24小时，随后加入CCK
‑
8试剂继续孵育。采用酶标仪在450nm的波长处测量吸光度。
[0028]将Caco
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2细胞以1
×
105细胞/mL的密度播种在transwell孔板(0.4μm)中。每2天更换一次培养基，培养21天。采用Millicell
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ERS
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2评估跨上皮电阻(TEER)值。用于运输实验的caco
‑
2单层细胞的TEER值高于400Ω/cm2。
[0029]采用HBSS清洗细胞3次后，将caco
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2细胞与HBSS孵育30分钟。对于抑制试验，除去培养基后，采用Gly
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sar(10mM，PepT1抑制剂)，细胞松弛素D(0.5μg/mL，紧密连接破坏物)和渥曼青霉素(0.5μM，转胞吞作用抑制剂)分别孵育0.5h，随后用HBSS清洗，将AP侧替换为新鲜的肽(4mM，溶于HBSS)，将BL侧更换为的新鲜的HBSS。将细胞在37℃下孵育2小时。收本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三肽，其特征在于氨基酸序列为Pro
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Pro
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Trp(PPW)。2.权利要求1所述的三肽在制备改善记忆的药品和保健品中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的药品和保健品还包含其他具有改善记忆的活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵谋明，于建洋，杨青，王金梅，位正鹏，苏国万，张琪，曾海英，沈源庆，沈萍萍，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：