一种快速鉴定脑膜炎奈瑟菌血清群的组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种基于熔解曲线的脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W135、脑膜炎奈瑟菌血清群X和脑膜炎奈瑟菌血清群Y核酸检测的组合物，所述组合物包括用于检测脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B和脑膜炎奈瑟菌血清群C的核酸序列，不需较昂贵的探针合成即可完成检测，本发明专利技术提供的试剂盒操作简便，适应性好，成本较低。成本较低。成本较低。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定脑膜炎奈瑟菌血清群的组合物
[0001]
：本专利技术属于生物检测
，特别涉及一种快速鉴定脑膜炎奈瑟菌血清群的组合物。
[0002]
技术介绍
：脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎的病原体。一般通过呼吸道传播所引起，常在冬末春初季节发病最为流行。人类是其唯一的宿主，可定植在人类的鼻咽部粘膜上。患者以儿童多见，流行是成年人发病亦增多。按表面特异性荚膜多糖抗原的不同可分为A、B、C、229E、H、I、K、L、W135、X、Y、Z 12个血清群，其中A、B、C 3个是人类的主要致病血清群。我国流行菌株原以A群为主，近年来C群在某些省份已成为发病的优势菌群，并在一些省份发现由W135引起的病例。
[0003]脑膜炎奈瑟菌分型的实验室检测方法目前主要有病原学诊断、免疫学检测、核酸检测等。其中核酸检测包括普通PCR法、荧光PCR法（Real
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Time PCR，RT
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PCR）、等温扩增法等技术。RT
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PCR具有速度快、通量高、灵敏度高、特异性强等突出优势，从而成为最主要手段的临床诊断方法，辅助细菌分离培养和血清学检测细菌。虽然RT
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PCR方法检测灵敏度高于其他检测手段，但传统的单通道检测通量低，针对同一个样本需要使用多组引物和探针组合进行多次检测以确定细菌型别。目前也有部分基于不同颜色基团标记TaqMan或MGB探针的细菌核酸检测试剂盒，但此类试剂盒都需要标记不同颜色基团的探针，尚没有一种试剂盒能够在一个反应体系中的两个荧光通道同时检出目前已知的脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W135、脑膜炎奈瑟菌血清群X和脑膜炎奈瑟菌血清群Y，方法建立的新型基于熔解曲线的脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W135、脑膜炎奈瑟菌血清群X和脑膜炎奈瑟菌血清群Y核酸检测试剂盒弥补了这一不足。
[0004]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0005]
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种快速鉴定脑膜炎奈瑟菌血清群的组合物，从而克服上述现有技术中的缺陷。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了一种包括：如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所述的脑膜炎奈瑟菌血清群A引物，以及如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所述的脑膜炎奈瑟菌血清群A探针；如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所述的脑膜炎奈瑟菌血清群B引物，以及如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所述的脑膜炎奈瑟菌血清群B探针；如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所述的脑膜炎奈瑟菌血清群C引物，以及如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所述的脑膜炎奈瑟菌血清群C探针；如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所述的脑膜炎奈瑟菌血清群W135引物，以及如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所述的脑膜炎奈瑟菌血清群W135探针；
如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所述的脑膜炎奈瑟菌血清群X引物，以及如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所述的脑膜炎奈瑟菌血清群X探针；如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所述的脑膜炎奈瑟菌血清群Y引物，以及如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所述的脑膜炎奈瑟菌血清群Y探针。
[0007]优选地，上述技术方案中，脑膜炎奈瑟菌血清群A的检出限 为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群B的检出限为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群C的检出限为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群W135的检出限 为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群X的检出限为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群Y的检出限为1000 copies/mL。
[0008]一种PCR试剂盒，包括PCR引物、缓冲液和聚合酶混合液， PCR引物包括前文所述的组合物。
[0009]如前文所述的组合物在制备检测脑膜炎奈瑟菌血清群用PCR试剂盒中的应用。
[0010]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的基于熔解曲线的脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W135、脑膜炎奈瑟菌血清群X和脑膜炎奈瑟菌血清群Y核酸检测的组合物及试剂盒，具有如下有益效果：1、能够在一个反应体系中的两个荧光通道同时检出脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W135、脑膜炎奈瑟菌血清群X和脑膜炎奈瑟菌血清群Y；一次检测即可以对脑膜炎奈瑟菌血清群进行分型检测；2、不需较昂贵的探针合成即可完成检测，本专利技术提供的试剂盒操作简便，适应性好，成本较低；3、在检测其他病原时没有交叉反应，具有很强的特异性；脑膜炎奈瑟菌血清群A的检出限 为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群B的检出限为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群C的检出限为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群W135的检出限 为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群X的检出限为1000 copies/mL，脑膜炎奈瑟菌血清群Y的检出限为1000 copies/mL，检出限低，灵敏度高。
[0011]附图说明：图1为判定为脑膜炎奈瑟菌血清群B核酸阳性示意图；图2为判定为脑膜炎奈瑟菌血清群X核酸阳性示意图；图3为判定为脑膜炎奈瑟菌血清群Y核酸阳性示意图；图4为判定为脑膜炎奈瑟菌血清群W135核酸阳性示意图；图5为判定为脑膜炎奈瑟菌血清群A核酸阳性示意图；图6为判定为脑膜炎奈瑟菌血清群C核酸阳性示意图。
[0012]具体实施方式：下面对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
实施例
[0013]本专利技术根据脑膜炎奈瑟菌血清群A/B/C/W135/X/Y的特异性基因设计24条特异性引物和探针，利用实时荧光PCR结合熔解曲线技术，对脑膜炎奈瑟菌血清群A/B/C/W135/X/Y进行分型检测。
[0014]本专利技术提供的一种基于熔解曲线的脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B、脑膜炎奈瑟菌血清群C、脑膜炎奈瑟菌血清群W135、脑膜炎奈瑟菌血清群X和脑膜炎奈瑟菌血清群Y核酸检测的组合物，所述组合物包括用于检测脑膜炎奈瑟菌血清群A、脑膜炎奈瑟菌血清群B和脑膜炎奈瑟菌血清群C的核酸序列，其中，针对脑膜炎奈瑟菌血清群A引物和探针、脑膜炎奈瑟菌血清群B引物和探针、脑膜炎本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定脑膜炎奈瑟菌血清群的组合物，其特征在于：包括：如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所述的脑膜炎奈瑟菌血清群A引物，以及如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所述的脑膜炎奈瑟菌血清群A探针；如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所述的脑膜炎奈瑟菌血清群B引物，以及如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所述的脑膜炎奈瑟菌血清群B探针；如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所述的脑膜炎奈瑟菌血清群C引物，以及如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所述的脑膜炎奈瑟菌血清群C探针；如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所述的脑膜炎奈瑟菌血清群W135引物，以及如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所述的脑膜炎奈瑟菌血清群W135探针；如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所述的脑膜炎奈瑟菌血清群X引物，以及如SEQ ID NO.19和SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丽丽，李伟伟，张梅梅，钱俐，李秀林，杨静，王政峰，曹新文，崔东明，黄姣，周凯月，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：