四种肠道保护菌的检测方法及核酸检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了四种肠道保护菌的检测方法及核酸检测试剂盒，四种肠道保护菌即假小链双歧杆菌、丁酸梭菌、干酪乳酸杆菌和艾克曼菌。本发明专利技术以上述四种肠道保护菌的16S rRNA的高度保守区为靶区域，通过设计筛选特异性引物及探针，建立了可同时检测上述四种肠道保护菌的检测方法和检测试剂盒。所述肠道保护菌的检测方法与传统的细菌鉴定方法相比，具有特异性强，灵敏度高，操作便捷，检测快速、准确等优势，可用于实际样本中肠道保护菌的定性检测。用于实际样本中肠道保护菌的定性检测。用于实际样本中肠道保护菌的定性检测。

【技术实现步骤摘要】
四种肠道保护菌的检测方法及核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术属于肠道微生物检测
更具体地，涉及四种肠道保护菌的检测组合物、检测方法及核酸检测试剂盒(PCR
‑
荧光探针法)。

技术介绍

[0002]肠道微生物对生物体的物质代谢、能量流动以及信号传导等有重要的调控作用，并且对动物的饮食、营养、免疫、神经调节以及慢性疾病的产生有重要的影响。对肠道微生物进行深入细致的研究是理解各种慢性疾病及免疫与病原微生物疾病发生机理的重要的方式方法。
[0003]2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus，T2DM)是临床常见的一种代谢性疾病，机体多发生糖脂代谢紊乱，导致患者血糖长时间处于较高水平，对其身体健康造成严重影响。2型糖尿病的发生原因不仅限于饮食结构和运动量的变化，还和肠道菌群有着密不可分的关系，目前对肠道菌群的研究已成为防治2型糖尿病世界研究热点。研究发现，糖尿病与肠道菌群的数量发展有着一定的相关性，当血糖值偏高时，肠道内的假小链双歧杆菌(Bifidobacteriumpseudocatenulat本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.四种肠道保护菌的检测组合物，其特征在于，包含检测假小链双歧杆菌、丁酸梭菌、干酪乳酸杆菌和艾克曼菌的多重qPCR引物和探针；其中，检测假小链双歧杆菌、丁酸梭菌、艾克曼菌的上游引物分别为Bi.p
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F、Clo.b
‑
F和AK.m
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F，其序列依次如SEQ ID NO.1～3所示，检测假小链双歧杆菌、丁酸梭菌、艾克曼菌的下游引物为Bi.p
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R，其序列如SEQ ID NO.4所示；检测干酪乳酸杆菌的上下游引物Lac.c
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F/R序列依次如SEQ ID NO.5～6所示；检测小链双歧杆菌、丁酸梭菌、艾克曼菌和干酪乳酸杆菌的探针分别为Bi.p
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P、Clo.b
‑
P、AK.m
‑
P和Lac.c
‑
P，其序列依次如SEQ ID NO.7～10所示；上述探针的5
’
端标记有不同的荧光发射基团，3
’
端标记有淬灭基团。2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，Bi.p
‑
P的5
’
端荧光发射基团为FAM，3
’
淬灭基团为BHQ1；Clo.b
‑
P的5
’
端荧光发射基团为VIC，3
’
淬灭基团为BHQ1；Lac.c
‑
P的5
’
端荧光发射基团为TEXAS RED，3
’
淬灭基团为BHQ2；AK.m
‑
P的5
’
端荧光发射基团为CY5，3
’
淬灭基团为BHQ2。3.假小链双歧杆菌、丁酸梭菌、干酪乳酸杆菌和艾克曼菌四种肠道保护菌的检测方法，其特征在于，提取待测样本中的核酸作为模板，加入含有权利要求1所述检测组合物的反应体系中进行多重荧光PCR反应，通过不同荧光通道的多重qPCR反应结果判断所测样本中是否含有假小链双歧杆菌、丁酸梭菌、干酪乳酸杆菌和/或艾克曼菌，阳性检测结果的判断依据为对应荧光通道内出现扩增曲线且Ct值≤38。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，多重荧光PCR反应的反应体系为：待检...

【专利技术属性】
技术研发人员：方鹏宇，郭红辉，
申请(专利权)人：广东君道营养科技有限公司，
类型：发明
国别省市：